生物大分子相互作用分析技術(shù)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)實驗技術(shù)演示文稿

生物大分子相互作用分析技術(shù)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)實驗技術(shù)演示文稿當(dāng)前1頁，總共90頁。

第一節(jié)生物大分子相互作用分析的意義第二節(jié)常見的生物大分子相互作用分析方法第三節(jié)生物大分子相互作用分析新進(jìn)展（FRET、SPR）主要內(nèi)容當(dāng)前2頁，總共90頁。真核生物細(xì)胞

eukaryoticcell原核生物細(xì)胞prokaryoticcell細(xì)胞結(jié)構(gòu)cell引言當(dāng)前3頁，總共90頁。原核生物細(xì)胞結(jié)構(gòu)肽聚糖被膜質(zhì)膜引言當(dāng)前4頁，總共90頁。動物細(xì)胞植物細(xì)胞細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核真核生物細(xì)胞結(jié)構(gòu)引言當(dāng)前5頁，總共90頁。細(xì)胞中的大分子

MacromoleculesinCellsTheapproximatecompositionofabacterialcell.引言當(dāng)前6頁，總共90頁。分子水平DNAsequenceProteinsStructureFunction?AllCell

第一節(jié)生物大分子相互作用分析的意義當(dāng)前7頁，總共90頁。DNAPrimarytranscriptmRNAmRNAInactivemRNAproteinnucleuscytoplasmTranscriptionalcontrolPost-transcriptionalcontrolmRNAdegradationcontroltranslationcontrolactiveproteinPost-translationcontrol基因表達(dá)的調(diào)控層次當(dāng)前8頁，總共90頁。ProteincomplexSignalingnetwork生命機制當(dāng)前9頁，總共90頁。蛋白質(zhì)組學(xué)的分類

表達(dá)蛋白質(zhì)組學(xué)Quantitativestudyofproteinexpressionbetweensamplesthatdifferbysomevariable

結(jié)構(gòu)基因組學(xué)Goalistomapoutthe3-Dstructureofproteinsandproteincomplexes

功能蛋白質(zhì)組學(xué)Tostudyprotein-proteininteraction,3-Dstructures,cellularlocalizationandPTMsinordertounderstandthephysiologicalfunctionofthewholesetofproteome.當(dāng)前10頁，總共90頁。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和序列特點蛋白質(zhì)進(jìn)化過程和保守序列蛋白質(zhì)表達(dá)譜蛋白在細(xì)胞內(nèi)的定位及其相關(guān)聯(lián)的細(xì)胞器或結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)翻譯后修飾情況了解與其相關(guān)聯(lián)的其他細(xì)胞蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)信息的不同層次當(dāng)前11頁，總共90頁。蛋白質(zhì)同源二聚體(homodimer)蛋白質(zhì)異源二聚體(heterodimer)蛋白質(zhì)多聚體(polymer)蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物(protein-DNAcomplex)蛋白質(zhì)-脂質(zhì)復(fù)合物(protein-lipidcomplex)蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物(protein-RNAcomplex)DNA-DNA復(fù)合物(DNA-DNAcomplex)……生物大分子復(fù)合物的類型當(dāng)前12頁，總共90頁。第二節(jié)生物大分子相互作用分析技術(shù)

1.研究思路2.分類3.技術(shù)介紹當(dāng)前13頁，總共90頁。生物大分子相互作用分析研究思路鑒定與目標(biāo)分子相互作用的所有可能大分子詳細(xì)描述其生物功能及相互作用對其功能的影響鑒定出相互作用且在生理狀態(tài)下得到了驗證和合理的解釋當(dāng)前14頁，總共90頁。當(dāng)前15頁，總共90頁。GST融合蛋白技術(shù)(GSTpull-down)免疫共沉淀(Immunoprecipitation,Co-IP

)串聯(lián)親和純化(TandemAffinityPurification，TAP)酵母雙雜交系統(tǒng)(Yeasttwo-hybrid)噬菌體展示(Phagedisplay)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)共定位(Co-localization)熒光共振能量轉(zhuǎn)移(fluorescenceresonanceenergytransfer，F(xiàn)RET)表面等離子共振(surfaceplasmonresonance，SPR)……生物大分子相互作用分析技術(shù)當(dāng)前16頁，總共90頁。1.GST融合蛋白技術(shù)（GSTpull-downassay）——基于重組蛋白表達(dá)純化技術(shù)的體外分析系統(tǒng)基本原理：是將靶蛋白-GST融合蛋白親和固化在谷胱甘肽親和樹脂上,作為與目的蛋白親和的支撐物,充當(dāng)一種“誘餌蛋白”,目的蛋白溶液過柱,可從中捕獲與之相互作用的“捕獲蛋白”(目的蛋白),洗脫結(jié)合物后通過SDS電泳分析,從而證實兩種蛋白間的相互作用或篩選相應(yīng)的目的蛋白,“誘餌蛋白”和“捕獲蛋白”均可通過細(xì)胞裂解物、純化的蛋白、表達(dá)系統(tǒng)以及體外轉(zhuǎn)錄翻譯系統(tǒng)等方法獲得。GST：谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶(glutathioneS-transferase)當(dāng)前17頁，總共90頁。GSTpull-downassayPurificationofproteinGlutathionecolumnGlutathionebeadGSTfusionprotein當(dāng)前18頁，總共90頁。TagsPull-Down

方法的組成RtagbaitpreyResin——樹脂Bait——誘餌蛋白Prey——捕獲蛋白Tags——標(biāo)簽（GST,His,Flag,HA,MBP）當(dāng)前19頁，總共90頁。RPull-downexperimentRWashRRAddpreyWashElutionAnalysisBaitPreyControlsRAddpreyWashRRElutionAnalysisSCSDSgel實驗設(shè)計思路當(dāng)前20頁，總共90頁。GSTXY谷胱甘肽-瓊脂糖微珠細(xì)胞裂解物tube4℃下孵育2h

GST融合蛋白GSTXY+實驗流程當(dāng)前21頁，總共90頁。GSTpull-down

應(yīng)用鑒定未知相互作用的蛋白鑒定預(yù)測的或已知的相互作用當(dāng)前22頁，總共90頁。GSTpulldown驗證兩種已知蛋白質(zhì)（X-Y）的相互作用舉例inputGSTY-GFP+++X-GSTY-GFP105kDAnti-GFPX-GFP+++GSTinputAnti-GFPY-GSTX-GFP當(dāng)前23頁，總共90頁。2.免疫共沉淀（immunoprecipitation，Co-IP）——非常有效地用于鑒定細(xì)胞內(nèi)生理上的蛋白質(zhì)相互作用的分析技術(shù)

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）：是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。當(dāng)前24頁，總共90頁。

基本原理：當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。

GagaroseGagaroseXYGagarose當(dāng)前25頁，總共90頁。實驗設(shè)計思路當(dāng)前26頁，總共90頁。實驗流程SDSProteinA/GSepharose＋＋誘餌蛋白質(zhì)抗體離心誘餌蛋白質(zhì)ProteinA/GSepharose離心傳統(tǒng)方法交聯(lián)方法當(dāng)前27頁，總共90頁?；A(chǔ)：細(xì)胞在非變性條件下裂解時，完整細(xì)胞內(nèi)許多蛋白質(zhì)之間的結(jié)合保持下來。要求：在一系列操作過程中保持蛋白質(zhì)復(fù)合體不變?nèi)秉c：可能檢測不到細(xì)胞內(nèi)處于動態(tài)平衡中的低親和與瞬間的相互作用,存在著免疫球蛋白的污染，需要培養(yǎng)大量的細(xì)胞局限：僅應(yīng)用于從細(xì)胞中溶解出來仍存在于生理復(fù)合物中的蛋白質(zhì)當(dāng)前28頁，總共90頁。Co-IP

應(yīng)用鑒定已知蛋白質(zhì)相互作用的檢測鑒定新蛋白質(zhì)間的相互作用當(dāng)前29頁，總共90頁。免疫共沉淀驗證兩種已知蛋白質(zhì)的相互作用Y-GFPY-GFP+X-HAIP:HAcontrolIgGAnti-GFPAnti-GFPAnti-HAY-GFPinput舉例當(dāng)前30頁，總共90頁。3.串聯(lián)親和純化（TandemAffinityPurification，TAP）a.One-stepaffinitypurificationb.Two-stepaffinitypurification(tandemaffinitypurification)Affinitypurification(immunopurification)——融合了標(biāo)準(zhǔn)生化純化和免疫共沉淀策略的極為有效的快速純化蛋白質(zhì)復(fù)合物的方法當(dāng)前31頁，總共90頁。串聯(lián)親和純化技術(shù)的優(yōu)勢與傳統(tǒng)的生化純化方法相比與免疫共沉淀方法相比使用恒定的標(biāo)簽和標(biāo)準(zhǔn)純化條件避免了每次都要設(shè)計新純化方案的問題多步驟純化降低了細(xì)胞高豐度蛋白質(zhì)以及免疫球蛋白的背景污染當(dāng)前32頁，總共90頁。雙親和標(biāo)簽：ProA（葡萄球菌蛋白A的兩個免疫球蛋白IgG結(jié)合單位）

CBP（鈣調(diào)蛋白結(jié)合肽）實驗設(shè)計思路當(dāng)前33頁，總共90頁。實驗流程鈣調(diào)素結(jié)合肽TEV酶切位點在Ca2+

離子下結(jié)合TEV酶切用EGTA洗脫靶蛋白結(jié)合于IgG珠子充分洗滌后，在TEV蛋白酶作用下洗脫結(jié)合物鈣離子存在下，將首次洗脫物中的蛋白質(zhì)結(jié)合于鈣調(diào)蛋白包被的珠子上充分洗滌后，加入EGTA洗脫結(jié)合物當(dāng)前34頁，總共90頁。4.酵母雙雜交（yeasttwo-hybridsystem）——基于在轉(zhuǎn)錄水平上的直接在酵母細(xì)胞內(nèi)檢測蛋白質(zhì)之間相互作用的遺傳學(xué)方法當(dāng)前35頁，總共90頁?；驹恚夯趯φ婧松镎{(diào)控轉(zhuǎn)錄起始過程的認(rèn)識。

前者可識別DNA上的特異序列，并使轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域定位于所調(diào)節(jié)的基因的上游，轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域可同轉(zhuǎn)錄復(fù)合體的其他成分作用，啟動它所調(diào)節(jié)的基因的轉(zhuǎn)錄。二個結(jié)構(gòu)域不但可在其連接區(qū)適當(dāng)部位打開，仍具有各自的功能。而且不同兩結(jié)構(gòu)域可重建發(fā)揮轉(zhuǎn)錄激活作用。酵母雙雜交系統(tǒng)利用雜交基因通過激活報道基因的表達(dá)探測蛋白－蛋白的相互作用。

典型的真核生長轉(zhuǎn)錄因子，如GAL4都含有二個不同的結(jié)構(gòu)域：DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（DNA-bindingdomain，BD）和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域（transcription-activatingdomain，AD）。當(dāng)前36頁，總共90頁。酵母雙雜交（yeasttwo-hybridsystem）三個基本組成部分表達(dá)誘餌蛋白的載體，誘餌即我們感興趣的蛋白，它和DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域融合。2.表達(dá)靶蛋白的載體，靶蛋白可以是一個已知的蛋白，也可以是cDNA或基因組文庫編碼的蛋白。靶蛋白和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域融合。3.一個或多個報告基因（如控制氨基酸合成的基因、大腸桿菌的lacZ基因等），位于DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域識別的調(diào)控區(qū)的下游。ADDBDgene+reporterMeasurableproduct+DBDbaitADpreyDBDAD當(dāng)前37頁，總共90頁。實驗設(shè)計思路Target:未知蛋白或?qū)⒀芯繉ο?DNAbindingdomainBait:已知蛋白+activationdomainTarget與Bait可互換轉(zhuǎn)入同一個酵母菌中ConstructtargetplasmidandbaitplasmidTransformationScreeningDNAextractionDNAsequencing當(dāng)前38頁，總共90頁。YeastTwo-HybridAssaynucleushis-leu-trp-MeasurableproductDBDbaittrpADfishleureporterDBDADhisHISlacZ當(dāng)前39頁，總共90頁。優(yōu)勢：酵母雙雜交方法的優(yōu)勢及缺陷

采用酵母菌株敏感度高蛋白折疊易于篩選應(yīng)用范圍廣缺陷：

核內(nèi)作用假陽性假陰性轉(zhuǎn)化率當(dāng)前40頁，總共90頁。酵母雙雜交方法的應(yīng)用高靈敏度地檢測蛋白－蛋白的相互作用確定蛋白相互作用的結(jié)構(gòu)域或重要活性位點尋找與靶蛋白相互作用的新蛋白尋找具有藥物治療作用的小分子肽尋找控制蛋白相互作用的化合物蛋白相互作用圖譜的繪制當(dāng)前41頁，總共90頁。舉例酵母雙雜交前準(zhǔn)備工作雙酶切驗證21kb5kb3.5kb2kb1.5kbM1M:marker1:pGBKT7-BD-X構(gòu)建誘餌質(zhì)粒誘餌蛋白的表達(dá)X-BDGal4-BD檢測誘餌蛋白是否有毒性123Westernblot1.Yeast2.BD-yeast3.X-BD-yeast酵母生長曲線1.未轉(zhuǎn)化酵母2.BD-酵母3.X-BD-酵母當(dāng)前42頁，總共90頁。酵母雙雜交結(jié)果SD/-Trp/-Leu-Trp/-Leu/-His/-Ade+3-AT（20mM）舉例SD/-Trp/-LeuGal4-BD+Y-ADX-BD+Y-ADGal4-BD+Gal4-ADX-BD+Gal4-AD當(dāng)前43頁，總共90頁。

X-β-半乳糖苷酶藍(lán)白斑顯色分析舉例X-BD+Y-ADX-BD+gal4-ADGal4-BD+Y-ADgal4-BD+gal4-AD當(dāng)前44頁，總共90頁。酵母雙雜交測序結(jié)果酵母雙雜交得到的陽性克隆子質(zhì)粒經(jīng)過DNA測序，由NCBI數(shù)據(jù)庫的BLAST檢索cDNA編碼的蛋白質(zhì)舉例當(dāng)前45頁，總共90頁。5.噬菌體展示技術(shù)（Phagedisplay）——基于將某個蛋白與其遺傳信息之間直接聯(lián)系的篩選方法

噬菌體展示技術(shù)是將外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置，使外源基因隨外殼蛋白的表達(dá)而表達(dá)，同時，外源蛋白隨噬菌體的重新組裝而展示到噬菌體表面的生物技術(shù)。到目前為止，人們已開發(fā)出了單鏈絲狀噬菌體展示系統(tǒng)、λ噬菌體展示系統(tǒng)、T4噬菌體展示系統(tǒng)等數(shù)種噬菌體展示系統(tǒng)。當(dāng)前46頁，總共90頁。特點

該技術(shù)的主要特點是將特定分子的基因型和表型統(tǒng)一在同一病毒顆粒內(nèi)，即在噬菌體表面展示特定蛋白質(zhì)，而在噬菌體核心DNA中則含有該蛋白的結(jié)構(gòu)基因。另外，這項技術(shù)把基因表達(dá)產(chǎn)物與親和篩選結(jié)合起來，可以利用適當(dāng)?shù)陌械鞍讓⒛康牡鞍谆蚨嚯奶暨x出來。當(dāng)前47頁，總共90頁。UsedforcloningforeigngenesamongotherapplicationsProteinsandpeptidesarefusedtotheCapsid(surface)ofthephageThecombinationofthephageandpeptideisknownasaFusionProtein實驗設(shè)計思路當(dāng)前48頁，總共90頁。phagesFilamentousphagesM13FdF1OthersT4λ當(dāng)前49頁，總共90頁。FilamentousphagesInfectmanygram-negativebacteriaCircularsinglestrandedDNAgenomeAbout6.4kb.p.Long,flexibletubestructureabout1μmlongand6.5nmindiameterReproducedandsecretedfrominfectedbacteriawithoutcellkillingorlysis(lysogenicphage)當(dāng)前50頁，總共90頁。(a)Adenovirus.(b)Rotavirus.(c)Influenzavirus(courtesyofGeorgeLeser).(d)Vesicularstomatitisvirus.(e)Tobaccomosaicvirus.(f)Alfalfamosaicvirus.(g)T4bacteriophage.(h)M13bacteriophage.M13噬菌體顆粒結(jié)構(gòu)當(dāng)前51頁，總共90頁。M13噬菌體的生活史其裂解周期為：1)吸附(adsorption)2)侵入(entory)3)復(fù)制（生物合成biosynthesis）4)成熟(maturation)5)裝配(assembly)6)釋放(release)當(dāng)前52頁，總共90頁。絲狀噬菌體的基因及蛋白結(jié)構(gòu)

pIII(406aa,5~8copies)pVIII(50aa,~2700copies)pVI(112aa,5~8copies)當(dāng)前53頁，總共90頁。載體的插入位點

當(dāng)前54頁，總共90頁。pIII和pVIII噬菌體展示系統(tǒng)pIII系統(tǒng)pVIII系統(tǒng)拷貝數(shù)少多多肽片段大小大<10個氨基酸親和力高低適用范圍常用于展示由cDNA和基因組序列編碼的多肽，范圍較廣展示小肽，范圍較窄當(dāng)前55頁，總共90頁。T7噬菌體展示篩選系統(tǒng)測序分析插入序列將噬菌體文庫鋪在固定的靶蛋白上洗脫未結(jié)合的噬菌體加入大腸桿菌，擴增和富集洗脫的噬菌體鋪富集文庫鋪盤分離單個克隆3~4輪篩選驗證實驗：結(jié)合實驗實驗流程當(dāng)前56頁，總共90頁。

優(yōu)點：

A.高通量的淘選：將靶標(biāo)分子（抗體）固定在固相載體上，加入噬菌體展示肽庫（噬菌體的數(shù)量可達(dá)1011PFU），利用抗原-抗體的特異性親和力將與抗體結(jié)合的噬菌體吸附在固相載體上，不能結(jié)合的噬菌體仍在溶液中，可以通過洗滌去除，再將特異結(jié)合的噬菌體洗脫下來，如此反復(fù)數(shù)輪擴增、淘選，即可將有用的基因從多達(dá)百萬以上的噬菌體克隆中分離出來。

B.可用于模擬表位的篩選：利用噬菌體展示技術(shù)得到模擬表位的報道較多模擬表位同樣可誘發(fā)與天然表位相似的特異性免疫反應(yīng)，例如利用乙肝病毒的模擬表位免疫小鼠可誘導(dǎo)產(chǎn)生高滴度的乙肝病毒抗體。

C.易于純化重組噬菌體的純化步驟簡單、不要求昂貴的試劑與設(shè)備，在一般的實驗室條件下就可以完成。缺點：首先，目前所建的肽庫容量只能達(dá)到109，要想構(gòu)建大片段的肽庫很困難。其次，需要解決肽庫的多樣性問題。第三，少數(shù)多肽由于疏水性過強，或由于影響外膜蛋白的折疊而不能展示在噬菌體表面。噬菌體展示系統(tǒng)的應(yīng)用及優(yōu)缺點當(dāng)前57頁，總共90頁。6、細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)共定位（cellularco-localization）——基于細(xì)胞內(nèi)綠色蛋白示蹤技術(shù)的蛋白質(zhì)間相互的研究方法當(dāng)前58頁，總共90頁。綠色熒光羅丹明染色重疊相差舉例細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)共定位研究兩種已知蛋白質(zhì)時空表達(dá)關(guān)系當(dāng)前59頁，總共90頁。舉例當(dāng)前60頁，總共90頁。第三節(jié)

生物大分子相互作用分析新技術(shù)

當(dāng)前61頁，總共90頁。1、熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)（fluorescenceresonanceenergytransfer，F(xiàn)RET）——能夠?qū)τ诩?xì)胞中的蛋白質(zhì)間相互作用或?qū)ψ饔眠M(jìn)行實時原位分析的檢測方法供體熒光素受體熒光素當(dāng)前62頁，總共90頁。FRET現(xiàn)象

Binding

NOBindingFRET:TheSize

當(dāng)一個熒光分子(又稱為供體分子)的熒光光譜與另一個熒光分子(又稱為受體分子)的激發(fā)光譜相重疊時，供體熒光分子的激發(fā)能誘發(fā)受體分子發(fā)出熒光，同時供體熒光分子自身的熒光強度衰減。FRET程度與供、受體分子的空間距離緊密相關(guān)，一般為7～10nm時即可發(fā)生FRET；隨著距離延長，F(xiàn)RET呈顯著減弱.當(dāng)前63頁，總共90頁。實驗設(shè)計InteractionXCFPYYFPUVlaserFRETYellowlightemissionYYFPXCFPUVlaserCyanlightemissionDonorAcceptor當(dāng)前64頁，總共90頁。FRET的能量供體和受體滿足條件：

供體受體的激發(fā)光譜要分得足夠開；供體的發(fā)射光譜與受體的激發(fā)光譜要重疊；供受體的發(fā)射光譜要足夠分開。當(dāng)前65頁，總共90頁。CFPYFPWavelength(nm)Normalizedintensity(%)GFP綠色熒光蛋白CFP(青色熒光蛋白)(第66位Tyr→Trp)(第203位Thr→Tyr)YFP(黃色熒光蛋白)CFP(λ433nm/λ476nm)YFP(λ513nm/λ527nm)FRET的能量供體和受體當(dāng)前66頁，總共90頁。

均相檢測（無分離和洗滌步驟）實時連續(xù)地觀察活細(xì)胞的動態(tài)變化FRET技術(shù)的優(yōu)勢FluorescenceIntensityTime

LigandCy3Cy5當(dāng)前67頁，總共90頁。ABCIntermolecularDirectIndirectKinaseStep2Step1FRET應(yīng)用的類型當(dāng)前68頁，總共90頁。當(dāng)前69頁，總共90頁。FRET應(yīng)用范圍酵母雙雜交系統(tǒng)、噬菌體展示系統(tǒng)所篩選克隆的復(fù)證蛋白質(zhì)—核酸相互作用酶活性分析 蛋白酶、磷酸激酶鈣流檢測、離子通道研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)研究當(dāng)前70頁，總共90頁。FRET應(yīng)用的局限性

信噪比經(jīng)常不佳，通常為1：1

背景主要來自受體被直接激發(fā)的信號

檢測儀器的靈敏度、分辨率以及計算機影像采集和分析軟件的能力當(dāng)前71頁，總共90頁。2、表面等離子共振技術(shù)（surfaceplasmonresonance，SPR）——適合于多種類型分子并且無需借助標(biāo)記物可以實現(xiàn)對復(fù)合物直接實時測定的方法

SPRimager?II

當(dāng)前72頁，總共90頁。

基本原理：基于表面等離子共振（SPR）技術(shù)來實時跟蹤生物分子間的相互作用，而不用任何標(biāo)記物。實驗時先將一種生物分子固定在傳感器芯片表面，將與之相互作用的分子溶于溶液流過芯片表面。檢測器能跟蹤檢測溶液中的分子與芯片表面的分子結(jié)合、解離整個過程的變化。

當(dāng)前73頁，總共90頁。SPR現(xiàn)象SPRangle450?goldlayerp-Polarized

Light

表面等離子共振（SPR）是一種物理現(xiàn)象，當(dāng)入射光以臨界角入射到兩種不同折射率的介質(zhì)界面（比如玻璃表面的金或銀鍍層）時，可引起金屬自由電子的共振，由于電子吸收了光能量，從而使反射光在一定角度內(nèi)大大減弱。其中，使反射光在一定角度內(nèi)完全消失的入射角稱為SPR角。SPR隨表面折射率的變化而變化，而折射率的變化又和結(jié)合在金屬表面的生物分子質(zhì)量成正比。因此可以通過獲取生物反應(yīng)過程中SPR角的動態(tài)變化，得到生物分子之間相互作用的特異性信號。

當(dāng)前74頁，總共90頁。SPR角度——掃描曲線SPRangle當(dāng)前75頁，總共90頁。傳統(tǒng)檢測原理SPRangleshiftasbasisofmeasurement當(dāng)前76頁，總共90頁。SPRimaging

檢測原理Fixedangle,fixedwavelengthD%RReflectivitychangeasbasisofmeasurement當(dāng)前77頁，總共90頁。SPRimager系統(tǒng)RotatingStage流動相（含待分析物）Gold-coatedglassSPRchip?p-pollight棱鏡分子探針陣列當(dāng)前78頁，總共90頁。GWC’s“SPRImaging”

技術(shù)當(dāng)前79頁，總共90頁。BioarrayTerminologySPRchip?glassgoldattachmentchemistryBiosensorAnalyteProbe當(dāng)前80頁，總共90頁。MonitoringChanges:DifferenceImages=SA+Bim-PEGn-PEGSASAProbeArrayProbeArray+BiotinT7DifferenceImage:signalduetobindingofBiotinT7toStreptavidinABAB-當(dāng)前81頁，總共90頁。MonitoringChanges:Image+Chart當(dāng)前82頁，總共90頁。ValueofReal-TimeMonitoringProteinArray,

EndofExperimentAgSAConAddBiotinylatedAntibodyD%RminEnd-pointmeasurementsmissalltheaction當(dāng)前83頁，總共90頁。

優(yōu)點：分子無需標(biāo)