藥物分析芳酸及其酯類

⊙苯甲酸類羥苯乙酯ethylparoben丙磺舒probenecid苯甲酸benzoicacid甲芬那酸mefenamicacidsodiumbenzoate第1頁/共49頁第一頁，共50頁?！哑渌妓犷惵蓉惗□lofibrate布洛芬ibuprofen第2頁/共49頁第二頁，共50頁。⊙特點(diǎn)均有苯環(huán)、羧酸或其酯水楊酸類和苯甲酸類結(jié)構(gòu)中的羧基直接與苯環(huán)相連除了酸性基團(tuán)外，各自具有本身的官能團(tuán)分子中苯環(huán)、羧酸和取代基的相互影響，使芳酸的酸性強(qiáng)度各有不同第3頁/共49頁第三頁，共50頁。紫堇色赭色↓米黃色↓pH5.0~6.0T.S.FeCl3pH4~6中性溶液鑒別三氯化鐵反應(yīng)第4頁/共49頁第四頁，共50頁。堿式苯甲酸鐵鹽（赭色沉淀）加稀HCl，沉淀分解，生成游離白色第5頁/共49頁第五頁，共50頁。布洛芬第6頁/共49頁第六頁，共50頁?！阎氐己戏磻?yīng)具體方法見芳香胺類藥物的鑒別⊙氧化反應(yīng)⊙異羥肟酸鐵反應(yīng)甲芬那酸＋H2SO4

深藍(lán)色△黃色并產(chǎn)生綠色熒光隨即變?yōu)樽鼐G色第7頁/共49頁第七頁，共50頁。Fe/3紫色第8頁/共49頁第八頁，共50頁?！阉猱a(chǎn)物的反應(yīng)⊙分解產(chǎn)物的反應(yīng)⊙UV特征吸收⊙IR吸收光譜第9頁/共49頁第九頁，共50頁。特殊雜質(zhì)的由來與方法檢查AcetylSalicylicAcid副產(chǎn)物SAASA⊙Aspirin生產(chǎn)工藝第10頁/共49頁第十頁，共50頁。SA溶液的澄清度

酚類和酯類其他副反應(yīng)產(chǎn)生酯類第11頁/共49頁第十一頁，共50頁。易碳化物熾灼殘?jiān)亟饘俚?2頁/共49頁第十二頁，共50頁。⊙PAS-Na間氨基酚Ch.P

樣品3.0g用乙醚提取，加入H2O，用HCl滴定液（0.02mol/L)滴定，生成雜質(zhì)·HCl（轉(zhuǎn)溶入H2O相，甲基橙指示劑）。滴定液不得過0.30mlUSPHPLC法

C18NaH2PO4(0.05mol/L)-Na2HPO4(0.05mol/L)-CH3OH(含氫氧化四丁基銨1.9g)(425：425：150)

254nm檢測內(nèi)標(biāo)：磺胺

第13頁/共49頁第十三頁，共50頁。

⊙羥苯乙酯供試品自身對照法BP（1998）反相TLC高低濃度對比法取羥苯乙酯丙酮液1.0%和0.01%，2ul，254nm查熒光，前一個(gè)任何第二個(gè)斑點(diǎn)的大小和強(qiáng)度不應(yīng)超過后一個(gè)。第14頁/共49頁第十四頁，共50頁。a.雜質(zhì)對照品法

方法：供試品→供試品溶液雜質(zhì)對照品→對照品溶液

第15頁/共49頁第十五頁，共50頁。供試品對照品第16頁/共49頁第十六頁，共50頁。

判斷：供試品中所含雜質(zhì)斑點(diǎn)不得超過相應(yīng)的雜質(zhì)對照斑點(diǎn)。優(yōu)點(diǎn)：同一物質(zhì)，同一Rf值比較，準(zhǔn)確度高、直觀性強(qiáng)。缺點(diǎn)：需要雜質(zhì)對照品。

第17頁/共49頁第十七頁，共50頁。

b.高低濃度對比法

方法：

第18頁/共49頁第十八頁，共50頁。供試品對照品第19頁/共49頁第十九頁，共50頁。

判斷：

②供試品溶液所顯雜質(zhì)斑點(diǎn)不得深于對照溶液的主斑點(diǎn)（或熒光強(qiáng)度）

①控制雜質(zhì)斑點(diǎn)個(gè)數(shù)，控制雜質(zhì)種類第20頁/共49頁第二十頁，共50頁。⊙氯貝丁酯對氯酚（0.0025%）揮發(fā)性雜質(zhì)（0.5%）GC法5%SE-302m

160℃，

N2

FID

雜質(zhì)以歸一化法求得第21頁/共49頁第二十一頁，共50頁。含量測定⊙酸堿滴定法

Acid-basetitrationmethod

以ASA及其制劑為例苯甲酸pKa4.20

水楊酸pKa2.98酸性較強(qiáng)羧酸鄰位-OH，吸電子基團(tuán)，使酸性增加；并有氫鍵，更增加了其極性因此，可采取直接滴定法第22頁/共49頁第二十二頁，共50頁。直接滴定法

pKa3~6

的藥物溶于中性醇,可直接用NaOH滴定pKa6~9

的藥物要用非水溶液滴定法中性乙醇：對指示劑(酚酞)而言為中性，可消除滴定誤差乙醇作用：溶解ASA；防止ASA在水溶液中滴定過程易水解本法特點(diǎn)：簡單注意點(diǎn)：若SA不合格，不宜采用本法Aspirin丙磺舒(Ch.P.BP.JP等)苯甲酸(Ch.P等)均采用本法第23頁/共49頁第二十三頁，共50頁。水解后剩余滴定法

ResidualtitrationafterhydrolysisUSP23方法：取本品約1.5g，精密稱定，準(zhǔn)確加NaOH液(0.5mol/L)50.0ml，水浴上煮沸15min，放冷，以酚酞為指示劑，用H2SO4液(0.25mol/L)滴定剩余的NaOH，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml的NaOH液(0.5ml/L)相當(dāng)于45.04mg的C9H9O4第24頁/共49頁第二十四頁，共50頁。

剩余滴定時(shí)消耗酸量

V(ml)同時(shí)做空白試驗(yàn)，消耗酸量V0(ml)Ch.P00羥苯乙酯的Assay亦采用bBaA第25頁/共49頁第二十五頁，共50頁。反應(yīng)物質(zhì)之間的化學(xué)計(jì)量關(guān)系aA+bBcC+dD被測物滴定液毫摩爾數(shù)第26頁/共49頁第二十六頁，共50頁。☆滴定度計(jì)算0.5規(guī)定的硫酸濃度為0.25mol/LT毫摩爾質(zhì)量第27頁/共49頁第二十七頁，共50頁。兩步滴定法

Two-steptitration用于Aspirin片測定片劑中有穩(wěn)定劑水解產(chǎn)物水楊酸SAHAc枸櫞酸Citricacid酒石酸Trataricacid為了避免這些酸類的干擾，采用兩步滴定法第28頁/共49頁第二十八頁，共50頁。Ch.P.阿司匹林片

取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于阿司匹林0.3g)，置錐形瓶中，加中性乙醇(對酚酞指示劑顯中性)20ml，振搖使ASA溶解，加酚酞指示液3滴，滴加NaOH液(0.1mol/L)至顯粉紅色，再精密加NaOH液(0.1mol/L)40ml，置水浴上加熱15min，并時(shí)時(shí)振搖，迅速放冷至室溫，用H2SO4液(0.05mol/L)滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正每1ml的NaOH液(0.1mol/L)相當(dāng)于18.02mg的C9H8O4第29頁/共49頁第二十九頁，共50頁。第一步：NaOH滴定所有的酸：ASA，CA，TA，SA，HAc第二步放冷后，用H2SO4滴定液滴定剩余的NaOHV；

空白滴定消耗H2SO4

V0；(V0-V)

H2SO4則為用于中和水解ASA所需的

NaOH第30頁/共49頁第三十頁，共50頁?！钣?jì)算：稱取10片重1.8240gCNaOH0.1032mol/L片粉重0.5312gC0.05120mol/L標(biāo)示量0.1g

V3.02ml

V020.18ml第31頁/共49頁第三十一頁，共50頁。

直接水解后兩步

滴定法剩余滴定法滴定法

優(yōu)點(diǎn)

操作簡便水楊酸干擾少

結(jié)果準(zhǔn)確，避免了游離

SA以及片劑中穩(wěn)定劑的干擾缺點(diǎn)游離水楊酸不能完全不合格時(shí)結(jié)排除干擾果偏高Ch.P氯貝丁酯的Assay采用兩步滴定法第32頁/共49頁第三十二頁，共50頁?！央p相滴定法

Titrimetryintwophases

Ch.P2005用于苯甲酸鈉的測定

苯甲酸鈉為芳酸堿金屬鹽，易溶于水；苯甲酸不溶于水，不利于終點(diǎn)的正確判斷因此，利用苯甲酸能溶于有機(jī)溶劑的性質(zhì)，采用雙相滴定法第33頁/共49頁第三十三頁，共50頁。HCl乙醚(苯甲酸)H2O(苯甲酸鈉)0.5mol/L25ml1.5g50ml2d甲基橙

橙紅色分出H2O層，置具塞錐形瓶，乙醚層用H2O5ml洗滌，洗液并入錐形瓶，加乙醚20ml，繼續(xù)用HCl滴定，至水層顯持續(xù)的橙紅色第34頁/共49頁第三十四頁，共50頁?！阎峙渖V-紫外分光光度法

ColumnPartitionChromatogr.

ASAcapsule

等制劑除用上述兩步滴定法外，最好用色譜法，可以分離酸性雜質(zhì)和輔料以及穩(wěn)定劑等，經(jīng)分離后同時(shí)測定ASA與SA

如USP用柱分配色譜-UV測定ASACapsule第35頁/共49頁第三十五頁，共50頁。ColumnPartitionChromatography,CPC擔(dān)體：硅藻土(Celite545)固定相：一定pH的緩沖水溶液流動(dòng)相：與水不相混溶的有機(jī)溶劑

(洗脫前必須先用水飽和)200~300mm60mm4mm22mm層析柱玻棉壓榨棒350mm21mm第36頁/共49頁第三十六頁，共50頁。CPC-UV法測定ASACapsule

SA測定供試液制備用CHCl350ml洗滌，棄去(洗去ASA)10ml冰HAc-水飽和乙醚液(1→10)(使紫色配位化合物被分解，SA析出)洗脫液收集于已盛有10ml甲醇和2滴HCl的50ml量瓶中，繼用30mlCHCl3洗，并稀釋至刻度SA對照品溶液：75μg/ml，取10ml

50ml量瓶中盛有：

10ml甲醇，2滴HCl和10ml冰HAc-水飽和乙醚液(1→10)，CHCl3至刻度第37頁/共49頁第三十七頁，共50頁。測定：306nm測定供試液和SA對照品液﹡SA與試劑生成紫色水楊酸鐵配位化合物，在柱上移動(dòng)慢，帶窄，色澤較深﹡﹡若有Fe3+洗下，黃色影響測定結(jié)果

消除干擾方法：迂底部拌有磷酸的硅藻土，生成不溶解的FePO4↓A供試液＜A對照品液L=75(μg/ml)×10m100mg×1000×100%＝0.75%第38頁/共49頁第三十八頁，共50頁。ASA+SA測定供試液制備洗脫

5,25mlCHCl3

，棄去CHCl3洗脫

10ml冰HAc-CHCl3(1→10)**；85ml冰HAc-CHCl3(1→100)，并稀釋至100ml對照品溶液50μg/ml

冰HAc-CHCl3(1→100)CPC-UV法測定ASACapsule

第39頁/共49頁第三十九頁，共50頁。測定：280nm空白：CHCl3

﹡NaHCO3使ASA和SA成鹽保留于柱上

用CHCl3洗脫的目的：

去除中性或堿性雜質(zhì)﹡﹡冰HAc酸化的目的：

使ASA游離，易被

CHCl3洗脫第40頁/共49頁第四十頁，共50頁。含量測定計(jì)算公式所取膠囊細(xì)粉中ASA(mg)供試品溶液吸收度對照品溶液吸收度第41頁/共49頁第四十一頁，共50頁。CPC技術(shù)的類型利用固定相酸堿性的不同進(jìn)行分離利用藥物和固定相起化學(xué)反應(yīng)而進(jìn)行分離利用生成離子對進(jìn)行層析分離單純靠選擇流動(dòng)相進(jìn)行分離第42頁/共49頁第四十二頁，共50頁。阿司匹林栓Aspirinsuppositories測定法咖啡因乙醇溶液4mg/ml對照品溶液：ASA對照品(約0.15g)50.0ml內(nèi)標(biāo)5.0ml供試品溶液：取本品5粒，精密稱定()，40~50℃微溫熔融，不斷攪拌下冷卻至室溫，精密稱取適量(ASA約0.15g)(W)內(nèi)標(biāo)5.0ml50.0ml乙醇50.0ml2.0ml↓2.0ml乙醇50.0ml⊙HPLC第43頁/共49頁第四十三頁，共50頁。血清中ASA&SA的測定

色譜條件C18

5μm150×4.6mm

甲醇-水-正丁醇(30:20:1)

經(jīng)0.5μm濾膜減壓過濾后5μlH3PO4

超聲脫氣

237nm內(nèi)標(biāo)：苯甲酸血清樣品的處理血清樣品100μl→加入HClO4(30%)50μl、不同