微生物培養(yǎng)標(biāo)本采集與送檢

微生物培養(yǎng)標(biāo)本采集與送檢第一頁，共三十七頁，2022年，8月28日

檢驗科的工作就像法醫(yī)，法醫(yī)是為公安提供證據(jù)，而檢驗科是為臨床醫(yī)生診斷、治療提供依據(jù)。數(shù)據(jù)直接影響醫(yī)生的診斷，所以檢驗結(jié)果是否準(zhǔn)確的重要性不言而喻。

如何看待微生物檢驗工作

第二頁，共三十七頁，2022年，8月28日俗話說“巧婦難為無米之炊”，如果送檢的標(biāo)本本身就有問題，再先進的設(shè)備、再高的檢測技術(shù)，結(jié)果可謂“差之毫厘，謬之千里”。由此可見，檢驗結(jié)果的質(zhì)量控制非常地重要。質(zhì)量是檢驗科之本，質(zhì)量控制目的就是要有一個質(zhì)量可靠的檢驗結(jié)果質(zhì)量控制第三頁，共三十七頁，2022年，8月28日實驗室質(zhì)量控制環(huán)節(jié)標(biāo)本采集、運送標(biāo)本合格判定培養(yǎng)基、試劑儀器設(shè)備

危急值報告

分析前

分析中

分析后第四頁，共三十七頁，2022年，8月28日實驗室不同階段誤差發(fā)生率

第五頁，共三十七頁，2022年，8月28日定義:按時間順序，從臨床醫(yī)生開出檢驗醫(yī)囑開始，到檢驗分析過程開始時終止的步驟，包括檢驗要求、患者準(zhǔn)備、原始樣本采集、運送到實驗室并在實驗室內(nèi)部的傳輸。分析前質(zhì)量控制是最易出現(xiàn)問題、也是最難控制的環(huán)節(jié)。標(biāo)本采集是分析前質(zhì)量控制最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)！何謂分析前程序？

第六頁，共三十七頁，2022年，8月28日1.早期采集（使用抗菌藥物之前）2.無菌采集3.及時送檢4.容器無菌無消毒劑5.標(biāo)明來源和檢驗?zāi)康牟杉幕驹瓌t

第七頁，共三十七頁，2022年，8月28日

臨床標(biāo)本的分類

帶菌體液無菌體液痰液血液咽拭子腦脊液糞便胸腹水、膽汁其他類別其他類別第八頁，共三十七頁，2022年，8月28日血液屬于天然的無菌體液，血流感染的細菌種類往往比較單一，血培養(yǎng)結(jié)果對于明確診斷意義重大。同時，血培養(yǎng)的檢測結(jié)果受標(biāo)本采集及運送干擾的影響較小，更容易進行質(zhì)量控制。痰液、尿液、糞便等標(biāo)本屬于非無菌標(biāo)本，有較多的正常菌群生長，且檢測結(jié)果受采集方法，運送方式等多方面的因素影響，其檢測結(jié)果對明確診斷的意義相對較小。無菌體液是最有意義的病原學(xué)檢測標(biāo)本各類標(biāo)本的區(qū)別第九頁，共三十七頁，2022年，8月28日我院標(biāo)本送檢情況

第十頁，共三十七頁，2022年，8月28日近兩年標(biāo)本錯誤率時間

14年下

15年全年

16年上合

計

錯誤率數(shù)量（涂片+培養(yǎng)）12018例30439例16774例59231例

原因標(biāo)本類型：標(biāo)本與條碼不符223例0.376%其它：非標(biāo)準(zhǔn)痰液、無條碼、標(biāo)本污染、無標(biāo)本150例0.253%第十一頁，共三十七頁，2022年，8月28日1.手衛(wèi)生（洗手或衛(wèi)生手消毒）2.皮膚消毒程序嚴(yán)格執(zhí)行以下三步法:（1）用75%酒精擦拭靜脈穿刺部位待30s以上；（2）然后用1%-2%碘酊作用30秒或10%碘伏作用60秒，從穿刺點向外畫圈消毒，至消毒區(qū)域直徑達3cm以上；（3）最后用75%酒精脫碘，待酒精揮發(fā)干燥后采血。新生兒及對碘過敏的患者，只能用75%酒精消毒60s，待穿刺部位酒精揮發(fā)干燥后穿刺采血。1.血培養(yǎng)標(biāo)本采集：第十二頁，共三十七頁，2022年，8月28日2.培養(yǎng)瓶消毒程序：70%乙醇擦拭血培養(yǎng)瓶橡皮塞，作用60秒后用無菌棉簽清除塞子表面乙醇3、用注射器無菌穿刺取血后直接注入血培養(yǎng)瓶（切勿換針頭）或嚴(yán)格按廠家推薦的方法采血，輕輕顛倒混勻防止血液凝固，立即送檢。第十三頁，共三十七頁，2022年，8月28日4、成人每套（2瓶）應(yīng)采血16--20ml，不同部位采集2—3套，兒童患者因為血液中病原菌濃度較高，血培養(yǎng)量無需等同于成人，對于嬰幼兒患者推薦的采血量每瓶不少于2ml,采血量不超過體重的1%，由于嬰幼兒患者厭氧菌所致菌血癥比較罕見，嬰幼兒血培養(yǎng)可以僅用需氧瓶。第十四頁，共三十七頁，2022年，8月28日1、嚴(yán)格無菌操作避免污染2、從兩側(cè)上肢靜脈采血，“雙瓶雙側(cè)”采血培養(yǎng)。至少做到“雙側(cè)雙瓶”。必要時從下肢靜脈采血做第三套血培養(yǎng)。采血注意事項：第十五頁，共三十七頁，2022年，8月28日3、切忌在靜脈點滴處采血，不宜從靜脈導(dǎo)管或埋置針中采血4、采血后先注入?yún)捬跗亢笞⑷胄柩跗?，?dāng)采血量不能滿足推薦，應(yīng)先分配需氧瓶再厭氧瓶，因為菌血癥中專性需氧菌比專性厭氧菌高。采血注意事項：第十六頁，共三十七頁，2022年，8月28日采血后應(yīng)該立即送檢,如不能立即送檢，可室溫保存，切勿冷藏。若冷藏有些苛養(yǎng)菌如流感嗜血桿菌、腦膜炎奈瑟氏菌、淋球菌等遇冷易死亡；若環(huán)境溫度高于35℃，瓶內(nèi)細菌繁殖后濃度過高時，感應(yīng)細菌生長的底物被耗盡，放入培養(yǎng)儀后因為不再產(chǎn)生生長變化而出現(xiàn)假陰性。3.標(biāo)本運送及保存：第十七頁，共三十七頁，2022年，8月28日

什么時候采血最好？

為什么要采集足夠的血液？

為什么每套標(biāo)本中應(yīng)包含厭氧培養(yǎng)？為什么要求多次采血？思考的問題第十八頁，共三十七頁，2022年，8月28日盡可能在患者寒戰(zhàn)開始時、發(fā)熱高峰前0.5～1h內(nèi)采血在患者接受抗菌藥物治療前采血如患者已經(jīng)應(yīng)用抗菌藥物進行治療，應(yīng)在下一次用藥之前采血培養(yǎng)什么時候采血最好？

第十九頁，共三十七頁，2022年，8月28日為什么要采集足夠的血液？

采血量是影響靈敏度最關(guān)鍵因素，在一項研究中，成人血培養(yǎng)采血量2-30ml，檢出率與采血量呈比例增長，而且成人只做1瓶血培養(yǎng)所得結(jié)果是很難正確解釋的。但并非越多越好，超過一定數(shù)量的采血量會稀釋培養(yǎng)瓶的肉湯，所以血液與肉湯的最佳比例為1：5－1：10第二十頁，共三十七頁，2022年，8月28日

便于解釋血培養(yǎng)結(jié)果是污染還是真正感染保證兼性厭氧菌的生長及厭氧菌的培養(yǎng)報告時間提前：需氧瓶有9%比厭氧瓶早1天報告結(jié)果，厭氧瓶有5%比需氧瓶早1天報告結(jié)果。因此只做需氧菌不做厭氧菌培養(yǎng),有5%的血培養(yǎng)延遲1天報告陽性結(jié)果為什么每套標(biāo)本中應(yīng)包含厭氧培養(yǎng)？第二十一頁，共三十七頁，2022年，8月28日（1）菌血癥有“持續(xù)性”和“暫時性”之分，多次采血可提高陽性檢出率，減少漏檢；（2）血流感染有原發(fā)性與繼發(fā)性之分，許多繼發(fā)性血流感染來源于肺、尿路、肝臟、腸道與創(chuàng)口，血培養(yǎng)陽性有助于循環(huán)外感染的診斷。（3）菌血癥患者多數(shù)為間歇性，病原菌周期性出現(xiàn)在血液中，在無菌時期不管臨床癥狀嚴(yán)重程度如何，患者血液中的病原菌濃度水平相當(dāng)?shù)停虼艘蠖啻尾裳?，?4h內(nèi)一般不超過3次。為什么要多次采血？第二十二頁，共三十七頁，2022年，8月28日污染菌和感染菌的確認第二十三頁，共三十七頁，2022年，8月28日腦脊液標(biāo)本采集：嚴(yán)格的無菌操作進行腰椎穿刺采集，必要時也可從小腦延髓池或側(cè)腦室穿刺采集。采集后收集于3個無菌容器中，第1管用于細菌學(xué)檢查，第2管用于化學(xué)或免疫學(xué)檢查，第3管用于常規(guī)檢查。若僅收集到1管腦脊液，首先送往微生物實驗室，之后再做其它檢查；第二十四頁，共三十七頁，2022年，8月28日標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢，若延誤送檢，標(biāo)本應(yīng)室溫保存，但保存時間不應(yīng)超過24小時，某些細菌具有自溶酶，放置時間過長易自溶死亡。腦脊液標(biāo)本不可放置冰箱中保存，以防某些細菌死亡（如腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、嗜血桿菌）標(biāo)本運送與保存第二十五頁，共三十七頁，2022年，8月28日

痰液1.采集方法：①自然咳痰法：留取前刷牙，用清水漱口3次，以去除口腔內(nèi)大量雜菌，之后先深呼吸再用力咳出呼吸道深部痰液吐至一次性痰杯內(nèi)，蓋好蓋子。如患者痰液較深或者黏稠難以咳出時可誘導(dǎo)排痰。最佳痰液采集量為2—10ml，最低不少于1ml。第二十六頁，共三十七頁，2022年，8月28日②特殊取痰法：由臨床醫(yī)生采集，主要有：纖支鏡抽吸法（采集支氣管肺泡灌洗、經(jīng)支氣管鏡直接吸引或防污染樣本毛刷）第二十七頁，共三十七頁，2022年，8月28日2.痰標(biāo)本的運送、保存、驗收:①盡快送至實驗室內(nèi)（＜2小時），運送延誤可導(dǎo)致肺炎雙球菌、流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌由于不適應(yīng)外界環(huán)境和自溶現(xiàn)象而死亡。②延遲送檢或待處理標(biāo)本應(yīng)置于10—20℃室溫保存，既可防止苛養(yǎng)菌死亡也能避免雜菌快速生長，保存時間不可超過24小時。第二十八頁，共三十七頁，2022年，8月28日1、正常人尿液是無菌的，而尿液細菌培養(yǎng)最大的問題是雜菌污染。正常人外尿道有大腸桿菌、葡萄球菌等存在。而這些細菌又是尿路感染中常見的病原菌。因此要作好尿液細菌學(xué)檢查，首先應(yīng)注意標(biāo)本收集問題。尿液培養(yǎng)相關(guān)問題第二十九頁，共三十七頁，2022年，8月28日2、尿液經(jīng)尿道排出時會受到尿道內(nèi)正常菌群的污染,所以需要定量接種、合理評價才能判斷培養(yǎng)的細菌是否與尿路感染有關(guān)。3、另外,由于絕大多數(shù)的泌尿系感染是由腸桿菌科細菌引起,而此類細菌的硝酸鹽還原實驗為陽性,故可參考尿常規(guī)檢查中的硝酸鹽還原實驗來推斷是否有細菌感染。第三十頁，共三十七頁，2022年，8月28日中段尿培養(yǎng)簡單易行，又無感染的危險。通常取晨起第一次尿送檢。尿液在膀胱內(nèi)停留6-8h以上（給細菌足夠的繁殖時間）尿標(biāo)本必須用無菌帶螺帽的容器采集，容器上標(biāo)有培養(yǎng)型，而非尿常規(guī)尿杯！中段尿培養(yǎng)

第三十一頁，共三十七頁，2022年，8月28日采集方法：盡量取早晨第一次尿液,取尿前用肥皂水清洗外陰（女性）或尿道口（男性），再用無菌水洗凈，用無菌紗布擦拭，然后排尿棄去前段尿，留取中段尿10-15ml，置于無菌容器內(nèi)。嬰幼兒不少于1ml，尿量不足，培養(yǎng)結(jié)果不可靠。中段尿培養(yǎng)

第三十二頁，共三十七頁，2022年，8月28日標(biāo)本采集后立即送檢，通常標(biāo)本采集后到接種的時間不能超過2小時，尤其氣溫較高的夏季，保存時間應(yīng)適當(dāng)縮短或4℃冷藏保存，但冷藏時間仍不得超過8小時。注意：考慮淋病奈瑟菌感染時，采集的尿液應(yīng)該立即送檢，并且不得冷藏。標(biāo)本的運送與保存第三十三頁，共三十七頁，2022年，8月28日膿腫標(biāo)本：標(biāo)本的采集與送檢：①閉合性膿腫：勿用拭子取樣。膿腫表面清創(chuàng)，用注射器抽取膿腫內(nèi)容物；或?qū)⒛撃[切開引流后，取膿腫壁的一部分進行培養(yǎng)。第三十四頁，共三十七頁，2022年，8月28日②開放性損傷和膿腫：盡量去除表面覆蓋物和滲出液，并用拭子用力擦拭損傷基底或邊緣取樣。取自表淺切口感染的標(biāo)本不進行厭氧培養(yǎng)。傷口進展邊緣處活檢標(biāo)本檢測厭氧菌、分枝桿菌和真菌最佳。采集后立即送檢第三十五頁，共三十七頁，2022年，8月28日采集前清潔、消毒尿道口及外陰，尿道分泌物可將無菌棉拭子伸入尿道捻轉(zhuǎn)拭子采集。陰道分泌物采集時可用無菌棉拭子自陰道深部或陰道穹隆后