2023年微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)一普通光學(xué)顯微鏡的使用及細(xì)菌染色與形態(tài)觀測(cè)第一部分:顯微鏡的使用一、目的規(guī)定1.熟悉普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造、油鏡的使用原理和顯微鏡的維護(hù)方法。2.學(xué)會(huì)對(duì)的使用油鏡觀測(cè)細(xì)菌的基本形態(tài)和特殊構(gòu)造。３.了解各種顯微鏡的重要特性。二、實(shí)驗(yàn)原理（一)光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造微生物實(shí)驗(yàn)室中最常用的是普通光學(xué)顯微鏡，它的構(gòu)造可分為機(jī)械部分和光學(xué)部分。1、機(jī)械部分普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡的機(jī)械部分通常涉及以下幾個(gè)部分：目鏡、鏡筒、基座回轉(zhuǎn)器、物鏡、載物臺(tái)、光圈、聚光器、光源、鏡臂、細(xì)調(diào)節(jié)器、粗調(diào)節(jié)器等。2、光學(xué)部分:目鏡、物鏡、聚光器、光圈、光源。(二)放大倍數(shù)標(biāo)本一方面經(jīng)物鏡放大,在目鏡的焦距平面上形成一個(gè)實(shí)像,再通過(guò)目鏡放大成最終的虛像?？偟姆糯蟊稊?shù)是物鏡放大倍數(shù)與目鏡放大倍數(shù)的乘積。物鏡的放大倍數(shù)愈大,其工作距離(物鏡鏡頭到標(biāo)本片之間的距離)愈短，這時(shí)光圈就要打開(kāi)得愈大。顯微鏡的放大倍數(shù)放大倍數(shù)總的放大倍數(shù)低倍鏡高倍鏡油鏡物鏡10×45×１00×目鏡10×１0×1０×10０×４５0×1000×(三）分辨距離與分辨力顯微鏡的性能受物鏡的分辨距離或分辨力所限制。分辨距離即透鏡所能分辨的兩個(gè)物點(diǎn)之間的最小距離，分辨距離愈小,透鏡的分辨力愈高,物像也就愈清楚。因此常以分辨距離來(lái)衡量顯微鏡的分辨力。Ｒ＝0.6１λ/N.A式中：Ｒ--－-－分辨距離；λ----－-作用光的波長(zhǎng)；N．A---－-－數(shù)值口徑。一些介質(zhì)的折射率介質(zhì)折射率空氣水玻璃香柏油１１3５51.56三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容材料：顯微鏡，香柏油，擦鏡紙。方法：細(xì)菌很小,須使用油鏡方可觀測(cè)到。油鏡是顯微鏡上最重要的部件之一,觀測(cè)時(shí)與玻片非常接近，稍不小心即可壓碎玻片,更嚴(yán)重的是損壞鏡頭,故必須極其仔細(xì)地學(xué)習(xí)油鏡的使用方法：1、為使低倍鏡取得最適之光源,可將低倍鏡頭調(diào)節(jié)到離載物臺(tái)約1cm的高度，將聚光器提高，光圈完全打開(kāi)，然后調(diào)節(jié)電壓旋鈕至視野最合適。滴一滴香柏油，固定于載物臺(tái)上，用推動(dòng)器調(diào)節(jié)到載物臺(tái)正中。在雙目側(cè)視下,下旋粗調(diào)節(jié)器,使油鏡頭浸入油中幾乎與標(biāo)本片相接觸。然后眼睛從目鏡觀測(cè)（如光線(xiàn)局限性,可適當(dāng)增大電源電壓）,漸漸上旋粗調(diào)節(jié)器至看到模糊物像之后，再用細(xì)調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)以使物像清楚。如鏡頭已離開(kāi)油面尚未看到物像,則再重新操作。更換標(biāo)本時(shí)應(yīng)先提高油鏡頭，再更換玻片，切勿隨意移動(dòng)顯微鏡的位置。油鏡觀測(cè)完畢后，按“顯微鏡保護(hù)”中（6）項(xiàng)解決。最后將油鏡各部分還原,聚光器下降,反光鏡垂直于鏡座,鏡頭轉(zhuǎn)成八字形，以免與聚光器發(fā)生碰撞。四、思考題1、使用顯微鏡時(shí)為什么調(diào)節(jié)下列構(gòu)造?反光鏡,光圈，聚光器，粗調(diào)節(jié)器,細(xì)調(diào)節(jié)器,鏡頭回轉(zhuǎn)器。答:聚光器的位置之升降可影響視野的明亮度，上升則視野明亮，下降則光線(xiàn)減弱。光圈的放大或縮小也可控制視野明亮限度。粗調(diào)節(jié)器和細(xì)調(diào)節(jié)器均是調(diào)節(jié)焦距的裝置。鏡頭回轉(zhuǎn)器為裝置物鏡和轉(zhuǎn)換物鏡之用。2、使用不同放大倍數(shù)的物鏡時(shí)，工作距離與光圈的關(guān)系。如何運(yùn)用這一原理用好顯微鏡?答:物鏡的放大倍數(shù)愈大，其工作距離(物鏡鏡頭到標(biāo)本片之間的距離）愈短。標(biāo)本一方面經(jīng)物鏡放大,在目鏡的焦距平面上形成一個(gè)實(shí)像,再通過(guò)目鏡放大成最終的虛像。總的放大倍數(shù)是物鏡放大倍數(shù)與目鏡放大倍數(shù)的乘積。３、為什么要選用與玻璃折射率相似的香柏油作為油鏡的介質(zhì)?油鏡的原理是什么？答：HYPEＲLIＮK"＂＼ｔ"＿blaｎk＂香柏油只在使用油鏡頭時(shí)(100倍ＨYPERLINK""\ｔ"＿blａnk"物鏡）使用，由于當(dāng)鏡與裝片之間的介質(zhì)為空氣時(shí),由于空氣(ｎ＝1.52）的HYPEＲＬＩＮK""\ｔ＂＿blａｎｋ"折射率不同，光線(xiàn)會(huì)發(fā)生折射，不僅使進(jìn)入ＨYＰERＬINK＂"\t＂＿blanｋ"物鏡的光線(xiàn)減少,減少了視野的HＹPERLＩNＫ""\ｔ＂_blaｎk＂照明度,并且會(huì)減少鏡口角。當(dāng)以HYPERＬINK＂＂＼t"＿blａnk"香柏油（n＝1.５１5)為介質(zhì)時(shí),由于它的HYＰＥRＬINK＂"\t＂_blａnk"折射率與ＨYPERLIＮK"＂\t"_blaｎk＂玻璃相近,光線(xiàn)通過(guò)HＹPERＬINK""＼t"_ｂlaｎｋ"載玻片后可直接通過(guò)HＹPERLINK""\t"_ｂlank"香柏油進(jìn)入HYPＥＲＬINK""＼t"_bｌanｋ＂物鏡而不發(fā)生折射,不僅增長(zhǎng)了視野的HYPERLINK＂＂\t"_bｌank"照明度,更重要的是通過(guò)增長(zhǎng)ＨYＰERLINＫ""\t＂_ｂｌaｎk"數(shù)值孔徑達(dá)成提高分辨率的目的。HYＰＥＲLIＮK＂"\t"_blａnk"可見(jiàn)光的波HYＰERＬIＮＫ""＼t＂_blａnｋ＂長(zhǎng)平均為0.55μm。當(dāng)使用HＹPERLINK＂"＼ｔ＂＿bｌaｎk＂數(shù)值孔徑為0．６５的高倍鏡時(shí),它能辨別兩點(diǎn)之間的距離為０.42μm；而使用ＨYPERLINK"＂\t"_blanｋ＂數(shù)值孔徑為１.25的油鏡時(shí),能辨別兩點(diǎn)之間的距離則為0.22μｍ。選用香HYＰＥＲＬINK"＂\ｔ"_blaｎｋ"柏油是由于它的HＹＰＥRLINK""\ｔ"＿blank"折射率是1.５１54、顯微鏡有哪幾種?各自的重要特性是什么?答：光學(xué)顯微鏡中除明視野顯微鏡外,尚有暗視野顯微鏡、相差顯微鏡和熒光顯微鏡；除光學(xué)顯微鏡外,尚有電子顯微鏡。暗視野顯微鏡:在普通光學(xué)顯微鏡載物臺(tái)下安裝一個(gè)暗視野聚光器即成暗視野顯微鏡。相差顯微鏡:相差顯微鏡成像的原理和普通光學(xué)顯微鏡同樣,所不同的是相差顯微鏡涉及有環(huán)狀光闌、裝有相板的相差物鏡和全軸調(diào)整望遠(yuǎn)鏡三個(gè)特殊部分。熒光顯微鏡:熒光顯微鏡的重要特性是以紫外線(xiàn)為光源，當(dāng)照射到用熒光素標(biāo)記的細(xì)菌時(shí)，熒光素吸取了紫外線(xiàn)的能量后,再發(fā)射出可見(jiàn)的橙、黃、淺綠色熒光。由于用熒光素標(biāo)記的菌體各種結(jié)構(gòu)中的溶解、吸附或化合情況不一，于是發(fā)出不同色調(diào)和亮度的熒光,從而可以觀測(cè)細(xì)菌的不同結(jié)構(gòu)。電子顯微鏡:電子顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)和工作原理與普通光學(xué)顯微鏡非常相似，不同的是用電子流代替光線(xiàn),用電磁圈代替透鏡聚焦。第二部分:細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查方法一、目的規(guī)定了解不染色標(biāo)本檢查法,用懸滴法觀測(cè)活細(xì)菌及其動(dòng)力。熟悉染色標(biāo)本的制備過(guò)程，掌握革蘭氏染色法及其結(jié)果判斷，了解革蘭氏染色法原理。了解其它常用染色法。二、實(shí)驗(yàn)原理檢查細(xì)菌形態(tài)的重要工具是顯微鏡,可根據(jù)不同目的將細(xì)菌染色或不染色進(jìn)行鏡檢。常用的堿性染料有結(jié)晶紫、美藍(lán)、堿性復(fù)紅等。染色法又分單染色法和復(fù)染色法兩大類(lèi)。單染色法即僅用一種染料著色，所有的細(xì)菌均被染成一種顏色，無(wú)鑒別細(xì)菌的作用。復(fù)染色法又稱(chēng)鑒別染色法,通常用二種或二種以上的染料著色,由于不同種類(lèi)的細(xì)菌或同種細(xì)菌的不同組成結(jié)構(gòu)對(duì)染料有不同的反映性而被染成不同的顏色，從而有鑒別細(xì)菌的作用。最常用的細(xì)菌復(fù)染色法是革蘭氏染色法（Graｍsｔａｉｎ）。通過(guò)革蘭氏染色法操作,可把細(xì)菌提成兩大類(lèi)：革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌和革蘭氏陰性細(xì)菌。凡能使第一種染料結(jié)晶紫保存藍(lán)色的細(xì)菌叫革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌,凡被灑精脫色后染上對(duì)比顏料沙黃或稀釋復(fù)紅而呈紅色的細(xì)菌叫做革蘭氏陰性細(xì)菌。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一）染色標(biāo)本的制備及觀測(cè)1、復(fù)染色法(革蘭氏染色法）材料：葡萄球菌瓊脂培養(yǎng)物１支大腸桿菌瓊脂培養(yǎng)物1支革蘭氏染液一套：結(jié)晶紫、９5%酒精、路哥氏碘液、稀釋復(fù)紅各1瓶。玻片，接種環(huán)，酒精燈，吸水紙等。方法：（１)涂片用葡萄球菌和大腸桿菌混合涂片。①取玻片一塊，拭凈。②用無(wú)菌接種環(huán)取生理鹽水一滴，放在玻片中央(如被檢材料是液體，可不加生理鹽水)。③左手斜持菌種試管,右手將菌種試管棉塞稍加轉(zhuǎn)動(dòng)，以便拔下。④右手持接種環(huán)，經(jīng)火焰滅菌后,用右手小拇指拔開(kāi)菌種試管棉塞，試管口通過(guò)火焰，將接種環(huán)插入試管中取菌少許(切不可多,更不可將培養(yǎng)基刮下）。⑤試管口再通過(guò)火焰,塞好棉塞。⑥將接種環(huán)上的細(xì)菌加入玻片上之水滴內(nèi)，磨勻，涂成直徑為1cm大小的薄菌膜。⑦接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌。．（2）干燥涂片置于空氣中,使其自然干燥。(3）固定干燥后將涂片在火焰上緩緩?fù)ㄟ^(guò)三次,此為“固定”。目的是使細(xì)菌粘于玻片上,染色和水沖時(shí)不易脫落；且細(xì)菌為蛋白質(zhì),被熱凝固可保持完整形態(tài)。(４）染色初染→媒染→脫色→復(fù)染①加結(jié)晶紫染液于標(biāo)本上,使其覆滿(mǎn)標(biāo)本,染1~2分鐘。②細(xì)水沖洗。③加路哥氏碘溶液經(jīng)1分鐘。④水洗。⑤加95%酒精于玻片上來(lái)回流動(dòng)，傾去酒精。如此反復(fù)2～3次（約30秒鐘）。⑥水洗。⑦加稀釋復(fù)紅染液，染約1分鐘。⑧水洗,用吸水紙吸干。（5）鏡檢革蘭氏陽(yáng)性菌在結(jié)晶紫著色后不易被酒精脫色,故仍為深藍(lán)色或紫色；革蘭氏陰性菌在結(jié)晶紫著色后易被酒精脫色,故經(jīng)稀釋復(fù)紅復(fù)染后成紅色。三、實(shí)驗(yàn)記錄革蘭氏染色過(guò)程:取玻片一塊,在玻片上滴三小滴水(有一定的距離），分別用接種環(huán)取EＣ（大腸桿菌）和BS(金黃色葡萄球菌)與兩邊的水滴上，并混勻,灼燒接種環(huán)后再分別取EＣ和BS于中間的水滴上混勻（即中間水滴是兩種菌的混合物），并在酒精燈下灼燒至干（小心不要將玻片炸裂)，用結(jié)晶紫進(jìn)行初染,細(xì)水沖洗后，加路哥氏碘液進(jìn)行媒染,水洗后加酒精脫色2~３次,水沖洗后加稀釋復(fù)紅染液復(fù)染一分鐘,水洗,并用吸水紙吸干。大腸桿菌為革蘭氏陰性菌,染色后呈紫紅色。普葡萄球菌為革蘭氏陽(yáng)性菌,染色后呈現(xiàn)藍(lán)紫色。以下為實(shí)驗(yàn)觀測(cè)圖：四、思考題1．染色法在微生物學(xué)上有何實(shí)際意義?染色法可以更方便的觀測(cè)細(xì)菌的具體形態(tài),更方便觀測(cè)細(xì)菌，革蘭氏染色法有更重要的意義，可以鑒別細(xì)菌，把眾多的細(xì)菌分為兩大類(lèi)，HYＰEＲLIＮK""\t＂_ｂｌaｎk"革蘭氏陽(yáng)性菌和ＨYPEＲLＩNK""\t＂_ｂlａnk"革蘭氏陰性菌，在實(shí)驗(yàn)方面,可以通過(guò)殺死陽(yáng)性或陰性菌而得到目的菌。2.比較復(fù)染色法與單染色法的優(yōu)缺陷。答：?jiǎn)稳旧ǎ簝?yōu)點(diǎn):僅用一種染料著色，所有的細(xì)菌均被染成一種顏色，簡(jiǎn)樸方便，可用來(lái)觀測(cè)細(xì)菌的形態(tài)和排列方式。缺陷：但無(wú)鑒別細(xì)菌的作用。復(fù)染色法:優(yōu)點(diǎn):用二種或二種以上的染料著色，由于不同種類(lèi)的細(xì)菌或同種細(xì)菌的不同組成結(jié)構(gòu)對(duì)染料有不同的反映性而被染成不同的顏色，從而有鑒別細(xì)菌的作用。缺陷：使用試劑較多,過(guò)程較單染色法更復(fù)雜繁瑣。3．以革蘭氏染色法為例,說(shuō)明它至少要涉及幾種試劑？各起何作用？答：至少用到4種試劑。結(jié)晶紫溶液進(jìn)行初染，路哥氏碘液進(jìn)行媒染,９5%酒精進(jìn)行脫色，稀釋復(fù)紅染液進(jìn)行復(fù)染。4．要確證一個(gè)未知細(xì)菌的革蘭氏染色性質(zhì),你可用什么方法來(lái)說(shuō)明你的結(jié)果是可靠的?答：通過(guò)在顯微鏡下的菌體被染的顏色可以判斷,凡能使第一種染料結(jié)晶紫保存藍(lán)色的細(xì)菌為革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，凡被灑精脫色后染上對(duì)比顏料沙黃或稀釋復(fù)紅而呈紅色的細(xì)菌為革蘭氏陰性細(xì)菌。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)二培養(yǎng)基的的制備滅菌及接種技術(shù)培養(yǎng)基的制備和滅菌一、目的規(guī)定掌握基礎(chǔ)培養(yǎng)基應(yīng)具有的條件及其制備方法。二、實(shí)驗(yàn)原理培養(yǎng)基是人工配制的供應(yīng)細(xì)菌或其它微生物生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。微生物的種類(lèi)雖然繁多，但對(duì)基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如碳源、氮源、能源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子和水分等的規(guī)定卻有共同性。這些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用是:提供合成菌體和代謝產(chǎn)物的原料;提供生命活動(dòng)必需的能量；調(diào)節(jié)代謝環(huán)境。作為培養(yǎng)基必須具有下列條件:①具有適當(dāng)?shù)乃趾鸵欢ㄅ浔鹊倪m宜的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。②具有合適的酸堿度（pＨ值)。③有適當(dāng)?shù)奈锢頎顟B(tài):液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基。④培養(yǎng)基必須經(jīng)滅菌成為無(wú)菌狀態(tài)后方能使用。運(yùn)用培養(yǎng)基對(duì)細(xì)菌等進(jìn)行人工培養(yǎng)，在微生物學(xué)上有重要意義。例如,細(xì)菌純培養(yǎng)物的分離、培養(yǎng),細(xì)菌生物學(xué)特性的研究、分類(lèi)鑒定，菌種保藏等都需要運(yùn)用培養(yǎng)基進(jìn)行人工培養(yǎng)。同時(shí)在傳染病的診斷、生物制品的研制、發(fā)酵生產(chǎn),以及運(yùn)用細(xì)菌等作為工具進(jìn)行的其它學(xué)科的研究中(如遺傳學(xué)、基因工程等)，都離不開(kāi)培養(yǎng)基的應(yīng)用和細(xì)菌的人工培養(yǎng)?；A(chǔ)培養(yǎng)基一般指的是營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基和營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，它通常由蛋白胨（重要作為氮源）、牛肉浸膏（作為碳源、氮源、維生素和無(wú)機(jī)鹽）、氯化鈉(無(wú)機(jī)鹽并具有維持一定的滲透壓的作用）和水所組成?；A(chǔ)培養(yǎng)基具有大多數(shù)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。此外,根據(jù)培養(yǎng)基的組成和使用目的菌不同，尚有加富培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、厭氧培養(yǎng)基等。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一）馬丁培養(yǎng)基的配制：葡萄糖10．0ｇ、蛋白胨５．0g、磷酸二氫鉀(KH2PO4)1.0g、硫酸鎂(ＭgSO4·７H2O)0．5g、孟加拉紅33.4mg、蒸餾水1000ｍＬ、實(shí)驗(yàn)中使用的是已經(jīng)配制好的培養(yǎng)基粉,稱(chēng)取36ｇ,加入1000ml水,分裝在兩個(gè)5０0ｍl的錐形瓶中，包扎，置于高溫滅菌鍋中121℃下滅菌30mｉｎ。滅菌后進(jìn)行倒平板備用。四、思考題１．液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基各有何功用?答：HYＰERLIＮK"＂＼t"_blanｋ"液體培養(yǎng)基：組分均一,適宜各類(lèi)HYPＥRLINＫ""\ｔ＂＿blaｎk"微生物的HYPERLIＮK""＼t"_ｂｌanｋ＂營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)。廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)研究及大規(guī)模HYPERLINＫ"＂\t"_ｂlanｋ"工業(yè)生產(chǎn)中，有助于廣泛獲得大量菌體或代謝產(chǎn)物。HYPＥRＬＩＮK"＂＼t＂＿blank＂固體培養(yǎng)基：HYＰEＲＬＩＮK""\ｔ"_bｌanｋ"瓊脂HＹPＥRLINK""\t"＿blａnk"固體培養(yǎng)基廣泛應(yīng)用于HYPＥRLＩNＫ"＂\t＂_ｂlaｎk"微生物的分離培養(yǎng)、ＨＹPERLＩNK""＼t"＿blanｋ"菌種鑒定和保藏。HＹPERLINK""半固體培養(yǎng)基:用于HYPＥＲLINK＂"＼ｔ"_blaｎk"觀測(cè)細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)、HＹPERLINK"＂\ｔ"_ｂｌaｎk"菌種鑒定及測(cè)定ＨYPEＲＬＩNK"＂\t＂_blank"噬菌體的HYPERLINＫ""\ｔ＂_blank＂效價(jià)等。2．細(xì)菌的人工培養(yǎng)需要哪些條件，在微生物學(xué)上有何重要意義?答：需要基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：如碳源、氮源、能源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子和水分等。細(xì)菌純培養(yǎng)物的分離、培養(yǎng),細(xì)菌生物學(xué)特性的研究、分類(lèi)鑒定,菌種保藏等都需要運(yùn)用培養(yǎng)基進(jìn)行人工培養(yǎng)。同時(shí)在傳染病的診斷、生物制品的研制、發(fā)酵生產(chǎn),以及運(yùn)用細(xì)菌等作為工具進(jìn)行的其它學(xué)科的研究中（如遺傳學(xué)、基因工程等）,都離不開(kāi)培養(yǎng)基的應(yīng)用和細(xì)菌的人工培養(yǎng)。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)三自然界中微生物的分離與純化一、目的規(guī)定1、學(xué)習(xí)并掌握從自然界中分離微生物的方法。２、掌握細(xì)菌、放線(xiàn)菌、酵母菌、霉菌的分離純化方法；二、基本原理土壤是微生物生活的大本營(yíng),是尋找和發(fā)現(xiàn)有重要應(yīng)用潛力的微生物的重要菌源。不同土樣中各類(lèi)微生物數(shù)量不同，一般土壤中細(xì)菌數(shù)量最多；另一方面為放線(xiàn)菌和霉菌。一般在較干燥、偏堿性、有機(jī)質(zhì)豐富的土壤中放線(xiàn)菌數(shù)量較多；酵母菌在一般土壤中的數(shù)量較少，而在水果表皮、葡萄園、果園土中數(shù)量多些。本次實(shí)驗(yàn)從土壤中分離細(xì)菌、放線(xiàn)菌和霉菌；自面肥或酒曲或果園土分離酵母菌。從混雜的微生物群體中獲得只具有某一種或某一株微生物的過(guò)程稱(chēng)為微生物的分離與純化。常用的是平板分離法和劃線(xiàn)分離法，純化該微生物，直至得到純菌株。平板分離法是將待測(cè)樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋?zhuān)蛊渲械奈⑸锍渥惴稚⒊蓡蝹€(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上,通過(guò)培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成肉眼可見(jiàn)的菌落,即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。該法雖然操作繁瑣，但可獲得活菌的信息，所以被廣泛用于生物制品檢查（如活菌制劑）,以及食品、飲料和水等的含菌指數(shù)或污染限度的檢測(cè)。三、實(shí)驗(yàn)材料（一)菌源1、土樣：選定采土地點(diǎn)后,鏟去表土層２～3ｃm，?。硚10cｍ深層土壤1０g，裝入已滅過(guò)菌的牛皮紙袋內(nèi)，封好袋口，并記錄取樣地點(diǎn)、環(huán)境及日期。土樣采集后應(yīng)及時(shí)分離，凡不能立即分離的樣品,應(yīng)保存在低溫、干燥條件下，盡量減少其中菌相的變化。（二）培養(yǎng)基（制平板）1、馬丁培養(yǎng)基:葡萄糖１０.0ｇ、蛋白胨5.0g、磷酸二氫鉀（KH2PO4)1.0g硫酸鎂(ＭgSO4·7H2O)0.5ｇ、孟加拉紅33.4ｍg、蒸餾水1０0０mL、121℃３０min滅菌。(三）無(wú)菌水配制無(wú)菌水，分裝于2５0mL錐形瓶，每瓶裝99mL)，每瓶?jī)?nèi)裝4~4粒玻璃珠。分裝試管、每管裝9mL(每組4支），1２1℃滅菌2０miｎ。(四)其他物品:無(wú)菌培養(yǎng)皿、無(wú)菌移液管、無(wú)菌玻璃涂棒、稱(chēng)量紙、藥勺、橡皮頭、10%酚溶液。四、操作環(huán)節(jié)(一）稀釋涂布平板分離法（1)制備土壤稀釋液稱(chēng)取土樣10g，放入到盛有９9mL無(wú)菌水或無(wú)菌生理鹽水并裝有玻璃珠的三角瓶中，置搖床振蕩10~20min，使土壤均勻分散成土壤懸液(10－１）。用1mL的無(wú)菌移液管從中吸取1mL土壤懸液，移入到分裝有9mＬ無(wú)菌水的試管中，吸吹3次,振蕩均勻(1０-2)。用同樣方法依次制成１0－2~10－4的土壤稀釋液(為避免稀釋過(guò)程誤差，進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)時(shí)，最佳每一個(gè)稀釋度更換一支移液管)。（2)涂布法分離依前法向無(wú)菌培養(yǎng)皿中傾倒已融化的培養(yǎng)基,待平板冷凝后，用無(wú)菌移液管分別吸取上述10－１、１0-2、１0-3、10-４四個(gè)稀釋度菌懸液0．２ｍＬ，依次滴加于相應(yīng)編號(hào)已制備好的培養(yǎng)基平板