魚(yú)類的急性毒性實(shí)驗(yàn)課件

實(shí)驗(yàn)三魚(yú)類的急性毒性實(shí)驗(yàn)

指導(dǎo)老師：劉汝濤目錄

目的與要求

實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)材料3

實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)報(bào)告注意事項(xiàng)64125CompanyLogo通過(guò)本實(shí)驗(yàn)，熟悉和掌握魚(yú)類急性毒性試驗(yàn)的設(shè)計(jì)、條件、操作步驟，以及試驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算、分析和報(bào)告等全過(guò)程。目的與要求1CompanyLogo

1．實(shí)驗(yàn)魚(yú)的選擇與馴養(yǎng)試驗(yàn)用的魚(yú)必須對(duì)毒物敏感，具有一定的代表性，便于實(shí)驗(yàn)條件下飼養(yǎng)，來(lái)源豐富，個(gè)體健康。我國(guó)可采用的試驗(yàn)魚(yú)有四大養(yǎng)殖淡水魚(yú)（青魚(yú)、草魚(yú)、鰱魚(yú)和鳙魚(yú)）、金魚(yú)、鯽魚(yú)、野生的食蚊魚(yú)等。本實(shí)驗(yàn)選用鯽魚(yú)作為實(shí)驗(yàn)魚(yú)。在同一實(shí)驗(yàn)中要求試驗(yàn)魚(yú)必須同屬、同種、同齡，最好是當(dāng)年生。魚(yú)的平均體長(zhǎng)以7cm以下為合適。金魚(yú)體短、身寬，一般以3cm以下較為合適。同組魚(yú)中最大的體長(zhǎng)不應(yīng)超過(guò)最小的體長(zhǎng)的1.5倍。實(shí)驗(yàn)材料3CompanyLogo選用的試驗(yàn)魚(yú)在試驗(yàn)前必須在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)經(jīng)過(guò)馴養(yǎng)，使之適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室條件的生活環(huán)境和進(jìn)行健康選擇。馴養(yǎng)魚(yú)應(yīng)該與試驗(yàn)相同水質(zhì)水溫的水體中至少馴養(yǎng)7d，使其適應(yīng)試驗(yàn)環(huán)境，不應(yīng)長(zhǎng)期養(yǎng)殖（＜2個(gè)月）。馴養(yǎng)期間，應(yīng)每天換水，可每天喂食1-2次，但在試驗(yàn)前一天應(yīng)停止喂食，以免試驗(yàn)時(shí)，剩余餌料及糞便影響水質(zhì)。馴養(yǎng)期間試驗(yàn)魚(yú)死亡率不得超過(guò)5％，否則，可以認(rèn)為這批魚(yú)不符合試驗(yàn)魚(yú)的要求，應(yīng)該繼續(xù)馴養(yǎng)或者重新更換試驗(yàn)魚(yú)進(jìn)行馴養(yǎng)。試驗(yàn)前必須挑選健康的魚(yú)，即選擇體色光澤、魚(yú)鰭完整舒展、行動(dòng)活潑、逆水性強(qiáng)、大小無(wú)太大懸殊、無(wú)任何疾病的魚(yú)作為試驗(yàn)魚(yú)。任何畸形魚(yú)、外觀上反常態(tài)的魚(yú)都不得作試驗(yàn)魚(yú)。實(shí)驗(yàn)材料3CompanyLogo

2．實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備（1）實(shí)驗(yàn)容器

實(shí)驗(yàn)容器一般用玻璃或其他化學(xué)惰性材質(zhì)制成的水族箱或水槽。容器體積可根據(jù)試驗(yàn)魚(yú)的體重確定，通常以每升水中魚(yú)的負(fù)荷不得超過(guò)2g（最好為1g）。一些小型魚(yú)類幼魚(yú)可選擇500mL或1000mL燒杯為實(shí)驗(yàn)容器。容器的深度必須超過(guò)16cm，水體表面積越大越好。同一實(shí)驗(yàn)應(yīng)采用相同規(guī)格和質(zhì)量的容器。為防止魚(yú)類跳出容器，可在容器上加上網(wǎng)罩。實(shí)驗(yàn)容器使用后，必須徹底洗凈，以除去所有毒性殘留物。（2）其他

溶解氧測(cè)定儀、水硬度計(jì)、溫度控制儀、pH計(jì)、分析天平。實(shí)驗(yàn)材料3CompanyLogo實(shí)驗(yàn)用水的水質(zhì)條件一般是指水的溫度、pH、溶解氧、硬度、水中的有機(jī)物和水量等。（1）水溫實(shí)驗(yàn)中應(yīng)保持魚(yú)類原來(lái)的適應(yīng)溫度，一般冷水魚(yú)在12～18℃，溫水魚(yú)在20～28℃。為使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠，在同一實(shí)驗(yàn)中，溫度的波動(dòng)范圍不要超過(guò)4℃（即±2℃）。冬天可以通過(guò)加熱室內(nèi)的空氣溫度而達(dá)到調(diào)節(jié)水溫的目的，也可以采用電熱棒直接控制調(diào)節(jié)水溫。實(shí)驗(yàn)材料3CompanyLogo

（2）pH水的pH與水生生物的代謝作用有密切關(guān)系。對(duì)毒物的毒性作用也有一定的影響。因此，在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)維持pH在魚(yú)類適宜范圍內(nèi)。一般實(shí)驗(yàn)液的pH在6.7～8.5為宜。如需調(diào)節(jié)pH，可用1M或0.1M的HCl和NaOH來(lái)調(diào)節(jié)受試物貯備液的pH。調(diào)節(jié)貯備液的pH時(shí)不能使受試物濃度明顯改變，或發(fā)生化學(xué)反應(yīng)或沉淀。

（3）溶解氧溶解氧是魚(yú)類生存的必要條件，它能影響魚(yú)類對(duì)毒物的敏感性。一般溫水魚(yú)要求溶解氧在4mg/L以上，冷水魚(yú)要求溶解氧在5mg/L以上。（4）硬度水的總硬度為10～250mg/L（以CaCO3計(jì)）。實(shí)驗(yàn)材料3CompanyLogo

1．預(yù)實(shí)驗(yàn)用確定正式實(shí)驗(yàn)所需濃度范圍，可選擇較大范圍的濃度系列，如1000mg/L、100mg/L、10mg/L、1mg/L、0.1mg/L。每個(gè)濃度放入五條魚(yú)，可用靜態(tài)方式進(jìn)行，不設(shè)平行組，試驗(yàn)持續(xù)48～96h。每日至少兩次記錄各容器內(nèi)的死魚(yú)數(shù)，并及時(shí)取出死魚(yú)。求出24h100％死亡濃度和96h無(wú)死亡濃度。如果依次預(yù)試驗(yàn)結(jié)果無(wú)法確定正式試驗(yàn)所需的濃度范圍，應(yīng)另選一濃度范圍再次進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)步驟4CompanyLogo

在24h、48h、72h、96h后檢查受試魚(yú)的狀況。如果沒(méi)有任何肉眼可見(jiàn)的運(yùn)動(dòng)，如鰓的扇動(dòng)、碰觸尾柄后無(wú)反應(yīng)等，即可判斷該魚(yú)已死亡。觀察并記錄死魚(yú)數(shù)目后，將死魚(yú)從容器中取出。應(yīng)在試驗(yàn)開(kāi)始后3h或6h觀察各處理組魚(yú)的狀況，并記錄試驗(yàn)魚(yú)的異常行為（如魚(yú)體側(cè)翻、失去平衡，游泳能力和呼吸能力減弱，色素沉積、受驚嚇后運(yùn)動(dòng)狀況等）。試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)要測(cè)定pH、溶解氧和溫度。試驗(yàn)期間，每天至少測(cè)定一次。至少在試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)，測(cè)定實(shí)驗(yàn)容器中試驗(yàn)液的受試物濃度。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對(duì)照組的死亡率不得超過(guò)10％。實(shí)驗(yàn)步驟4CompanyLogo1．?dāng)?shù)據(jù)處理以暴露濃度為橫坐標(biāo)，死亡率為縱坐標(biāo)，在計(jì)算機(jī)或?qū)?shù)概率紙上，繪制暴露濃度對(duì)死亡率的曲線。用直線內(nèi)插法或常用統(tǒng)計(jì)程序計(jì)算出24h、48h、72h、96h的半致死濃度（LC50）值，并計(jì)算95％的置信限。如果試驗(yàn)數(shù)據(jù)不適于計(jì)算LC50，可用不引起死亡的最高濃度和引起100％死亡的最低死亡濃度估算LC50的近似值，即這兩個(gè)濃度的集合平均值。實(shí)驗(yàn)報(bào)告5CompanyLogo

2．化學(xué)物質(zhì)急性毒性分級(jí)依據(jù)LC50值的大小，可以將化學(xué)物質(zhì)的急性毒性分為劇毒、高毒、中等毒、低毒和微毒5級(jí)，如實(shí)驗(yàn)表3-1所示。實(shí)驗(yàn)報(bào)告5實(shí)驗(yàn)表3-1魚(yú)類急性毒性實(shí)驗(yàn)毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)魚(yú)起始LC50（mg/L）＜11～100100～10001000～10000＞10000毒性分級(jí)劇毒高毒中等毒低毒微毒（無(wú)毒）CompanyLogo（1）試驗(yàn)期間，對(duì)照組魚(yú)死亡率不得超過(guò)10％。