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文檔簡介

環(huán)素。PCR酶的酶切位點,其中切割位點一樣的酶不重復標注。請答復以下問題:【考點定位】基因工程,限制酶,連接酶,重組質粒【名師點睛】此題是對基因工程的考察,解答此題的關鍵在于理解重組質粒中標記基因的作用,在插入目的基因時不能破壞標記基因,應選擇限制酶須留意;PCR方向相反;限制酶具有特異性,不同的限制酶識別不同的序列,推斷某種限制酶能否切割某片段,應依據(jù)該用圖中質粒和目的基因構建重組質粒,應選用 兩種限制酶切割,酶切后的載體和目的基因片段,通過 酶作用后獲得重組質粒。為了擴增重組質粒,需將其轉入處的大腸桿菌。為了篩選出轉入了重組質粒的大腸桿菌,應在篩選平板培育基中添加 ,平板上長出的菌落,常用PCR鑒定,所用的引物組成為圖2中 。假設BamHI酶切的DNA末端與BclI酶切的DNA末端連接,連接部位的6個堿基對序列為 ,對于該部位,這兩種酶 〔填“都能“都不能”或“只有一種能〕切開。假設用Sau3AI切圖1質粒最多可能獲得 種大小不同的DNA片段。【答案〔1〕BclI和HindⅢ連接感受〔2〕四環(huán)素 引物甲和引物丙〔3〕 都不能 〔4〕7〔2〕為了篩選出轉入了重組質粒的大腸桿菌,依據(jù)質粒上的抗性基因,應在篩選平板培育基中添加四

片段中是否含有限制酶的識別序列。2.〔20231.40〕某一質粒載體如下圖,外源DNAAmprTetr中會導致相應的基因失活AmprTer表示四環(huán)素抗性基因BamHIBamHI酶切獲得的目的基因混合,參加DNA菌有的未被轉化,有的被轉化。被轉化的大腸桿菌有三種,分別是含有環(huán)狀目的基因、含有質粒載體、含有插入了目的基因的重組質粒的大腸桿菌。答復以下問題:質粒載體作為基因工程的工具,應具備的根本條件有 〔答出兩點即可。而作為基因表達載體,除滿足上述根本條件外,還需具有啟動子和終止子。假設用含有氨芐青霉素的培育基進展篩選,在上述四種大腸桿菌細胞中,未被轉化的和僅含有環(huán)狀目的基因的細胞是不能區(qū)分的,其緣由是 ;并且 和 細胞也是不能區(qū)分的,其緣由是 。在上述篩選的根底上,假設要篩選含有插入了目的基因的重組質粒的大腸桿菌的單菌落,還需使用含有是 的固體培育基?;蚬こ讨?,某些噬菌體經改造后可以作為載體,其DNA復制所需的原料來自于 〔1〕能夠自我復制、具有標記基因、具有一個至多個限制酶切割位點〔答出兩點即可〕二者均不含氨芐青霉素抗性基因,在該培育基上都不能生長 含有質粒載體 含有插入了目的基因的重組質粒〔或答含有重組質?!?二者都含氨芐青霉素抗性基因,在該培育基上均能生長四環(huán)素受體細胞

經BamHI酶切割得到的目的基因可以與上述表達載體被 酶切后的產物連接,理由是 ?;虻闹亟M子,如圖〔c〕所示。這三種重組子中,不能在宿主細胞中表達目的基因產物的有 ,不能表達的緣由是 。DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶,常見的有 和 ,其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是 ?!究键c定位】基因工程【名師點睛】此題以圖文結合的形式,綜合考察同學對基因工程技術的熟記和理解力氣。解決此類問題的關鍵是,熟記并理解相關的根底學問、形成學問網絡,從題圖中挖掘出隱含的信息,據(jù)此結合每個

【答案〔1〕Sau3AⅠ 兩種梅切割后產生的片段具有一樣的黏性末端甲和丙 甲中目的基因插入在啟動子的上游, 丙中目的基因插入在終止子的下游,兩者目的基因均不能轉錄E·coliDNA連接酶 TDNA連接酶 TDNA連接酶4 4問題情境進展圖文轉換、實現(xiàn)對學問的整合和遷移。3.〔2023.40〕圖〔a〕中的三個DNAEcoRI、BamHISau3AI種限制性內切酶的識別序列與切割位點,圖〔b〕為某種表達載體示意圖〔載體上的EcoRI、Sau3AI的切點是唯一的〕?!究键c定位】基因工程的原理及技術【名師點睛】1.確定限制酶的種類依據(jù)基因工程的有關學問,答復以下問題:A.人血細胞啟動子 B.水稻胚乳細胞啟動子C.大腸桿菌啟動子D.農桿菌啟動子〔3〕利用農桿菌轉化水稻受體細胞的過程中需添加酚類物質其目的是 。依據(jù)目的基因兩端的限制酶切點確定限制酶的種類①應選擇切點位于目的基因兩端的限制酶,如圖甲可選擇PstⅠ。②不能選擇切點位于目的基因內部的限制酶,如圖甲不能選擇SmaⅠ。③為避開目的基因和質粒的自身環(huán)化和任憑連接,也可使用不同的限制酶切割目的基因和質粒,如圖甲也可選擇用PstEcoRⅠ兩種限制酶(但要確保質粒上也有這兩種酶的切點)。依據(jù)質粒的特點確定限制酶的種類①所選限制酶要與切割目的基因的限制酶相全都,以確保具有一樣的黏性末端。SmaⅠ會破壞標記基因;假設所選酶的切點不止一個,則切割重組后可能喪失某些片段,假設喪失的片段含復制起點區(qū),則切割重組后的片段進入受體細胞后不能自主復制。2.基因表達載體中啟動子、終止子的來源假設目的基因是從自然界中已有的物種中分別出來的,在構建基因表達載體時,不需要在質粒上目的基因的前后端接上特定的啟動子、終止子,由于目的基因中已含有啟動子、終止子。假設目的基因是通過人工方法合成的,或通過cDNA的。假設只將基因的編碼序列導入受體生物中,目的基因沒有啟動子、終止子,是無法轉錄的,因此,在構建基因表達載體時,需要在與質粒結合之前,在目的基因的前后端接上特定的啟動子、終止子。(12(HSA)基因工程技術獵取重組HSA〔rHSA〕的兩條途徑。獵取HSA基因,首先需采集人的血液,提取 合成總cDNA,然后以cDNA為模板,承受PCR技術擴增HSA基因。以下圖中箭頭表示一條引物結合模板的位置及擴增方向,請用箭頭在方框內標出標出另一條引物的位置及擴增方向。啟動子通常具有物種及組織特異性,構建在水稻胚乳細胞內特異表達rHSA的載體,需要選擇的啟動子是 〔填寫字母,單項選擇。

人體合成的初始HSA多肽需要經過膜系統(tǒng)加工形成正確的空間構造才能有活性與途徑II相比,選擇途徑I獵取rHSA的優(yōu)勢是 。為證明rHSA具有醫(yī)用價值,須確認rHSA與 的生物學功能全都?!?2分〔〕總RNA〔或mRN〕〔2〕B吸引農桿菌移向水稻受體細胞,有利于目的基因成功轉化水稻是真核生物,具有膜系統(tǒng),能對初始rHSAHAS【考點定位】此題考察基因工程相關內容?!久麕燑c睛】此題結合生產rHSA細胞的選擇、目的基因的檢測與鑒定。屬于簡潔題。解題關鍵是明確PCR置和合成子鏈的方向相反。5.〔2023課標2卷.40)〔15分〕以下圖表示通過核移植等技術獲得某種克隆哺乳動物〔二倍體〕的流程。答復以下問題:圖中A表示正常細胞核,染色體數(shù)為2n,則其性染色體的組成可為 。過程①表示去除細胞核,該過程一般要在卵母細胞培育至適當時期再進展,去核時常承受 的方法。②代表的過程是 。經過屢次傳代后,供體細胞中 的穩(wěn)定性會降低,因此,選材時必需關注傳代次數(shù)。假設獲得的克隆動物與供體動物性狀不完全一樣,從遺傳物質的角度分析其緣由。與克隆羊“多莉〔利〕”培育成功一樣,其他克隆動物的成功獲得也證明白 ?!敬鸢浮俊?5分〕〔1〕XX或XY 顯微操作〔去核法〕 胚胎移植遺傳物質卵母細胞的細胞質中的遺傳物質會對克隆動物的外形產生影響已經分化的動物體細胞核具有全能性。【考點定位】核移植技術、動物細胞培育技術、胚胎移植【名師點睛】此題以“獲得某種克隆哺乳動物〔二倍體〕的流程圖”為情境,綜合考察同學對核移植技術、動物細胞培育技術、胚胎移植的熟記和理解力氣。解決此類問題的關鍵是,熟記并理解相關的根底學問、形成學問網絡對學問的整合和遷移。6.〔2023.31〕基因工程又稱為DNA在基因工程中,獵取目的基因主要有兩大途徑,即 和從 中分別。有的基因數(shù)目比基因組文庫中的少,其緣由是 。在基因表達載體中,啟動子是 聚合酶識別并結合的部位。假設承受原核生物作為基因表達載

體的受體細胞,最常用的原核生物是 。將目的基因通過基因槍法導入植物細胞時常用的攜帶目的基因的金屬顆粒有 和 顆粒?!?5〕人工合成 生物材料〔每空2分,共4分,其他合理答案可酌情給分〕cDNA〔或已表達〕的基因,而基因組文庫中含有該植物的全部基因分,其他合理答案可酌情給分〕RN2分〕 大腸桿菌〔或答細菌2分〕金粉 鎢粉〔每空1分,共2分〕【考點定位】基因工程〔1〕目的基因的獵取有從基因文庫中獵取和人工合成兩類方法。基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因。目的基因導入植物細胞常用農桿菌轉化法;導入動物細胞常用顯微注射技術,導入微生物細胞常用感受態(tài)細胞法。7.〔2023〕答復以下有關遺傳信息傳遞與表達的問題。27PZHZ11〔3.6kb,1kb=1000〕中,lacZ基因編碼β-半乳糖苷酶,后者催化生成的化合物能將白色的大腸桿菌染成藍色。假設先用限制酶BamHIpZHZ11,然后滅活BamHIDNA入足夠數(shù)量的大腸桿菌細胞中,則含3.1kb3.6kb假設將兩端分別用限制酶BamHIBglHIpZHZ110.5kbBamHI4.9kbkb。4.9kbBamHIEcoRI1.7kb3.2kbDNAkbkbDNA假設將人的染色體DNA入植物細胞中表達,最終將產物的藥物蛋白注入小鼠體內觀看其生物功能是否發(fā)揮,那么上述過程屬于

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