中藥中其他類型化學(xué)成分的提取分離技術(shù)

關(guān)于中藥中其他類型化學(xué)成分的提取分離技術(shù)第1頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二2掌握兒茶中鞣質(zhì)類化學(xué)成分的提取分離原理及操作技術(shù)；熟悉青木香中有機(jī)酸類化學(xué)成分的提取分離原理及操作技術(shù)；了解丁南瓜子中南瓜子氨酸及決明子中蛋白質(zhì)類化學(xué)成分提取分離原理及操作技術(shù)。知識要求3能力要求學(xué)習(xí)目標(biāo)1掌握中藥中其他類型化學(xué)成分的提取分離技術(shù)

熟練進(jìn)行兒茶中鞣質(zhì)類化學(xué)成分及青木香中有機(jī)酸類化學(xué)成分的提取分離操作；能進(jìn)行南瓜子中南瓜子氨酸及決明子中蛋白質(zhì)類化學(xué)成分的提取分離操作。第2頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二教學(xué)內(nèi)容一鞣質(zhì)類化學(xué)成分的提取分離技術(shù)二三有機(jī)酸類化學(xué)成分的提取分離技術(shù)四氨基酸類化學(xué)成分的提取分離技術(shù)蛋白質(zhì)和酶類化學(xué)成分的提取分離技術(shù)第3頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二鞣質(zhì)類化學(xué)成分的提取分離技術(shù)

學(xué)習(xí)提示鞣質(zhì)類化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及提取分離知識任務(wù)一兒茶中鞣質(zhì)類化學(xué)成分的提取分離技術(shù)第4頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二學(xué)習(xí)提示鞣質(zhì)類成分的結(jié)構(gòu)類型一二三鞣質(zhì)類成分的理化性質(zhì)鞣質(zhì)類化學(xué)成分的提取分離與檢識第5頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二分布生物活性經(jīng)典定義鞣質(zhì)又稱單寧（tannin）或鞣酸（tanninacid），是一類復(fù)雜的多元酚類高分子化合物，能沉淀蛋白質(zhì)。鞣質(zhì)廣泛存在于植物界，約70%以上的藥材中含有鞣質(zhì)類化合物，在裸子植物及雙子葉植物的楊柳科、山毛櫸科、蓼科、豆科、薔薇科和茜草科中為多。鞣質(zhì)具有收斂、止血作用。內(nèi)服可用于治療胃腸道出血、潰瘍和水瀉等癥，外用于灼傷、創(chuàng)傷的創(chuàng)面，可使創(chuàng)傷表面滲出物中的蛋白質(zhì)凝固，形成痂膜，保護(hù)創(chuàng)面，防止細(xì)菌感染。鞣質(zhì)第6頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二一、鞣質(zhì)類成分的結(jié)構(gòu)類型縮合鞣質(zhì)

此類鞣質(zhì)一般不能水解，但經(jīng)酸處理后可縮合成為不溶于水的高分子化合物鞣酐，又稱鞣紅。有多元醇與沒食子酸酯化的產(chǎn)物。這類鞣質(zhì)具有酯鍵或苷鍵結(jié)構(gòu)，易被酸、堿、鞣酸或苦杏仁酶水解。根據(jù)水解后的產(chǎn)物又可分為沒食子酸和鞣花酸鞣質(zhì)兩類。

可水解鞣質(zhì)復(fù)合鞣質(zhì)

是逆沒食子鞣質(zhì)部分與原花色素部分結(jié)合組成的，具有可水解鞣質(zhì)和縮合鞣質(zhì)的一切特征。第7頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二（一）.可水解鞣質(zhì)

可水解鞣質(zhì)分類沒食子酸鞣質(zhì)沒食子酸鞣質(zhì)水解后產(chǎn)生沒食子酸和糖（或多元醇），如大黃和五倍子中的鞣質(zhì)。逆沒食子酸鞣質(zhì)水解后能生成逆沒食子酸和糖或同時(shí)有沒食子酸或其他的酸生成，但有些逆沒食子酸鞣質(zhì)的原始結(jié)構(gòu)中并無逆沒食子酸的組成，其逆沒食子酸是由鞣質(zhì)水解所產(chǎn)生的黃沒食子酸或六羥基聯(lián)苯二甲酸失水轉(zhuǎn)化而來。如訶子鞣質(zhì)第8頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二各種五倍子鞣質(zhì)的結(jié)構(gòu)訶子鞣質(zhì)實(shí)例%含量五沒食子酰葡萄糖X+Y+Z=04六沒食子酰葡萄糖X+Y+Z=112七沒食子酰葡萄糖X+Y+Z=219八沒食子酰葡萄糖X+Y+Z=325九沒食子酰葡萄糖20十至十一沒食子酰葡萄糖21第9頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二（二）.縮合鞣質(zhì)

縮合鞣質(zhì)在中藥中分布較廣，天然鞣質(zhì)多數(shù)屬于此類，如虎杖、四季青、兒茶、桂皮、麻黃等所含的鞣質(zhì)均屬縮合鞣質(zhì)，但有些中藥中所含的鞣質(zhì)為可水解鞣質(zhì)與縮合鞣質(zhì)的混合物。縮合鞣質(zhì)的結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，一般認(rèn)為它與羥基黃烷類，特別是羥基黃烷-3-醇和羥基黃烷-3，4-二醇有密切的關(guān)系，可以認(rèn)為羥基黃烷類是縮合肉制的前體，羥基黃烷之間以碳-碳鍵縮合成鞣質(zhì)，故不能水解。羥基黃烷類主要以兒茶素為代表，兒茶素不是鞣質(zhì)，不具有鞣質(zhì)的通性，當(dāng)它們相互縮合成大分子多聚物后即具有鞣質(zhì)的特性。如雙兒茶素為二聚物，只有部分鞣質(zhì)的性質(zhì)，仍屬于前體物，隨著聚合度的增加，鞣質(zhì)的性質(zhì)越顯著，真正的縮合鞣質(zhì)為三、四及五聚合物等。第10頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二（-）兒茶素的結(jié)構(gòu)雙兒茶素的結(jié)構(gòu)實(shí)例第11頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二課堂互動(dòng)鞣質(zhì)可以分為哪幾類？分類依據(jù)是什么？2.去除鞣質(zhì)的方法有哪些？為何要去除存在于多數(shù)中藥中的鞣質(zhì)類成分？

第12頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二二鞣質(zhì)類化學(xué)成分的理化性質(zhì)性味

溶解性還原性

鞣質(zhì)多為無定形固體，有澀味和收斂性，能與蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶于水的化合物。如在鞣質(zhì)的水溶液中加入明膠可產(chǎn)生混濁或沉淀。

鞣質(zhì)可溶于水和乙醇中，形成膠體溶液，也可溶于丙酮、醋酸乙酯、乙醚和乙醇的混合溶液，不溶于極性小的有機(jī)溶劑和無水乙醚、氯仿、苯、石油醚、二硫化碳、四氯化碳等。鞣質(zhì)具有還原性，在空氣中尤其在堿性條件下極易被氧化。鞣質(zhì)的水溶液長時(shí)間放置或與稀酸共煮，因氧化、聚合作用可生成水不溶性沉淀，所以，一些中藥針劑在滅菌貯藏過程中易析出沉淀。第13頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二三鞣質(zhì)類化學(xué)成分的的提取分離與檢識鞣質(zhì)類化學(xué)成分的提取分離與檢識提取

檢識分離醋酸鉛沉淀法三氯化鐵反應(yīng)和鐵氰化鉀反應(yīng)生物堿及重金屬鹽反應(yīng)明膠沉淀法生物堿沉淀法第14頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二（一）提取因鞣質(zhì)含有多個(gè)酚羥基使其具有較強(qiáng)極性及不穩(wěn)定性，導(dǎo)致它易與金屬離子生成縮合物而不易被提取出，因此一般選用玻璃或不銹鋼的容器進(jìn)行提取?？傳焚|(zhì)的提取可利用丙酮-水（5:5）～（7:3）作溶劑來提取可水解鞣質(zhì)。用上述溶劑于室溫冷浸或滲漉提取中藥粗粉，提取液濃縮至一定程度，依次用乙醚或氯仿、醋酸乙酯和正丁醇萃取，乙醚或氯仿可去除親脂性雜質(zhì)及色素等，醋酸乙酯和正丁醇部位即含鞣質(zhì)粗品。

第15頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二（二）分離PiaionHP-20和MCl-gelCHP-20經(jīng)常被用于一些鞣質(zhì)異構(gòu)體的分離，均用不同比例的甲醇-水和乙醇-丙酮作為洗脫劑。常用SephadexL-H-20分離水解鞣質(zhì)，主要用于不同聚合度鞣質(zhì)的分離。鞣質(zhì)的去除方法

凝膠柱色譜法大孔吸附樹脂色譜鞣質(zhì)除在中藥五倍子、地榆中含量較高為有效成分外，多數(shù)情形下為無效成分，因此在提取分離過程中須將它除去。第16頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二鞣質(zhì)的去除方法利用蛋白質(zhì)與鞣質(zhì)在水溶液中形成鞣酸蛋白的原理而除去鞣質(zhì)。樣品水溶液加4%明膠水溶液，至沉淀完全，過濾，濾液減壓濃縮至小體積，加3~5倍量乙醇，使過量明膠沉淀，濾去沉淀。中性和堿式醋酸鉛在水或稀醇溶液中能與許多物質(zhì)生成難溶的鉛鹽或絡(luò)鹽。試液中加入飽和醋酸鉛水溶液可使鞣質(zhì)產(chǎn)生沉淀，從而除去鞣質(zhì)。操作中要注意脫鉛處理。（方法有：硫化氫脫鉛法、硫酸鈉脫鉛法及離子交換樹脂法等）生物堿沉淀法醋酸鉛沉淀法明膠沉淀法樣品水溶液加入生物堿（如1.5%吡啶）水溶液至沉淀完全，過濾，濾液用氯仿振搖，除去過量的生物堿即得（注意水溶液中其他成分可否被氯仿提出）。第17頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二課堂互動(dòng)用前述知識說明兒茶中各種化學(xué)成分的特點(diǎn)和性質(zhì)，并分析生產(chǎn)工藝中如何提取各種不同的鞣質(zhì)類成分。第18頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二知識鏈接（凝膠色譜）

以多孔凝膠作為固定相的柱色譜形式稱為凝膠色譜。（一）凝膠色譜原理凝膠色譜原理是分子篩原理。因凝膠顆粒具三維的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，在水中可膨脹并有許多一定大小的網(wǎng)眼。當(dāng)溶液通過凝膠顆粒時(shí)，溶液中分子直徑小于網(wǎng)眼的成分可進(jìn)入凝膠內(nèi)部，而分子直徑大于網(wǎng)眼的成分則被排阻在凝膠顆粒之外，按分子由大到小的順序流出。因此凝膠色譜又稱為分子排組色譜、凝膠過濾色譜、凝膠滲透色譜等。（二）基本構(gòu)成要素（三）類型凝膠色譜的基本構(gòu)成要素有固定相、流動(dòng)相以及被分離成分的溶液。凝膠色譜一般按選用的流動(dòng)相不同分為兩類。以水溶液為流動(dòng)相的叫凝膠過濾色譜(GFC)；以有機(jī)溶劑為流動(dòng)相的叫凝膠滲透色譜(GPC)。（四）操作技術(shù)1．凝膠的預(yù)處理2．裝柱3．上樣4．洗脫5．收集第19頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二

凝膠色譜基本構(gòu)成要素固定相（1）種類固定相是多孔凝膠（G）。主要有葡聚糖凝膠（sephadexG）和羥丙基葡聚糖凝膠(sephadexLH-20)。后者為G-25經(jīng)羥基化處理得到的產(chǎn)物。最常用的是葡聚糖凝膠。（2）葡聚糖凝膠的結(jié)構(gòu)葡聚糖凝膠也稱交聯(lián)葡聚糖凝膠，是由葡聚糖和甘油基通過醚橋相互交聯(lián)而成的多孔性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，其結(jié)構(gòu)式如下：第20頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二

凝膠色譜基本構(gòu)成要素固定相（3）葡聚糖凝膠的性質(zhì)葡聚糖分子內(nèi)含有大量羥基而具有極性，在水中即膨脹成凝膠粒子，是一種水不溶性的白色球狀顆粒，由于醚鍵的不活潑性，因而具有較高的穩(wěn)定性。不溶于水和鹽溶液，在堿性和弱酸性溶液中性質(zhì)穩(wěn)定，但在酸性溶液中高溫加熱能促使糖甙鍵水解。和氧化劑接觸會(huì)分解，長期不用宜加防腐劑。（4）葡聚糖凝膠的型號1）型號：凝膠的商品型號用吸水量來表示。如G-25型號中G代表葡聚糖凝膠，后面的阿拉伯?dāng)?shù)值表示該型號的干凝膠1g所吸收水量的10倍值。即G-25型號每克干凝膠的吸水量為2.5g。商品型號有G-10、G-15、G-25、G-50、G-75、G-100、G-200等。2）不同型號的性能及應(yīng)用：型號數(shù)字越大，吸水量越大，凝膠體積膨脹越大，孔隙也越大，可用于大分子物質(zhì)的分離；反之，用于小分子物質(zhì)的分離。G型凝膠用于流動(dòng)相為水的色譜分離；另外，LH型凝膠應(yīng)用范圍更廣，極性、親水性和親脂性流動(dòng)相中均可應(yīng)用。第21頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二

凝膠色譜基本構(gòu)成要素流動(dòng)相（1）基本要求流動(dòng)相必須是能夠溶解試劑的溶劑；不能破壞凝膠的穩(wěn)定性；能潤濕凝膠使其膨脹；粘度要低，能保持一定的流動(dòng)性。（2）種類1）極性溶劑和親水性溶劑：水和各種水溶液。2）親脂性溶劑：各種親脂性有機(jī)溶劑。如氯仿、四氫呋喃、甲苯等。（3）選擇原則分離水溶性樣品選擇極性溶劑和親水性溶劑；分離脂溶性成分選擇親脂性溶劑。第22頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二

凝膠色譜的操作技術(shù)凝膠的預(yù)處理

將干凝膠用選好的流動(dòng)相（溶劑）充分浸泡膨脹后備用。

一般選擇直徑為2.5cm的柱子。凝膠裝入柱中后，放出溶劑，在用溶劑不斷流洗柱子，使凝膠沉集、柱床穩(wěn)定。并始終保持一定的液面。

把需要分離的成分溶于選好的溶劑中，上樣前為防止破壞柱床表面，要在柱床表面放一張濾紙。上樣方法同一般柱色譜。洗脫劑和浸泡凝膠所用的溶劑相同。

分段收集，定性檢查，合并同一組分，再行精制。裝柱

上樣

洗脫

收集

第23頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二

鞣質(zhì)類的檢識生物堿及重金屬鹽反應(yīng)三氯化鐵反應(yīng)和鐵氰化鉀反應(yīng)由于鞣質(zhì)結(jié)構(gòu)中含有大量酚羥基，因此在鞣質(zhì)的水溶液中加入三氯化鐵能產(chǎn)生綠色、藍(lán)色或沉淀；鞣質(zhì)與鐵氰化鉀的氨溶液反應(yīng)產(chǎn)生深紅色并很快變成棕色。鞣質(zhì)可與生物堿及重金屬鹽作用生成不溶于水的沉淀。如與醋酸鉛、醋酸銅、濃重鉻酸鉀。還可與堿土金屬的氫氧化物如氫氧化鈣溶液生成沉淀。（三）檢識第24頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二

任務(wù)一兒茶中鞣質(zhì)類化學(xué)成分的提取分離技術(shù)學(xué)習(xí)目標(biāo)一二三兒茶中兒茶素與（-）表兒茶素的提取分離技術(shù)必備知識四課堂互動(dòng)第25頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二一學(xué)習(xí)目標(biāo)2掌握兒茶中鞣質(zhì)類化合物的提取、分離及鑒定技術(shù)。熟悉兒茶中鞣質(zhì)類化合物的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)。了解兒茶中鞣質(zhì)類化合物的存在及生物活性。知識要求3能力要求1掌握兒茶中鞣質(zhì)類化學(xué)成分的提取分離原理及操作技術(shù)。熟練進(jìn)行兒茶中鞣質(zhì)類化合物的提取、分離及鑒定操作。學(xué)會(huì)兒茶中鞣質(zhì)類化合物的色譜鑒定技術(shù)。學(xué)習(xí)目的第26頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二二兒茶中鞣質(zhì)類化學(xué)成分的提取分離技術(shù)本品為豆科植物兒茶(Acaciacatechu(L.F.)Willd)的去皮枝、干的干燥煎膏。冬季采收枝、干，除去外皮，砍成大塊，加水煎煮，濃縮，干燥。在我國主要分布在云南、廣西等地。具有收濕生肌斂瘡等作用。第27頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二（一）設(shè)備、儀器及藥品滲漉筒、普通漏斗、錐形瓶、減壓濃縮裝置、玻璃棒、紗布、新鮮兒茶心材粉末、丙酮、醋酸乙酯（二）兒茶中（-）表兒茶素與兒茶素的提取與分離流程第28頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二1.兒茶中（-）表兒茶素的提取與分離第29頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二2.兒茶素的提取與分離第30頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二（二）兒茶中主要有效成分的提取分離（一）兒茶中主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)三必備知識第31頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二（一）兒茶中主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)

兒茶中主要含有酚酸性成分。包括兒茶素、（-）表兒茶素、兒茶鞣酸、對苯二甲酸甲酯等。此外，還含有較多的多聚糖，如由半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖及葡萄糖醛酸組成的二聚糖、三聚糖、六聚糖等。（-）表兒茶素

類白色粉末，熔點(diǎn)242℃，溶于水（易溶于熱水）、甲醇、乙醇、冰醋酸等，不溶于苯、氯仿、石油醚。（+）兒茶素（-）兒茶素類白色粉末，溶于熱水、甲醇、乙醇、冰醋酸等，不溶于苯、氯仿、石油醚。白色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)212~216℃，溶于熱水、甲醇、乙醇、冰醋酸等，微溶于冷水，幾乎不溶于苯、氯仿、石油醚。第32頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二（-）表兒茶素（+）兒茶素（-）兒茶素第33頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二（二）兒茶中主要有效成分的提取分離

從兒茶中提取分離鞣質(zhì)類成分是根據(jù)兒茶中的各種鞣質(zhì)類成分的溶解性特點(diǎn)選擇合適的提取溶劑，去油溶劑，結(jié)晶溶劑，逐步達(dá)到分離目的的。

第34頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二四課堂互動(dòng)

用前述知識說明兒茶中各種化學(xué)成分的特點(diǎn)和性質(zhì)，并分析生產(chǎn)工藝中用如何提取各種不同的鞣質(zhì)類成分。

第35頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二有機(jī)酸類化學(xué)成分的提取分離技術(shù)

學(xué)習(xí)提示有機(jī)酸類化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及提取分離知識任務(wù)二青木香中有機(jī)酸類化學(xué)成分的提取分離技術(shù)第36頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二學(xué)習(xí)提示有機(jī)酸類成分的結(jié)構(gòu)類型一二三有機(jī)酸類成分的理化性質(zhì)有機(jī)酸類化學(xué)成分的提取分離第37頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二分布生物活性定義有機(jī)酸是分子中含有羧基（-COOH）的一類酸性有機(jī)化合物分布廣泛，普遍存在于植物的花、葉、莖、果實(shí)、種子、根等部分。在植物體內(nèi)除有少數(shù)以游離狀態(tài)存在外，一般都與鈣、鉀、鎂等金屬離子或生物堿結(jié)合成鹽。近年來發(fā)現(xiàn)很多藥材中含有的有機(jī)酸類成分都具有一定的生物活性。如茵陳蒿中綠原酸有利膽、抗菌作用；土槿皮中的土槿皮酸有很好的抗真菌作用；大風(fēng)子油中的脂肪酸是治療麻風(fēng)病的有效成分；金銀花中的異綠原酸有抗菌的作用等等。大量研究結(jié)果顯示，有機(jī)酸有多種生物活性。有機(jī)酸第38頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二脂肪族有機(jī)酸

芳香族有機(jī)酸一有機(jī)酸類成分的結(jié)構(gòu)類型

檸檬酸大風(fēng)子油酸綠原酸第39頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二檸檬酸大風(fēng)子油酸

綠原酸

主要來源于檸檬（Citruslimon(L.)Burm.f）是蕓香科小喬木或枝條開展的灌木

有預(yù)防感冒、刺激造血和抗癌等作用主要來源于大風(fēng)子科(Flacourtiaceae)大風(fēng)子屬(Hydnocarpus)的幾種喬木籽中獲得的黃色或褐黃色液體

有攻毒，殺蟲等作用主要來源于菊科植物茵陳（AremisiacapillalisThunb.）早春采集的嫩莖葉有清熱利濕等作用第40頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二二有機(jī)酸類化學(xué)成分的理化性質(zhì)性狀

溶解性酸性含8個(gè)碳原子以下的低級脂肪酸和不飽和脂肪酸在常溫時(shí)多為液體，較高級的飽和脂肪酸、多元酸和芳香酸多為固體。

低級脂肪酸多易溶于水或乙醇，隨分子中所含碳原子數(shù)目的增多，對水的溶解度即迅速降低，4個(gè)碳原子以上的酸僅微溶于水；分子中極性集團(tuán)越多，在水中的溶解度越大。多元酸比一元酸易溶于水，含羥基數(shù)目多的有機(jī)酸水溶性大；芳香族的酸類難溶于水，而易溶于乙醇和乙醚中；芳香酸易升華，也能隨水蒸氣蒸餾。有機(jī)酸中含羧基，具有一般羧酸的性質(zhì)，可生成酯、酰胺、酰鹵等衍生物；能和堿金屬、堿土金屬結(jié)合成鹽，其一價(jià)金屬鹽易溶于水，不溶于有機(jī)溶劑和高濃度的乙醇，二價(jià)、三價(jià)金屬鹽較難溶于水，如有機(jī)酸的鉛鹽、鈣鹽。常用于有機(jī)酸的提取和分離。檢識第41頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二有機(jī)酸類化學(xué)成分的檢識溴酚藍(lán)試驗(yàn)

色譜檢識

pH試紙?jiān)囼?yàn)

有機(jī)酸溶液可使pH試紙呈酸性反應(yīng)。薄層色譜展開劑：正丁醇∶冰醋酸∶水（4∶1∶5）正丁醇∶乙醇∶水（4∶1∶5）異戊醇∶三甲基吡啶∶水（10∶2∶1）正丁醇∶吡啶∶二氧六環(huán)∶水（14∶4∶1∶1）顯色劑0.05%溴酚藍(lán)的乙醇溶液噴霧，于藍(lán)色背景上呈黃色斑點(diǎn)。將含有機(jī)酸的提取液滴在濾紙上，再滴加0.1%溴酚藍(lán)試劑，立即在藍(lán)色的背景上顯黃色斑點(diǎn)。紙色譜吸附劑：聚酰胺（100目）∶淀粉∶水（5∶1∶5）鋪板展開劑95%乙醇氯仿∶甲醇（1∶1）顯色劑0.05%溴酚藍(lán)水溶液吸附劑硅膠∶石膏∶水（10∶2∶30）濕法鋪板，晾干后于105℃干燥半小時(shí)。展開劑95%乙醇∶濃氨水∶水（10∶16∶12）醋酸乙酯∶甲醇∶濃氨水（90∶5∶3）苯∶甲醇∶醋酸（95∶8∶4）顯色劑0.05%溴酚藍(lán)水溶液第42頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二三有機(jī)酸類化學(xué)成分的的提取分離有機(jī)酸類化學(xué)成分的的提取分離水或堿水提取-酸沉淀法

鉛鹽或鈣鹽沉淀法

有機(jī)溶劑提取法

有機(jī)酸在中藥中一般以鹽的形式存在，故可用水或稀堿水提?。?0%氫氧化鈉），提取液經(jīng)酸化后，如所生成的游離有機(jī)酸在水中溶解度較低，即有沉淀析出。也可用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑萃取，有機(jī)酸溶于有機(jī)溶劑中。利用有機(jī)酸的二價(jià)或三價(jià)金屬鹽較難溶于水的性質(zhì)，在含有有機(jī)酸的水溶液中加入醋酸鉛、堿式醋酸鉛或氫氧化鈣，可產(chǎn)生有機(jī)酸的鉛鹽或鈣鹽的沉淀。再將所得的鉛鹽或鈣鹽的沉淀懸浮于乙醇中，分別按常法脫鉛、脫鈣（用硫酸），即可得粗品有機(jī)酸。根據(jù)游離有機(jī)酸易溶于有機(jī)溶劑，難溶于水，而有機(jī)酸鹽則易溶于有機(jī)溶劑的性質(zhì)，可先用適宜的有機(jī)溶劑提取，提取液再用堿水萃取，有機(jī)酸成鹽而轉(zhuǎn)入堿水中，分出堿層、酸化，再用有機(jī)溶劑萃取，可得到較純的總有機(jī)酸。第43頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二

任務(wù)二青木香中有機(jī)酸類化學(xué)成分的提取分離技術(shù)

學(xué)習(xí)目標(biāo)一二青木香中有機(jī)酸類化學(xué)成分的提取分離技術(shù)必備知識三第44頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二一學(xué)習(xí)目標(biāo)2掌握青木香中馬兜鈴酸的提取、分離及鑒定技術(shù)。熟悉青木香中馬兜鈴酸的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)。了解青木香中馬兜鈴酸的存在及生物活性。知識要求3能力要求1掌握青木香中馬兜鈴酸的提取分離原理及操作技術(shù)。熟練進(jìn)行青木香中馬兜鈴酸的提取、分離及鑒定操作。學(xué)會(huì)青木香中馬兜鈴酸的色譜鑒定技術(shù)。學(xué)習(xí)目的第45頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二二青木香中有機(jī)酸類化學(xué)成分的提取分離技術(shù)青木香為馬兜鈴科馬兜鈴屬植物馬兜鈴（Aristolochiadebilis）的干燥根。青木香中含有多種硝基菲酸類成分，統(tǒng)稱為馬兜鈴酸。經(jīng)藥理與臨床試驗(yàn)證明有興奮吞噬細(xì)胞的作用，可提高抗生素及化療藥物的治療效果，并且毒性很低，治療劑量僅為毒性劑量的1‰。第46頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二（一）設(shè)備、儀器及藥品索氏提取器、冷凝器、圓底燒瓶、橡皮管、水浴、減壓濃縮裝置、普通漏斗、紗布、pH試紙、比色卡、玻璃棒、分液漏斗、青木香粗粉、乙醇、碳酸氫鈉、鹽酸、丙酮、青木香粗粉（二）青木香中馬兜鈴酸的提取

第47頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二1馬兜鈴酸的結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)

馬兜鈴酸為黃白色針狀結(jié)晶，能與硫酸作用產(chǎn)生綠色。熔點(diǎn)287℃～292℃（分解）.微溶于水,可溶于乙醇、氯仿、乙醚、丙酮、堿水，不溶于苯、二硫化碳，遇碳酸鋇、醋酸鉛等重金屬溶液則產(chǎn)生沉淀。

馬兜鈴酸第48頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二2.青木香中馬兜鈴酸的提取與分離流程如下：

馬兜鈴酸（1）青木香中馬兜鈴酸A與尿囊素的提取。第49頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二

馬兜鈴酸馬兜鈴總酸常用硅膠拄色譜進(jìn)行分離，以氯仿、氯仿-丙酮混合液洗脫，再配合薄層色譜檢識可分得三種馬兜鈴酸：馬兜鈴酸A、馬兜鈴酸及7-羥基馬兜鈴酸。（2）．青木香中馬兜鈴總酸的提取。第50頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二北馬兜鈴果實(shí)中馬兜鈴酸A的提取北馬兜鈴種子中馬兜鈴酸D的提取知識拓展第51頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二必備知識

馬兜鈴總酸（aristolochicacid）橙黃色結(jié)晶，味苦，熔點(diǎn)262℃～266℃（分解）。不溶于水，難溶于乙醇、乙醚、氯仿、醋酸乙酯，易溶于丙酮及堿性水溶液。馬兜鈴酸（1）馬兜鈴酸A（aristolochicacidA）分子式C17H11NO7，相對分子質(zhì)量341.29，帶光澤的棕色葉狀結(jié)晶（二甲基甲酰胺-水），熔點(diǎn)281℃～286℃（分解）。溶于乙醇、氯仿、丙酮、苯胺及堿中，微溶于水,幾乎不溶于苯及二硫化碳。（2）馬兜鈴酸B（aristolochicacidB）分子式C16H9NO6，相對分子質(zhì)量311.26。黃色粒鯨（氯仿），熔點(diǎn)267℃～271℃（分解）。（3）馬兜鈴酸C（aristolochicacidC）分子式C16H9NO7，相對分子質(zhì)量327.27。橘紅色針晶（氯仿），熔點(diǎn)284℃（分解）。（4）馬兜鈴酸D（aristolochicacidD）分子式C17H11NO8，相對分子質(zhì)量357.29。橙紅色針晶（氯仿），熔點(diǎn)271℃（分解）。第52頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二北馬兜鈴果實(shí)中馬兜鈴酸A的提取北馬兜鈴種子中馬兜鈴酸D的提取馬兜鈴酸A、B、C、D結(jié)構(gòu)第53頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二必備知識

分子式C4H6N4O3，相對分子質(zhì)量158.12。單斜片狀結(jié)晶或棱柱結(jié)晶（水），熔點(diǎn)238℃，1g尿囊素溶于190ml水、500ml乙醇，熱水及熱乙醇中溶解度更大。幾乎不溶于乙醚。尿囊素（allantoin）尿囊素第54頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二氨基酸類化學(xué)成分的提取分離技術(shù)

學(xué)習(xí)提示氨基酸類化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及提取分離知識任務(wù)三南瓜子中南瓜子氨酸的提取分離技術(shù)第55頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二學(xué)習(xí)提示氨基酸類成分的結(jié)構(gòu)類型一二三氨基酸類化學(xué)成分的理化性質(zhì)氨基酸類化學(xué)成分的提取分離第56頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二氨基酸

氨基酸廣泛存在于動(dòng)植物體內(nèi)，由于它的分子中同時(shí)含有氨基和羧基，所以稱為氨基酸。氨基酸的活性作用也是多方面的，如南瓜子中南瓜子氨酸、使君子中使君子氨酸都有驅(qū)蟲作用；天冬、玄參和棉根中天門冬素有鎮(zhèn)咳和平喘的作用。南瓜子氨酸使君子氨酸天門冬素

第57頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二一氨基酸類成分的結(jié)構(gòu)類型

常見氨基酸以組成蛋白質(zhì)的30余種氨基酸為主，都屬α--氨基羧酸，具有R-CH（NH2）-COOH通式，多數(shù)是一元氨基一羧酸，也有一元氨基二羧酸、二元氨基一羧酸和含有雜環(huán)的氨基酸等。R-CH（NH2）-COOH第58頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二組成蛋白質(zhì)常見氨基酸的結(jié)構(gòu)

組成蛋白質(zhì)常見氨基酸的結(jié)構(gòu)一元氨基一羧酸類(R=)

二元氨基一羧酸類(R=）一元氨基二羧酸類(R=)

如甘氨酸（GLY）R=–H；丙氨酸（ALA）R=–CH3；絲氨酸（SER）R=–CH2OH；半胱氨酸（CYST）R=–CH2–SH；磺丙氨酸（CYA）R=–CH2–SO3H；苯丙氨酸（PHEN）；酪氨酸（TYR）；α-氨基丁酸(ABA)R=––CH2–CH3；酥氨酸(THR)；

蛋氨酸(MET)R=–CH2–CH2–S–CH3；正纈氨酸(NOV)R=–CH2–CH2–CH3纈氨酸(VAL)；異亮氨酸(ISOL)；亮氨酸(LEU)

脯氨酸（PRO）；羥基脯氨酸（APRO）天冬氨酸（ASP）R=–CH2–COOH；谷氨酸(麩氨酸)（GLU）R=–CH2–CH2–COOH；羥基谷氨酸（HGLU）吡咯衍生物類(R=)

色氨酸（TRY）；α，γ二氨基丁酸（DABA）R=–CH2–CH2–NH2

；組氨酸（HIST）；

鳥氨酸（ORNT）R=––CH2–CH2–CH2–NH2；

精氨酸（ARG）；賴氨酸–CH2(CH2)3–NH2

第59頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二二氨基酸類化學(xué)成分的理化性質(zhì)性質(zhì)

顯色反應(yīng)氨基酸分子中既有羧基又有氨基，所以氨基酸為兩性物質(zhì)，既溶于酸又溶于堿。氨基酸為無色結(jié)晶，極性較大，易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑。茚三酮試驗(yàn)噴后110℃加熱至顯出顏色，一般氨基酸呈紫色，個(gè)別氨基酸顯黃色。此外，氨氣也會(huì)出現(xiàn)此現(xiàn)象，故用茚三酮試劑檢查氨基酸時(shí)，應(yīng)避免實(shí)驗(yàn)室中氨氣的干擾。1，2-萘醌-4-磺酸試劑（Folin試劑）噴后在室溫干燥，不同氨基酸產(chǎn)生各種不同的顏色。吲哚醌試驗(yàn)不同氨基酸與吲哚醌試劑產(chǎn)生不同的顏色，且不受氨氣的影響，但其靈敏度不及茚三酮。

第60頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二三氨基酸類化學(xué)成分的提取氨基酸類成分常用離子交換法提取。根據(jù)氨基酸易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑的性質(zhì)，提取氨基酸時(shí)，可用適量水浸泡藥材，濾過，濾液減壓濃縮至1ml相當(dāng)1g生藥后，加2倍量95%乙醇，沉淀除去蛋白、多糖等雜質(zhì)，濾液再濃縮至小體積，通過強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂，然后用適當(dāng)濃度的氫氧化鈉（1mol/L）或氨水（2mol/L）洗脫，收集與茚三酮呈陽性反應(yīng)的洗脫液，濃縮處理后，可得總氨基酸，或用70%乙醇為溶劑進(jìn)行提取，再將乙醇回收至無醇味，通過強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂，再用上法得總氨基酸。第61頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二

任務(wù)三南瓜子中南瓜子氨酸的提取分離技術(shù)

學(xué)習(xí)目標(biāo)一二南瓜子中南瓜子氨酸的提取分離技術(shù)第62頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二一學(xué)習(xí)目標(biāo)2掌握南瓜子中南瓜子氨酸的提取、分離及鑒定技術(shù)。熟悉南瓜子中南瓜子氨酸的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)。了解南瓜子中南瓜子氨酸的存在及生物活性。知識要求3能力要求1掌握南瓜子中南瓜子氨酸的提取分離原理及操作技術(shù)。熟練進(jìn)行南瓜子中南瓜子氨酸的提取、分離及鑒定操作。學(xué)會(huì)南瓜子中南瓜子氨酸的色譜鑒定技術(shù)。學(xué)習(xí)目的第63頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二二南瓜子中南瓜子氨酸的提取分離技術(shù)南瓜子氨酸是從葫蘆科南瓜（Cucurbitamoschata）的種子中分離出的一種氨基酸。南瓜子氨酸是一種堿性氨基酸，可與過氯酸（HClO4）形成結(jié)晶性的鹽，從稀乙醇溶液中析出。通過實(shí)驗(yàn)表明，南瓜子氨酸對血吸蟲童蟲生長發(fā)育有抑制作用，并能驅(qū)絳蟲。南瓜子氨酸第64頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二（一）設(shè)備、儀器及藥品強(qiáng)酸型陽離子交換柱色譜、弱堿型陰離子交換柱色譜、減壓濃縮裝置、普通漏斗、紗布、pH試紙、比色卡、氨水、氯酸、95%乙醇、南瓜子（二）南瓜子中南瓜子氨酸的提取工藝流程

第65頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二

南瓜子中南瓜子氨酸的提取工藝流程第66頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二蛋白質(zhì)和酶類化學(xué)成分的提取分離技術(shù)

學(xué)習(xí)提示蛋白質(zhì)和酶類化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及提取分離知識任務(wù)四天花粉中蛋白質(zhì)類化學(xué)成分的提取分離技術(shù)知識鏈接分級沉淀法第67頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二學(xué)習(xí)提示蛋白質(zhì)和酶類化學(xué)成分的理化性質(zhì)一二蛋白質(zhì)和酶類化學(xué)成分的提取分離第68頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二蛋白質(zhì)和酶類蛋白質(zhì)和酶是普遍存在的一類化合物，但已經(jīng)發(fā)現(xiàn)作為有效成分而存在的卻為數(shù)不多。如來自番木瓜的蛋白質(zhì)水解酶，可作為驅(qū)除腸內(nèi)寄生蟲藥，稱為木瓜酶；來自鳳梨的鳳梨酶又稱菠蘿酶，可以消化蛋白質(zhì)，并作為除腸蟲藥和抗水腫及抗炎癥藥。第69頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二一蛋白質(zhì)和酶類化學(xué)成分的理化性質(zhì)蛋白質(zhì)是由α–氨基酸以肽鍵的形式（即氨基與另一氨基酸分子中羧基脫水形成的化學(xué)鍵）相互結(jié)合而形成的鏈狀大分子化合物。多數(shù)蛋白質(zhì)可溶于水，生成膠體溶液。一般煮沸其水溶液蛋白質(zhì)即被凝結(jié)而自溶液中沉淀析出，振搖蛋白質(zhì)水溶液能產(chǎn)生似肥皂狀的泡沫。

酶是有機(jī)體內(nèi)具有催化作用的蛋白質(zhì)，具有專一性，一種酶只能催化某一種特定的反應(yīng)。植物中往往特定的酶和苷類共存與同一組織中，易使苷類發(fā)生水解。酶能溶于水，在加熱或用強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、乙醇處理時(shí)則失去活性。第70頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二蛋白質(zhì)和酶類化學(xué)成分的理化性質(zhì)顏色反應(yīng)兩性反應(yīng)蛋白質(zhì)的凝聚蛋白質(zhì)在水溶液中，可被乙醇、硫酸銨或氯化鈉的濃溶液沉淀，所沉淀出的蛋白質(zhì)還可溶于水。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)加熱至一定溫度時(shí)或強(qiáng)無機(jī)酸或堿作用時(shí)，則產(chǎn)生不可逆的沉淀反應(yīng)，此稱為蛋白質(zhì)的變性作用，沉淀的蛋白質(zhì)稱作變性蛋白質(zhì)。這種變性蛋白質(zhì)溶解度改變，對酶反應(yīng)的敏感性、生物活性以及分子的形狀都改變。蛋白質(zhì)和氨基酸一樣，分子中既有羧基又有氨基，致成呈兩性。即在不同的pH值溶液中顯示酸性或堿性。蛋白質(zhì)分子中具有很多親水性基團(tuán)，在水溶液中其表面吸附了大量水分子，形成一層牢固的水膜，使溶液得以穩(wěn)定。當(dāng)水合作用被破壞時(shí)，蛋白質(zhì)分子的表面水膜也隨之消失，促進(jìn)了蛋白質(zhì)分子間的凝聚，易于從溶液中沉淀出來。蛋白質(zhì)的變性雙縮脲反應(yīng)、Millon反應(yīng)、Hopkins-Cole反應(yīng)

、Sakaguchi反應(yīng)

c、Danasyl反應(yīng)、硫的反應(yīng)

第71頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二顏色反應(yīng)Millon反應(yīng)

雙縮脲反應(yīng)

蛋白質(zhì)中存在大量肽鏈，當(dāng)其在堿性水溶液中遇少量硫酸銅溶液時(shí)，即顯紫色或紫紅色。如果蛋白質(zhì)分子中含有半胱氨酸或蛋氨酸等含硫氨基酸時(shí)，與堿及醋酸鉛共熱會(huì)產(chǎn)生黑色硫化鉛沉淀。蛋白質(zhì)遇Millon試劑或共熱能呈紅色，證明蛋白質(zhì)中有酪氨酸的存在。由于吲哚衍生物與乙醛酸縮合產(chǎn)生紫色。蛋白質(zhì)分子中包含有色氨酸時(shí)呈陽性反應(yīng)。Hopkins-Cole反應(yīng)

硫的反應(yīng)

Sakaguchi反應(yīng)

c蛋白質(zhì)分子中含有精氨酸時(shí)，在中性或微堿性的水溶液中加α-萘酚的稀氫氧化鈉溶液，混勻后滴加1%次亞氯酸鈉溶液數(shù)滴（避免過量），出現(xiàn)紅色為陽性反應(yīng)。Danasyl反應(yīng)

蛋白質(zhì)或肽類分子中末端氨基酸部分中氨基在有碳酸氫鈉溶液存在時(shí)，易與1-二甲氨基萘5-磺酰氯反應(yīng)生成相應(yīng)的磺酰胺衍生物，從而具有強(qiáng)烈的黃色熒光（在紫光燈下觀察），在0.1～0.001μmol/L時(shí)也能藉其顯著的熒光而被檢識。第72頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二二蛋白質(zhì)和酶類化學(xué)成分的提取分離

蛋白質(zhì)和酶一般用水冷浸提取。但其浸出液中除含蛋白質(zhì)外，尚含有糖、無機(jī)鹽、有機(jī)酸和苷類等雜質(zhì)，應(yīng)先加等量乙醇或丙酮，使總蛋白質(zhì)和酶沉淀。其中還可能帶有一部分雜質(zhì)，經(jīng)離心后分出沉淀，以水溶解，再用部分分級沉淀法、透析法、色譜法等進(jìn)行純化，有時(shí)幾種方法合并使用，則分離效果更佳。

第73頁，共84頁，2023年，2月20日，星期二知識鏈接(分級沉淀法)常用的分級沉淀法有以下2種：1．有機(jī)溶劑分級沉淀法溶劑和蛋白質(zhì)溶液均需預(yù)先冷卻，然后將有機(jī)溶劑由低到高選擇幾個(gè)濃度，每一個(gè)濃度所沉淀的蛋白質(zhì)應(yīng)立即離心分離，并溶于足夠量的水或緩沖液中，使其中所含有的有機(jī)溶劑稀釋，然后在母液中再繼續(xù)加入有機(jī)溶劑至預(yù)定的另一濃度，以沉淀另一部分蛋白質(zhì)，最常用的有機(jī)溶劑為乙醇和丙酮。2．無機(jī)鹽分級沉淀法由于硫酸銨的溶解度較大，對蛋白質(zhì)或酶又無破壞作用，故最為常用。氯化鈉、硫酸鈉、硫酸銅等也可使