NY/T 675-2003轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測大豆定性PCR方法

犐犆犛６５．０２０．９９

犅２０

中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

犖犢／犜６７５—２００３

轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測

大豆定性犘犆犚方法

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２００３０４０１發(fā)布２００３０５１５實施

中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布

書

中華人民共和國農(nóng)業(yè)

行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測

大豆定性犘犆犚方法

ＮＹ／Ｔ６７５—２００３

中國標(biāo)準(zhǔn)出版社出版

北京復(fù)興門外三里河北街１６號

郵政編碼：１０００４５

電話：６８５２３９４６６８５１７５４８

中國標(biāo)準(zhǔn)出版社秦皇島印刷廠印刷

新華書店北京發(fā)行所發(fā)行各地新華書店經(jīng)售

開本８８０×１２３０１／１６印張１／２字?jǐn)?shù)１０千字

２００３年５月第一版２００３年５月第一次印刷

印數(shù)１－１０００

書號：１５５０６６·２１５１２３

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版權(quán)專有侵權(quán)必究

舉報電話：（０１０）６８５３３５３３

書

犖犢／犜６７５—２００３

前言

本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部科技教育司提出。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)、上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)所、農(nóng)業(yè)部科技發(fā)展

中心。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：羅云波、黃昆侖、張大兵、賈士榮、彭于發(fā)、金蕪軍、李寧、汪其懷。

本標(biāo)準(zhǔn)首次發(fā)布。

Ⅰ

書

犖犢／犜６７５—２００３

轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測大豆定性犘犆犚方法

１范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了轉(zhuǎn)基因大豆及其產(chǎn)品的定性ＰＣＲ檢測方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于轉(zhuǎn)基因抗草甘膦大豆及其產(chǎn)品、轉(zhuǎn)基因抗草丁膦大豆及其產(chǎn)品、轉(zhuǎn)基因高油酸大豆及

其產(chǎn)品，包括大豆種子、大豆、豆粕、大豆粉、大豆油及其他大豆制品中轉(zhuǎn)基因成分的定性ＰＣＲ檢測。

２規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有

的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究

是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適合于本標(biāo)準(zhǔn)。

ＮＹ／Ｔ６７２轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測通用要求

ＮＹ／Ｔ６７４轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測ＤＮＡ提取和純化

３原理

針對轉(zhuǎn)基因抗草甘膦大豆（ＧＴＳ４０３２）含有的犆犪犕犞３５犛啟動子、狀狅狊終止子、矮牽?；ǖ臓脿誀校?、

犆狆４犲狆狊狆狊基因以及大豆內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因犾犲犮狋犻狀，設(shè)計特異性引物進(jìn)行ＰＣＲ擴增，以檢測試樣中是否含有轉(zhuǎn)

基因抗草甘膦大豆的成分。轉(zhuǎn)基因抗草丁膦大豆和轉(zhuǎn)基因高油酸大豆含有共同的元件犆犪犕犞３５犛啟動

子基因以及內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因犾犲犮狋犻狀，用上述的引物進(jìn)行ＰＣＲ擴增以檢測試樣中是否含有轉(zhuǎn)基因抗草丁膦大

豆和轉(zhuǎn)基因高油酸大豆的成分。

４試劑與材料

除非另有說明，在分析中僅使用分析純試劑；配制好的溶液經(jīng)高溫滅菌后使用。

４．１各１０ｍｍｏｌ／Ｌ的四種脫氧核糖核苷酸（ｄＡＴＰ，ｄＣＴＰ，ｄＧＴＰ，ｄＴＴＰ）混合溶液。

４．２１０ｍｏｌ／Ｌ氫氧化鈉溶液：稱取氫氧化鈉８０ｇ，先用１６０ｍＬ水溶解后，再加水定容到２００ｍＬ。

４．３５００ｍｍｏｌ／Ｌ乙二胺四乙酸二鈉鹽（ＥＤＴＡ）溶液：稱取乙二胺四乙酸二鈉１８．６ｇ，加入７０ｍＬ水

中，再加入１０ｍｏｌ／Ｌ氫氧化鈉溶液，加熱溶解后，冷卻至室溫，再用１０ｍｏｌ／Ｌ氫氧化鈉溶液調(diào)ｐＨ至

８．０，用水定容到１００ｍＬ，在１０３．４ｋＰａ滅菌２０ｍｉｎ。

４．４５０×ＴＡＥ緩沖液：稱?。裕颍椋螅玻矗玻玻?，先用３００ｍＬ水加熱攪拌溶解后，加１００ｍＬ５００