實(shí)驗(yàn)三、透明質(zhì)酸酶的擴(kuò)散作用

透明質(zhì)酸酶的擴(kuò)散作用、

血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)、內(nèi)毒素的檢測(cè)

（鱟實(shí)驗(yàn)）

透明質(zhì)酸酶的擴(kuò)散作用實(shí)驗(yàn)原理透明質(zhì)酸是葡萄糖醛酸和乙酰氨基葡萄糖聚合物，是一種黏蛋白多糖，有高度的黏性，是結(jié)締組織基質(zhì)成分，在結(jié)締組織細(xì)胞間呈“細(xì)胞黏合劑作用”。乙型溶血性鏈球菌等產(chǎn)生的透明質(zhì)酸酶可水解透明質(zhì)酸，使結(jié)締組織疏松，通透性增高，使細(xì)菌和毒性物質(zhì)易于擴(kuò)散，故此酶亦稱“擴(kuò)散因子”。材料家兔溶血性鏈球菌24h肉湯培養(yǎng)物濾液墨汁，生理鹽水，70%酒精，無菌棉簽等無菌注射器、小試管、手術(shù)剪、鑷子方法和結(jié)果方法1，取家兔一只，剪去背兩側(cè)的部分兔毛，用70%的酒精消毒。2，分別吸取墨汁和溶血性鏈球菌培養(yǎng)物濾液的混合液0.1ml和墨汁與生理鹽水混合液0.1ml。3，在家兔背兩側(cè)分別將剛才的兩種各0.1ml的混合液皮內(nèi)注射（5o-10o，斜面進(jìn)入，小皮丘。注射時(shí)注意：不可使黑色液體漏出）。注射后用標(biāo)記筆畫出黑色的范圍，并測(cè)量其半徑，1h后再測(cè)量一次黑色的范圍的半徑。結(jié)果：對(duì)比兩種混合液擴(kuò)散的差別，并分析其原因。血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)

（玻片法）概述葡萄球菌按照有無凝固酶可分為凝固酶陽性菌株和凝固酶陰性菌株，在多數(shù)情況下凝固酶陽性葡萄球菌為致病性菌株，而凝固酶陰性葡萄球菌為非致病性菌株。凝固酶作為葡萄球菌的一種毒力因子，其作用是:1,阻礙體內(nèi)吞噬細(xì)胞的吞噬;2,保護(hù)細(xì)菌不受血清中殺菌物質(zhì)的破壞；3,與葡萄球菌引起的感染易于局限化和形成血栓有關(guān)。實(shí)驗(yàn)原理致病性葡萄球菌產(chǎn)生的血漿凝固酶，在某些輔助因子的存在下，使含有枸櫞酸鈉或肝素等抗凝劑的兔或人血漿中纖維蛋白原變成不溶性的纖維蛋白，使血漿凝固：非致病性葡萄球菌不產(chǎn)生此種酶，因此血漿凝固酶可以用來檢測(cè)葡萄球菌有無致病性。材料和儀器金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌血平板培養(yǎng)物抗凝兔血漿、生理鹽水、毛細(xì)滴管、接種環(huán)、載玻片等方法和結(jié)果方法1，取潔凈載玻片一張，于兩端各加一滴生理鹽水2，用滅菌接種環(huán)子血瓊脂平板上挑取兩種葡萄球菌培養(yǎng)物少許，分別混懸于載玻片的兩端的生理鹽水中，使其成為均勻的細(xì)菌懸液，觀察有無自凝現(xiàn)象，然后在每滴細(xì)菌懸液中各加入抗凝的兔血漿一滴，混勻。結(jié)果數(shù)秒鐘后觀察結(jié)果，細(xì)菌呈顆粒狀凝集為陽性，無凝集則為陰性。內(nèi)毒素的檢測(cè)

（鱟實(shí)驗(yàn)）區(qū)別要點(diǎn)外毒素內(nèi)毒素來源G+菌,及部分G-菌G-菌存在部分活菌分泌,少數(shù)為菌體崩解為細(xì)胞壁成分,菌體崩解化學(xué)成分蛋白質(zhì)脂多糖穩(wěn)定性60-80℃,30min被破壞160℃,2-4h被破壞毒性強(qiáng),有選擇性,引起特殊表現(xiàn)較弱,毒性效應(yīng)大致相同抗原性強(qiáng),可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗毒素,可被制成類毒素甲醛處理不形成類毒素概述內(nèi)毒素主要生物學(xué)活性有：致熱作用；白細(xì)胞反應(yīng)；感染性休克；DIC等。需要用來檢測(cè)內(nèi)毒素的情況：用來檢測(cè)所配制的輸液用品或生物制品中是否含有內(nèi)毒素；臨床上為了及時(shí)地確定患者是否有革蘭氏陰性菌感染（內(nèi)毒素休克）引起的內(nèi)毒素血癥等。檢測(cè)內(nèi)毒素的方法有家兔發(fā)熱法和鱟實(shí)驗(yàn)法，家兔發(fā)熱法比較煩瑣，且靈敏度不高，故現(xiàn)在多用鱟實(shí)驗(yàn)法，鱟實(shí)驗(yàn)法靈敏度高，可檢測(cè)到10-4μg/ml的內(nèi)毒素。鱟（hòu），俗稱三刺鱟、兩公婆、海怪，因其長(zhǎng)相既像蝦又像蟹，因此人們又稱之為“馬蹄蟹”,是一類與三葉蟲(現(xiàn)在只有化石)一樣古老的動(dòng)物。與它同時(shí)代的動(dòng)物或者進(jìn)化、或者滅絕，而惟獨(dú)只有鱟從4億多年前問世至今仍保留其原始而古老的相貌，所以鱟有“活化石”之稱。雌雄一旦結(jié)為夫妻，便形影不離，經(jīng)常見到肥大的雌鱟常馱著瘦小的丈夫蹣跚而行。此時(shí)捉到一只鱟，提起來便是一對(duì)，故鱟享“海底鴛鴦”之美稱。

鱟的血液中含有銅離子，它的血液是藍(lán)色的。這種藍(lán)色血液的提取物——“鱟試劑”，可以準(zhǔn)確、快速地檢測(cè)人體內(nèi)部組織是否因細(xì)菌感染而致??；在制藥和食品工業(yè)中，可用它對(duì)毒素污染進(jìn)行監(jiān)測(cè)。原理鱟（hòu）是一種海洋節(jié)肢動(dòng)物，其血液中含有一種有核變形細(xì)胞，這種細(xì)胞的胞漿中含有凝固酶原和凝固蛋白原。內(nèi)毒素（LPS）

激活凝固蛋白原凝固蛋白（溶解狀態(tài)）

（凝膠狀態(tài)）凝固酶原凝固酶BACK材料

鱟試劑鱟試劑溶解水無菌吸管方法及結(jié)果方法：1.取三支鱟試劑打開，分別加入0.1ml

鱟試劑溶解水，使之溶解2.其中一支加入0.1ml大腸桿菌內(nèi)毒素，標(biāo)記上陽性組，另一支加入