抗菌評(píng)價(jià)體系

評(píng)價(jià)抗菌劑考慮以下幾個(gè)因素:1最低抑菌濃度和最低殺菌濃度（一般選用大腸桿菌和金黃色葡萄糖菌抗菌效率時(shí)抗菌劑最特征的參數(shù)之一，抗菌效果可通過抑制生物發(fā)育繁殖的抗菌劑最低濃度（MIC）和殺滅微生物的最低濃度（MBC）體現(xiàn)。MICMIC是對(duì)抗菌劑抑制微生物性能和抗菌劑的靜菌作用的一般性評(píng)價(jià)，表征抗菌劑阻止微生物繁殖的能力。試驗(yàn)中能抑制受試微生物X%菌株發(fā)育所需的最低抗菌劑溶液或濁液的濃度成為MICx%，抑制所有受試菌株發(fā)育所需的抗菌劑濃度成為MIC。 X°MIC有兩種測(cè)定方法。一種是液體稀釋法，一種是固體稀釋法（培養(yǎng)基法）。液體稀釋法：用營養(yǎng)液作為稀釋劑，配置抗菌劑的懸濁液，使體系的最中抗菌劑濃度為梯度濃度，加入最高殺菌濃度的菌液，使各體系中菌液濃度相等，然后放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)一段時(shí)間。以不含抗菌劑的菌液作對(duì)比，測(cè)定參比液與處理液各自的濁度，處理液濁度和對(duì)比液濁度相等的體系中抗菌劑的濃度即為MIC。固體稀釋法：在培養(yǎng)基中加入不同濃度的抗菌劑，再凝固成培養(yǎng)基平板，培養(yǎng)菌種，幾天后觀察菌種的生長情況，不生長菌種的平板中所含的最低抗菌劑濃度即為該抗菌劑的MIC。這兩種方法中，培養(yǎng)基法操作簡單，但影響因素較多，結(jié)果誤差也大。MBCMBC測(cè)定以無菌水作為稀釋劑，把菌液配置成個(gè)數(shù)濃度為106CFU/ml左右的懸濁液，把抗菌劑也配置成不同倍數(shù)的懸濁液。去1ml菌液，加入不同濃度的抗菌劑懸濁液1ml，充分混合后在30oC水浴中振動(dòng)止，加入2ml的培養(yǎng)液，在最適宜溫度下培養(yǎng)一定時(shí)間，以不含菌對(duì)照液（相應(yīng)抗菌劑濃度和營養(yǎng)液，只是微生物懸濁液用無菌水代替）對(duì)比，處理液和對(duì)比液相等的體系中最低抗菌劑濃度即為該抗菌劑的MBC。濁度對(duì)比液可以用平板劃線培養(yǎng)法代替，存留微生物數(shù)量少于原先配置量0.1%的體系的抗菌劑濃度即為該抗菌劑的MBC。L3殺菌劑抗菌性能測(cè)試L3.1菌種與培養(yǎng)條件 SRB菌種是來自長慶油田,TCB菌種來源于中原油田.SRB培養(yǎng)基:乳酸鈉4.0ink酵母浸汁液1.0g、維生素CO.1gxMgSO4-7H2O0.2g、K>HPO40.01春NaCl10.0g,蒸僧水1000.0ml將各試劑加入蒸儲(chǔ)水溶解.調(diào)節(jié)pH值至7.0?7.2.在0.12XI05Pa的高壓蒸汽下，滅菌20min,加入在紫外燈下滅菌的0.2g硫酸亞鐵鉉?3]TGB培養(yǎng)基:牛肉浸膏1.00蛋白腺10.0奐氯化鈉5.0g.蒸t留水1000ml.將各試劑加入蒸t留水中溶解、調(diào)節(jié)pH值到7.2~7.4左右，在0-12X105Pa的高壓蒸汽下.滅菌20mill1.3.2抗菌性能測(cè)試 本實(shí)驗(yàn)采用最大可能記數(shù)法來評(píng)定制備化合物的抗菌效果?將活化后的菌液稀釋成濃度大概為106celk/ml采用四試管法測(cè)定初始菌液菌量，將不同濃度的水不溶型聚三苯基鱗鹽和三苯基季鱗鹽加入細(xì)菌懸液中?菌藥在37C下接觸1小時(shí)俺厭氧環(huán)境中振蕩）.測(cè)定菌藥接觸后的存活菌量，計(jì)算殺菌率[11J.殺菌率初始菌量數(shù)?存活菌量數(shù)初始菌量數(shù)XI00%L4,1瓊脂固體培養(yǎng)法1） 培養(yǎng)基，取蛋白腋6g,酵母浸出粉6g,牛肉膏L5g,氯化鈉5g,菊萄糖lg,瓊脂粉15小水1000ml,PH7.5±0,2,121t,30分鐘滅菌。2） 菌液制備自將培養(yǎng)基融化后取20ml置入無菌培養(yǎng)皿（直徑約90mm）雙碟中，待凝固后作為底層，椎備若干付培養(yǎng)皿。然后，取必-如葉招同性質(zhì)的培養(yǎng)基5ml若干份,在每份5inl培美基口加入類細(xì)菌0.1-0.2血〈根據(jù)鈿兩沾度適當(dāng)調(diào)整），攪拌均勻后注入已鋪有底層的培養(yǎng)基雙碟中，迅速搖勻，放平，凝固后待用。3） 培養(yǎng)。在制備好的含有各類細(xì)菌的培養(yǎng)基雙碟中，分別取各種納米抗菌材料粉狀少許，依次輕放于培養(yǎng)基表面35-37X培養(yǎng)24脫1.4.2肉湯液體培養(yǎng)法（最小抑菌液度MIC試驗(yàn)法）1） 培養(yǎng)基十按日本無機(jī)抗菌劑研究會(huì)⑹提供的方法作適當(dāng)修改。在L4.1培養(yǎng)基中去掉瓊脂粉即可為肉湯液體培養(yǎng)液。2） 菌液制備。將保存于斜面培養(yǎng)基中的細(xì)菌取少許無菌操作接種于肉湯液體培養(yǎng)液中，35~37T：培養(yǎng)16~20h后待用。也可將培養(yǎng)好的新鮮斜面細(xì)菌菌苔，用無菌水洗后待用。3＞試樣制備。精確稱取納米抗菌材料粉狀30-LOOmg,根據(jù)樣品性質(zhì)用無菌肉湯培養(yǎng)液制備成需要的濃度心4）培養(yǎng)。按對(duì)半稀釋法或2倍稀釋法的試驗(yàn)要求,每個(gè)稀精管中如人0.1ml細(xì)菌濃度為LOx105-L0x10W/ml的菌液后，35~37無培養(yǎng)，24h后觀察結(jié)果,3~4天以上。1.5.1無機(jī)納米抗菌材料粉狀體的測(cè)試表1和表2為不同的納米抗菌材料，對(duì)各類細(xì)菌使用不同的方法測(cè)試的結(jié)果。袤1無機(jī)納米抗菌材料的抗菌活性（瓊脂固體培養(yǎng)法）樣品枯草芽抱枉菌1粉狀+2粉狀+3粉狀+4粉狀+5粉狀±6粉狀+1#粉狀1~22#粉狀2~33#粉狀—4#粉狀8~95#粉狀12~136#粉狀5~6川西西西西西西大腸桿菌+++±+±+±+—+±±+9-101~22~312-132~3—10~111~2一13?154~59-1023~2514~155~68~。2~4短小芽泡桿菌金黃色葡萄球菌表1中的川_1~川6為四川大學(xué)提供的無機(jī)納米樣品。腐西-6#為西南交大提供的無機(jī)納米蚌品?！?”表示有抑菌圈，模糊；"-”表示無抑菊噬土”表示可有可無。數(shù)字表示抑菌圈大小,并且透明清晰，其大小為mm,指從樣品邊緣至抑菌圈邊緣。測(cè)試表明，應(yīng)用瓊脂固體培養(yǎng)法能夠方便快捷地判斷出無機(jī)納米抗菌材料的抗菌活性,此方法不但可作為無機(jī)納米抗菌活性的初步檢測(cè)，還可以作為制備樣品過程中抗菌活性的檢測(cè)。表2中，“+”表示有細(xì)菌生長；表示細(xì)菌未生長;“土”表示可有可無。測(cè)試表明，西-5#樣品MIC比0.059mg/ml濃度還低，西-5#樣品比其它樣品具有更強(qiáng)的抗菌活性。1.5.2無機(jī)納米抗菌材料薄板的測(cè)試表3是按中華人民共和國輕工行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)QB/T2591-2003171推薦的試驗(yàn)方法測(cè)試的結(jié)果。2.2殺菌力的評(píng)價(jià)殺菌力可通過測(cè)定細(xì)菌數(shù)量、濁度、MBC等值來評(píng)價(jià)，相應(yīng)的方法分別稱為細(xì)胞數(shù)量測(cè)定法，比濁法和MBC法。2.2.1細(xì)胞數(shù)量測(cè)定法通過測(cè)定比較參比樣與抗菌劑處理樣細(xì)菌數(shù)量的增減來評(píng)價(jià)抗菌性能。細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定，多采用菌落計(jì)數(shù)法(colonycount)。。對(duì)于微生物，在理論上可認(rèn)為高度稀釋時(shí)每個(gè)活的單細(xì)胞均能繁殖成一個(gè)菌落(colony)，因而可以用培養(yǎng)的方法使每個(gè)活細(xì)胞生長成一個(gè)單獨(dú)的菌落，并通過長出的菌落數(shù)去推算菌懸浮液中的活菌數(shù)，由此而來的方法即為菌落計(jì)數(shù)法。以菌液作為參比液，在菌液中加入抗菌劑后，采用平板涂抹法，在37^培養(yǎng)條件下培養(yǎng)24h后測(cè)定參比液與處理液的生存菌數(shù)，計(jì)算增減值差：增減值差二一lg(處理液生存菌數(shù)t參比液生存菌數(shù))若該值大于2,則認(rèn)為該抗菌劑具有殺菌作用。2.2.2最大或然數(shù)法(MPN)該法依然根據(jù)菌落計(jì)數(shù)測(cè)定原理，但適合于測(cè)定在一個(gè)微生物群中不占優(yōu)勢(shì)卻具有特殊生理功能的類群，例如污水、牛奶及其它食品，或其它場(chǎng)合的特殊微生物。在測(cè)定之前，先采用液體稀釋培養(yǎng)法，利用待測(cè)菌特殊生理功能的選擇性來擺脫其它微生物的干擾，逐代優(yōu)化待測(cè)菌，并通過該生理功能的表現(xiàn)來判斷該群微生物的存在豐度，以示殺菌力。2.2.3比濁法［】在一定濃度范圍內(nèi)，菌懸浮液中的微生物細(xì)胞濃度與濁度成正比，因而通過測(cè)定濁度，間接比較菌液與處理液菌量，可檢測(cè)抗菌劑殺菌性能。2.2.4MBC(最小殺菌濃度)法”MBC為抗菌劑殺滅細(xì)菌所需最低濃度。該值越小，抗菌劑的殺菌力越大。以無菌水作稀釋液，把細(xì)菌配成個(gè)數(shù)濃度(以下簡稱為濃度)106個(gè)，Inl的懸浮液，把抗菌劑懸浮液稀釋到不同倍數(shù)。取菌液1，不同濃度的抗菌劑懸浮液1，混合后于30水浴中振蕩1h，然后加人到2ml的新鮮培養(yǎng)液中，37°C恒溫條件下培養(yǎng)24h，以不含細(xì)菌的抗菌劑懸浮液作參比，測(cè)參比液與處理液各自的濁度。若抗菌劑濃度為cx的處理液濁度與參比液濁度相等.則此cx即為MBC值。2抗菌譜微生物的種類及其繁多，抗菌劑一般只能對(duì)部分特定的微生物種類表現(xiàn)出抗菌活性，而對(duì)其他微生物沒有抗菌活性?？咕鷦┠鼙憩F(xiàn)抗菌活性的微生物種類集合稱為該抗菌劑的抗菌譜。抗菌劑根據(jù)其抗菌譜可以分為廣譜抗菌劑和特異性抗菌劑。3持久性部分抗菌劑在光熱等作用下可能會(huì)逐漸分解或衰減而逐漸失去抗菌作用，而且在使用過程中經(jīng)歷洗滌溶出等因素或逐漸散發(fā)到環(huán)境中也會(huì)引起抗菌材料中抗菌劑濃度的變化，甚至導(dǎo)致抗菌性能不能滿足使用要求。4加工適應(yīng)性一般抗菌劑都需要結(jié)合材料才能制備成相應(yīng)制品使用，所以抗菌劑要和相應(yīng)基材有良好的相容性，能夠適應(yīng)基材的加工需求。比如基材的加工溫度以及基材的高速碾磨。5耐候性耐候性，包括耐紫外線，可見光，熱，空氣等因素，不能在使用一段時(shí)間后很快出現(xiàn)抗菌性能的改變或在物理性能，外觀等方面出現(xiàn)顯著變化，導(dǎo)致制品無法使用或者功能下降。6穩(wěn)定性抗菌劑的穩(wěn)定性指抗菌劑本身物理化學(xué)性能隨時(shí)間和環(huán)境變化保持穩(wěn)定的能量，包括抗菌效果，抗菌劑的外觀，顏色，物理性質(zhì)等。7反應(yīng)惰性抗菌劑應(yīng)具有反應(yīng)惰性，加入基體材料中不影響材料本身的性能，至少不影響材料使用的安全性能。8安全性抗菌劑的安全性包括兩個(gè)方面：一方面時(shí)抗菌劑在使用過程中的安全性；另一方面時(shí)使用過程中根據(jù)使用場(chǎng)合所需的生物安全性。9價(jià)格抗菌塑料的評(píng)價(jià)因素1通用要求2加工性能要求3相容性和遷移性要求4塑料穩(wěn)定性的影響4.1塑料的熱穩(wěn)定性4.2塑料光穩(wěn)定性5塑料力學(xué)性能評(píng)價(jià)5.1塑料制品成型收縮率的影響5.2塑料制品力學(xué)性能的影響6塑料電性能的影響無機(jī)抗菌材料的測(cè)試方法與評(píng)價(jià)2.1 抗菌材料性能測(cè)試方法2.1.1抑菌環(huán)法抑菌環(huán)法為定性試驗(yàn)方法，多用于對(duì)溶出性抑菌劑與含有溶出性抑菌劑產(chǎn)品的鑒定。利用抗菌劑不斷溶解經(jīng)瓊脂擴(kuò)散形成不同濃度梯度，以顯示其抑菌作用。試驗(yàn)時(shí)滅菌生理鹽水調(diào)至濃度為108個(gè)Pml,與營養(yǎng)液混合固化成試驗(yàn)平板，把材料加工成直徑一定的圓片，置于平板中央，在此圓片周圍出現(xiàn)菌生長禁止區(qū)（抑菌圈），經(jīng)37°C培養(yǎng)18h后，比較抗菌材料與參比材料抑菌圈的面積，評(píng)價(jià)抗菌材料的性能。文獻(xiàn)［14］利用此法對(duì)兩種具有代表性的無機(jī)抗菌材料的抗菌性能進(jìn)行了定性研究。2.1.2薄膜密著法這是日本工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)提出的試驗(yàn)方法。將抗菌制品制成一定面積的供試片，未加抗菌劑的制品制成同樣大小參比片，滴上一定菌液,使菌液在試片上鋪開成膜，于膜上覆蓋PE薄膜,37C恒溫條件下保存18?24h，之后用磷酸緩沖液將菌液洗下,采用菌落計(jì)數(shù)法測(cè)生存菌數(shù)，計(jì)算供試片與參比片的增減值差，評(píng)價(jià)抗菌制品抗菌力。該方法適用于檢測(cè)抗菌型硬質(zhì)表面的塑料、陶瓷、橡膠、金屬制品的抗菌性能。2.1.3振蕩燒瓶法通過樣品在液體中快速長時(shí)間振蕩，增加微生物與抗菌產(chǎn)品內(nèi)抑菌劑的接觸以顯示其抑菌作用，適用于非溶出性抗菌織物、纖維等表面粗糙的制品檢驗(yàn)。2.1.4浸漬法本方法將試樣和對(duì)照織物分別放于三角瓶中，用含有肉湯培養(yǎng)基的試驗(yàn)菌懸濁液接種于試樣和對(duì)照織物上，于37°C培養(yǎng)20h后，分別將培養(yǎng)前后試樣上的細(xì)菌洗下，測(cè)定細(xì)菌的數(shù)量，計(jì)算出試樣上細(xì)菌減少的百分率。該方法適用于溶出性抗菌織物的檢測(cè)。2.1.5滴下法菌液用1P500倍數(shù)的培養(yǎng)液稀釋成濃度為104個(gè)Pml的懸濁液，在試驗(yàn)片上滴1滴或數(shù)滴該懸濁液，使菌液以液滴形式存在，在37C下恒溫保存18?20h,測(cè)生存菌數(shù),計(jì)算增減值差，評(píng)價(jià)抗菌制品的抗菌力。本方法適用于具有吸水性的抗菌制品性能檢測(cè)。2.1.6統(tǒng)一試驗(yàn)法把材料切成18長的試驗(yàn)片，稱取0.4g放入300ml廣口瓶中，在壓力消毒鍋中于121C滅菌15min。菌液經(jīng)培養(yǎng)后以1P20倍數(shù)的培養(yǎng)液稀釋，調(diào)成濃度為105個(gè)Pml的懸濁液，在試驗(yàn)片上滴菌懸濁液0.2ml,使液以菌滴形式存在，恒35?37C培養(yǎng)18h后,測(cè)定生存菌類，比較滅菌率。該方法主要適用于疏水性制品的檢測(cè)。2.1.7蓋玻片法將試樣鋪上菌液放于平皿中，罩上可濾過紫外光的石英玻璃罩，在非滅菌型紫外線燈下光照一定時(shí)間后測(cè)定菌數(shù),計(jì)算增減值差，評(píng)價(jià)光催化型抗菌制品的抗菌力。該法是針對(duì)光催化型抗菌制品的檢測(cè)。2.2 抗菌性能評(píng)價(jià)目前,國內(nèi)