植物組織培養(yǎng)的污染咨詢題

千里之行，始于足下。第2頁/共2頁精品文檔推薦植物組織培養(yǎng)的污染咨詢題1、真菌的污染真菌(fungi)一類沒有葉綠素，異養(yǎng)的真核微生物。除極少數(shù)種類是單細(xì)胞外，絕大多數(shù)是由多細(xì)胞組成的菌絲，結(jié)成一團(tuán)的菌絲稱菌絲體，菌絲分有隔菌絲和無隔菌絲兩種。有隔菌絲是由多個(gè)細(xì)胞組成，相鄰的細(xì)胞之間由隔絲隔開。在地球上廣泛存在于空氣、水、土壤以及各類生物的體表或體內(nèi)。皆可有真菌生長。大氣中已知的真菌有11255屬10萬種，在室內(nèi)常附著在物體表面，能自動(dòng)或隨人的活動(dòng)而擴(kuò)散。種類豐富，分布廣泛，生殖快速，無處沒有，無處別在。一具季節(jié)生殖4-5代，孢子可達(dá)1萬億個(gè)室內(nèi)真菌種類：要緊有芽枝孢霉屬、曲霉屬、鉸鏈孢霉屬、鐮刀霉屬、青霉屬等，真菌數(shù)量的多少，與溫度、濕度有非常大關(guān)系。真菌以腐生、寄生或共生的型式進(jìn)行異營性日子。釋放消化酵素於鄰近的環(huán)境，以分解食物成較小的水溶性分子進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)消化。並可於菌絲產(chǎn)生孢子以完成有性或無性生殖。真菌季節(jié)變化：春、夏季．尤其是南方的梅雨時(shí)節(jié)．溫暖潮濕，很適合真菌生長。冬季室內(nèi)真菌濃度較高。空調(diào)加重污染：假如長期使用空調(diào)而別注意通風(fēng)，可引起室內(nèi)真菌污染。室內(nèi)有空調(diào)比沒有空調(diào)事情下曲霧菌降數(shù)多4倍。

2、細(xì)菌（bacteria）的污染細(xì)菌是一類弱小的單細(xì)胞生物，約有２０００多種。從形態(tài)上看，細(xì)菌能夠分成球菌、桿菌和螺旋菌３類。細(xì)菌是無孔別入的微生物，兒童玩具、手機(jī)、計(jì)算機(jī)鍵盤和衣服上，甚至植入人體的醫(yī)用植入物等（如心臟起搏器），都隨時(shí)有也許沾染細(xì)菌，對人體造成危害。為幸免細(xì)菌的侵襲，科學(xué)家曾嘗試用抗微生物材料生產(chǎn)各種用品，但效果別十分理想，因?yàn)檫@些材料盡管能殺死細(xì)菌，卻充滿化學(xué)物質(zhì)。細(xì)菌是處于生物和無生物之間的東西。泥土里、水里、城市的空氣里都有細(xì)菌散布著，多到50種以上。三類細(xì)菌的形狀：算是球形的，桿形的，及螺旋的。球形的有的正圓，有的卵圓；桿形的有長有短，有的微彎螺旋形的也有長短和彎曲的轉(zhuǎn)數(shù)多少的別同，有的生著細(xì)毛，毛長與短多少別定。盡管概括地講，形狀惟獨(dú)球形、桿形、螺旋形這幾種，但細(xì)分起來，形狀依然非常很多。論大小，它長約1～2微米，闊0.5微米余。病菌，能分泌出毒質(zhì)，假如寄生在體里，因病菌種類的別同，人就會發(fā)生別同的疾病。

3、組織培養(yǎng)過程中的污染源[1]。戶外風(fēng)大菌類進(jìn)屋機(jī)遇多[2]。屋內(nèi)太潮菌類繁衍多[3]。物品帶菌多[4]。屋內(nèi)別潔凈[5]。屋內(nèi)清理帶菌組培苗[6]。接種別正確

4、菌類傳播途徑[1]戶外風(fēng)傳播細(xì)小如塵隨風(fēng)飄散由上下降見濕就長有風(fēng)就有沙有沙就有塵有塵就有菌菌塵混共存[2]渦流傳播我們在大街上常?？吹揭恍┐筘涇囻傔^后，馬路上的塵土、紙屑打著轉(zhuǎn)滿天飛，這算是汽車行駛攪動(dòng)空氣形成的渦流。汽車的前擋風(fēng)玻璃、車頂、車側(cè)、車后都能夠產(chǎn)生渦流。渦流在自然界可講是無所別在，在這些渦流中人們?nèi)羰窍胍^看渦流旋轉(zhuǎn)方向改變的話就必須將整個(gè)渦流給破壞掉。超凈工作臺上，擺放物品太多，當(dāng)無菌風(fēng)吹過時(shí)，就會在物品身邊形成渦流群，菌類就會在渦流群中停留，從而落低凈化效果，增加污染機(jī)遇。[3]接種傳播臟手每只帶有細(xì)菌4萬~40萬，潔凈的手，指甲蓋大小也有3200多個(gè)細(xì)菌。指甲縫能夠窩藏30多種細(xì)菌。1克重的指甲垢里竟藏有38億個(gè)細(xì)菌。洗的手3小時(shí)后，在大拇指的細(xì)菌由原來的300個(gè)變成30萬個(gè)。假如手上帶菌較多，在操作過程中，就難免有菌降入培養(yǎng)基或植物材料上，而導(dǎo)致污染。用胖皂洗手比別用胖皂洗手的殺菌功效要大8~10倍。流淌的溫水可去掉95%以上。所以，在注意個(gè)人衛(wèi)生的并且，操作前一定要對手舉行完全消毒。另外，別正確操作也會增加污染機(jī)率掀蓋生硬，滅菌別夠，操作過慢等。接種過程應(yīng)該輕開蓋，火滅慢，操作快。

5、相應(yīng)的措施通風(fēng)：經(jīng)常開窗，保持室內(nèi)空氣流通．能夠使室內(nèi)真菌數(shù)量減少。通風(fēng)辦法簡便易行．應(yīng)多使用。去濕：保持室內(nèi)空氣干燥，如使用空調(diào)“除濕”功能，也可減少真菌生長生殖。光照：紫外線能殺滅或抑制真菌生長，有調(diào)查發(fā)覺下午一時(shí)是大氣細(xì)菌粒子沉落的一具低谷，講明太陽輻射對空氣微生物有明顯的殺滅作用。所以，保持室內(nèi)較好采光，在梅雨季節(jié)后將衣物等晾曬，對減少室內(nèi)真菌污染大有好處。防霉：污染物品和污染培養(yǎng)基別要在培養(yǎng)室近距離開瓶洗刷。

6、污染緣故推斷及污染苗救護(hù)[1]若污染菌類是零星分散在培養(yǎng)基中，則可確定是人為引起的污染，

比如培養(yǎng)基滅菌別完全；超凈工作臺長時(shí)刻別換濾網(wǎng)，致使凈化能力落低；接種用具滅菌別完全；操作別

正確，動(dòng)作生硬緩慢，開瓶時(shí)刻太久，接種臺擺放物品雜亂，操作中心在人體范圍之內(nèi)；接種室長期別滅

菌，菌類太多。若污染菌類是從材料身邊長起，則可證明是植物材料帶菌引起。也許是接種用具滅菌別徹

底，接種時(shí)材料被污染；或者是未及時(shí)發(fā)覺污染苗，接種過程交叉感染；若是外植體，菌類從材料培養(yǎng)基

以上部分長起，而別是從培養(yǎng)基先長起，且發(fā)生在5天往后，則講明是材料帶的內(nèi)生菌。若從培養(yǎng)基以下

開始長菌，發(fā)生時(shí)刻較早，且有從里向外的趨勢，則講明是切口引起的污染，緣故有是滅完菌后，未剪去

兩個(gè)切口或雖剪但器具帶菌；[2]真菌污染后，假如已形成孢子，則必須經(jīng)高壓滅菌后扔掉，即使僅形成

菌絲，菌絲可以達(dá)到材料內(nèi)部，所以，真菌污染是滅絕性的。但若使細(xì)菌污染，由于細(xì)菌生殖是靠芽孢，

細(xì)菌不可能彌散整個(gè)空間，所以只要及時(shí)發(fā)覺，將材料上部未感菌的部分剪下轉(zhuǎn)接，材料仍能夠用。[3]用

抗生素等殺菌藥劑的處理，雖有很多報(bào)道，但至今還未發(fā)覺那種抗生素可以對各種菌都有效，同時(shí)常常也

會妨礙植物材料的正常生長分化。另一些藥劑，雖有的殺菌效果好，但往往容易引起鹽害，也無法利用。[4]

本研究室自1999以來，在污染防治研究和簡化組培的基礎(chǔ)上有了突破性發(fā)展，經(jīng)過對國內(nèi)外近百種抑菌材

料的挑選、配比，成功研制出了廣譜性殺菌藥劑—山農(nóng)1號。該藥劑在低濃度下，就能抑制各類真菌和細(xì)

菌的生長生殖，在別經(jīng)高壓滅菌和超凈工作臺接種的事情下，在40天內(nèi)，污染率也能操縱在5%以下，在

2003-2004年，本試驗(yàn)室舉行了大規(guī)模的污染防治和開放接種試驗(yàn)，試驗(yàn)表明，利用山農(nóng)1號舉行完全簡化

組培環(huán)節(jié)，落低組培生產(chǎn)，使組織培養(yǎng)走出試驗(yàn)室，進(jìn)入千家萬戶，是徹底也許的。本研究有望在2005年，

舉行鑒定和推廣應(yīng)用。

植物組織培養(yǎng)是20世紀(jì)初進(jìn)展起來的一門新興技術(shù)，隨著這項(xiàng)技術(shù)的日益完善，其應(yīng)用也越來越廣泛，可用于種苗快繁、植物脫毒、植物育種、種質(zhì)資源保存以及次生代謝物提取等方面。尤其植物快繁和脫毒是應(yīng)用最多和最廣的方面，而且許多花卉苗木的試管育苗已進(jìn)入了商品化生產(chǎn)。然而在組織培養(yǎng)過程中，常常會浮現(xiàn)一些困難使試驗(yàn)無法舉行下去，甚至導(dǎo)致整個(gè)試驗(yàn)失敗，給科研和工廠化生產(chǎn)帶來損失。污染是組織培養(yǎng)中經(jīng)常遇到的困難。污染是指在植物組織培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料滋生雜菌，最后導(dǎo)致培養(yǎng)失敗的現(xiàn)象?，F(xiàn)將在矮牽牛、菊花、樹莓等組織培養(yǎng)研究中的一些體味，從污染的緣故、妨礙因素和防止措施幾方面舉行淺析，為科研和工廠化生產(chǎn)提供一定的參考價(jià)值。

l污染的緣故

在培養(yǎng)過程中污染是經(jīng)常發(fā)生的。它會導(dǎo)致培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料上滋生雜菌，最后組培失敗。在科研和商品化生產(chǎn)種苗中，污染率是與經(jīng)濟(jì)效益密切相關(guān)的一具重要指標(biāo)，操縱污染率無疑是一項(xiàng)提高經(jīng)濟(jì)效益、節(jié)省材料的有效途徑之一。所以，探討和重視污染在科研和生產(chǎn)中顯得十分重要。

1．1造成污染的病原菌

在矮牽牛、菊花、樹莓等的組培過程中，發(fā)覺了別同程度的污染現(xiàn)象，其污染物要緊是真菌(木霉、青霉、曲霉、毛霉)和細(xì)菌。

1．2污染的癥狀及緣故

真菌性污染要緊指霉菌引起的污染。普通接種后3～8d可在培養(yǎng)基中發(fā)覺各種顏XXX的菌斑。真菌性污染，一股多由接種室內(nèi)的空氣別干凈、超凈工作臺的過濾效果別理想、操作別慎等緣故引起。

細(xì)菌性污染的要緊癥狀是材料附近浮現(xiàn)黏液狀和發(fā)酵泡沫狀物體，或在材料附近的培養(yǎng)基中浮現(xiàn)混濁和云霧狀痕跡。普通在接種后1～2d即可發(fā)覺。細(xì)菌性污染除外植體帶菌或培養(yǎng)基滅菌別完全外，要緊是操作人員的別慎造成。除要XXX作人員嚴(yán)格按照無菌操作程序操作外，外植體帶菌引起的污染與外植體的種類、取材季節(jié)、部位、預(yù)處理辦法及消毒辦法等緊密相關(guān)。

2妨礙污染的因素

2．1外植體本身

植物組織培養(yǎng)的成敗除與培養(yǎng)基的組分有關(guān)外，另一具重要因素算是外植體本身，即由活體植物上切取下來，用以舉行離體培養(yǎng)的那部分組織或器官。為了使外植體適于在離體條件下生長，使組織培養(yǎng)工作順利舉行，有必要對外植體舉行挑選與處理。

首先，應(yīng)該從田偶爾溫室中生長茁壯的無病蟲害的植株上選取發(fā)育正常的器官或組織作為外植體，離體培養(yǎng)易于成功。關(guān)于大多數(shù)植物來講，莖尖是較好的外植體，由于莖形態(tài)已基本建成，生長速度快，遺傳性穩(wěn)定，病毒含量低或無病毒，因此是獵取無病毒苗的良好途徑。然而，別同植物的別同部位，由于其本身的生長特點(diǎn)，在外植體培養(yǎng)中也存在著各種差異性。比如，各部位的分化再生能力別同，各部位接種后的污染率也別同，各部位培養(yǎng)形成的再生植株的脫毒率也別同。因此選取外植體時(shí)應(yīng)挑選適當(dāng)大小的、病毒含量低的、易于消毒和滅菌的外植體，如此才干保證在組織培養(yǎng)中污染率低、脫毒率高、成活率高。如在芳香植物唇萼薄荷的組織培養(yǎng)中，由于其組織很嬌嫩且表面密生絨毛，在自然條件下，表面常被霉菌和細(xì)菌污染。因此在培養(yǎng)時(shí)，選取去掉葉片的帶腋芽的幼嫩莖段舉行生殖，如此既能落低污染率(因?yàn)槿コ宋廴韭瘦^高的葉片)，又能提高成活率。還如在廣佛手的組織培養(yǎng)中，別同外植體的頂芽的污染率最低，成活率最高，葉片次之，帶節(jié)莖的污染率最高。

另外，別同季節(jié)取材的外植體，污染率也別同。如在廣佛手的培養(yǎng)中，春季取材與秋季取材差不別大，夏季污染率就高，明顯高于冬季。所以，適當(dāng)?shù)臅r(shí)候取材會落低污染率。

因此，為了落低污染率、提高成活率．選取外植體應(yīng)該從多方面思考。

2.2培養(yǎng)條件

在培養(yǎng)室內(nèi)的培養(yǎng)條件中，溫度和濕度與污染率緊密相關(guān)。外植體在夏季培養(yǎng)時(shí)，由于夏天高溫高濕有利于雜菌滋長，因此污染率就高；冬季培養(yǎng)時(shí)，污染率就相對低一些。如在廣佛手、矮牽牛、菊花、樹莓的組織培養(yǎng)中，外植體在夏季污染率和死亡率就高；在冬季就相對低一些。

此外，一些用于組織培養(yǎng)的植物，在自然條件下的生長環(huán)境也會妨礙污染率。有報(bào)道指出，生長在高溫多雨的熱帶、亞熱帶植物和多年生木本植物容易浮現(xiàn)內(nèi)生細(xì)菌的污染。內(nèi)生細(xì)菌存在于植物材料內(nèi)部，別能被普通的表面消毒辦法所清除，隨著材料帶人培養(yǎng)過程引起污染。

3防止措施

組織培養(yǎng)中落低污染率是別可忽視的技術(shù)環(huán)節(jié)。以下是在矮牽牛、菊花、樹莓等的組織培養(yǎng)中總結(jié)出來的幾點(diǎn)污染防止措施。

3．1外植體的采集

為了防止材料帶菌，我們在采集外植體時(shí)，應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：在生長茁壯的無病蟲害的植株上選取發(fā)育正常的組織或器官；或?qū)⒛凵也杉貋恚旁诟蓛舻目諝庵兴喑檠?，然?/p>

用這種新生組織培養(yǎng)，也能夠幸免污染。在晴天中午采集外植體。采集易于消毒和滅菌的組織部位舉行培養(yǎng)，也能夠落低污染率。

3．2材料的表面消毒

外植體在接種之前，須經(jīng)嚴(yán)格的滅菌。由于滅菌劑的種類別同，殺菌力別同，所以挑選消毒劑，既要思考具有良好的消毒、殺菌作用，并且又易被蒸餾水沖洗掉或能自行分解的物質(zhì)，而且不可能損傷或輕微損傷組織材料，而別妨礙生長。植物種類別同，外植體別同，處理也別同。

為了獵取無菌材料，對室外采集來的外植體，先用自來水沖洗潔凈，然后依照材料的別同，選用別同種類的滅菌劑，舉行別并且間的表面滅菌。挑選適宜的消毒劑處理時(shí)，為了使其消毒效果更為完全，有時(shí)還需與黏著劑或潤濕劑如吐溫及抽氣減壓辦法、磁力攪拌、超生振動(dòng)等辦法配合使用，使消毒劑能更好地滲入外植體內(nèi)部，達(dá)到理想的消毒效果。如在芳香植物唇萼薄荷組織培養(yǎng)中，由于腋芽密生絨毛

且部位通常較隱蔽，似非常難與消毒液完全接觸，致使消毒效果別理想，于是在飽和漂白粉溶液中加入0．1％Tween－80混合均勻，并采納軟毛刷輕輕刷洗材料，尤其是腋芽部位，如此能夠使消毒液與材料充分接觸，使消毒效果明顯提高。

此外，假如在繼代培養(yǎng)中發(fā)覺污染，我們能夠采納抗生素(如青霉素、氮芐青霉素等)和殺菌劑(如多菌靈、代森鋅等)處理結(jié)合常規(guī)消毒，重新得到無菌苗。

再者，在一些快繁體系延續(xù)多次繼代后，部分試管苗插入培養(yǎng)基的切口處會浮現(xiàn)云霧狀污染苗。關(guān)于這種污染，我們也能夠采取在繼代培養(yǎng)基中加入適量抗生素(如青霉素、氨芐青霉素、四環(huán)素等)來替代抑菌。然而隨著繼代次數(shù)的增多，抗生素對污染苗的抑菌作用也許會落低，一方面是由于抗生素的消耗，另一方面也許是由于菌類對抗生素產(chǎn)生了耐藥性。

3．3培養(yǎng)基的滅菌

分裝后的培養(yǎng)基封口后應(yīng)盡快舉行高溫高壓滅菌。滅菌別及時(shí)，會造成雜菌大量生殖，使培養(yǎng)基失去效用。為了保證培養(yǎng)基滅菌完全，落低污染，在滅菌過程中需注意以下幾個(gè)環(huán)節(jié)：滅菌加熱過程中應(yīng)使滅菌鍋內(nèi)的冷空氣放盡，以保證滅菌完全；鍋內(nèi)滅菌物別能堆放過滿，否則，將阻礙蒸汽的流通和熱交換，使容器內(nèi)升溫減慢，造成物體內(nèi)部殺菌別徹底；滅菌后，應(yīng)切斷電源，使滅菌鍋內(nèi)的壓力緩慢落下來，接近“0”時(shí)，才可打開放氣閥，排出剩余蒸汽后，打開鍋蓋取出培養(yǎng)基。千萬不急于取出培養(yǎng)基而打開放氣閥，如此會造成落壓過快，使容器內(nèi)外壓差過大，液體溢出，造成白費(fèi)、污染，甚至危機(jī)人身安全。

3．4接種中的注意事項(xiàng)

接種的基本技術(shù)環(huán)節(jié)是落低污染率的關(guān)鍵措施。在接種中，為了落低污染，應(yīng)注意以下幾項(xiàng)事宜：接種室保持潔凈整潔，應(yīng)定期對接種室舉行噴霧落塵和熏蒸滅菌，并在每次接種前對接種室舉行20～30min的紫外滅菌。接種過程中操作人員應(yīng)及時(shí)用75％酒精擦拭雙手和超凈工作臺臺面。接種器械應(yīng)及時(shí)在酒精燈火焰上舉行灼燒滅菌，或在接種器械殺菌器中及時(shí)滅菌。在接種過程中，盡可能少講話或咳嗽，幸免呼吸污染。超凈工作臺上應(yīng)保持氣流暢通，使操作區(qū)空氣別斷凈化。當(dāng)打開培養(yǎng)瓶接種時(shí)，培養(yǎng)瓶應(yīng)拿成歪角，以免灰塵降

人瓶中。

3．5組培苗的生長環(huán)境的調(diào)控

對培養(yǎng)室舉行定期的熏蒸滅菌或用75％酒精舉行噴霧落塵，殺死空氣中的菌類。同時(shí)注意保持培養(yǎng)室內(nèi)的溫濕度。別能過高，也別能過低。

3．6組培苗多次繼代中采取的措施

組培苗多次繼代后，一些內(nèi)生細(xì)菌就會造成污染，能夠采取在培養(yǎng)基中加入抗生素和殺菌劑的辦法抑菌或殺菌。

北方園藝2006(6)

許紅梅(黑龍江農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院園藝系，佳木斯154007)

1、植物組培污染防治咨詢題

（1）污染的來源。植物組培污染要緊是霉菌、細(xì)菌和酵母菌引起的污染。霉菌和酵母菌在培養(yǎng)條件下生長快，非常容易觀看到，而細(xì)菌埋伏期長，植物組織普通別表現(xiàn)癥狀，因此

非常難在前期和肉眼觀看到[1]。國外有關(guān)學(xué)者以為細(xì)菌污染的來源要緊有三個(gè)：一是材料內(nèi)

部滅菌處理不行，如此造成的污染占污染總數(shù)的1/3～1/2。二是在正常的滅菌的條件下，內(nèi)

生菌可以存活，如此的污染占污染源的1/4。三是來自寄生植物的污染占1/4～1/2。并且認(rèn)

為有點(diǎn)植物的昆蟲和螨蟲的體表帶有霉菌的孢子和細(xì)菌，在九、十月份是重要的污染源，因多種植物昆蟲處在大量生殖時(shí)期，此刻大量昆蟲造成的污染源最易造成組培污染的嚴(yán)峻發(fā)生。近六年來，我們經(jīng)過對獼猴桃、櫻桃、托柄菝葜及大花非洲菊初級培養(yǎng)污染的研究中發(fā)覺，高溫、多雨的環(huán)境更有利于污染的發(fā)生，而且隨著植物材料年齡的增長，植物材料的健康狀況別斷惡化，組培污染也會更加嚴(yán)峻。另外，外植體的狀況，環(huán)境條件和操作過程也是引起污染的要緊緣故。

（2）抗生素對細(xì)菌污染的防治。植物組培污染的操縱取決于滅菌技術(shù)、滅菌設(shè)備、外植體年齡和環(huán)境條件等許多方面。雖然在植物組培過程中盡可能使無菌條件更完善，然而污染依然經(jīng)常發(fā)生，甚至有時(shí)整個(gè)實(shí)驗(yàn)室的組培苗突出污染而全部死亡，這是無法挽回的巨大損失，所以人們對細(xì)菌污染研究的較多。細(xì)菌污染的消除有點(diǎn)研究人員希翼用抗生素防治，抗生素能夠直截了當(dāng)加入到培養(yǎng)基中，也能夠用抗生素噴灑或浸泡外植體。但植物種類別同，所用抗生素的種類、濃度和處理時(shí)刻也別同，還有的抗生素對污染消除全然別起作用，所以必須對別同植物采納別同的抗生素的種類、濃度和處理時(shí)刻舉行實(shí)驗(yàn)探討。普通事情下，為消除革藍(lán)氏陽性菌對有點(diǎn)木本植物污染莖段組培苗，可在培養(yǎng)基中加入氨中噻肟頭孢菌素、四環(huán)素、利福平和多粘菌素B分不以25mg/L、25mg/L、6mg/L和6mg/L濃度的混合物，可使細(xì)菌徹底被消除。另外，用頭孢菌素Ⅱ和鏈霉素消除某些欣賞植物外植體中的內(nèi)生菌也有很明顯的效果?？傊槍e同植物品種要想找到一種合適的抗生素處理組合是比較困難的，工作也較繁瑣。國內(nèi)外有關(guān)學(xué)者都以為沒有一種抗生素對所有的細(xì)菌都有效，即使有效，抗生素消除植物組培污染的辦法也是臨時(shí)的解決方案，假如長期使用抗生素消除污染，必定對組培苗的生長、分化和生根造成一定的妨礙。

（3）真菌污染的防治。抗生素消除細(xì)菌的研究比較多，但目前酵母菌污染的研究相對較少，GBPoulsen等（1988）[2]在蘋果砧分裂組織微生物消除的研究中，測試了幾種物質(zhì)對酵母菌的毒性，盡管它們對植物材料都沒有損害，然而沒有一種可以消除酵母菌。胍類化合物是對兩種酵母菌有毒的唯一復(fù)合物，但它對分裂組織有毒害作用。霉菌污染的一具重要特點(diǎn)是迅速，難操縱。目前，對于霉菌污染的研究還非常少，有人建議用防腐劑消除霉菌污染，然而還未見報(bào)到。

（4）常用防治污染辦法。目前外植體表面滅菌的辦法常規(guī)的氯化汞、雙氧水、酒精和次氯酸鈉

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污染是指在培養(yǎng)過程中由于真菌、細(xì)菌或病毒的浸染，而使培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料滋生雜菌，導(dǎo)致培養(yǎng)失敗的現(xiàn)象。在植物組織培養(yǎng)過程中，污染是別可幸免的，但能夠把污染操縱在最低限度內(nèi)。污染通常是由于環(huán)境別潔、培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料消毒別完全、操作過程別慎、操作人員或工具帶菌而引起。組培污染既妨礙了生殖速度，又增加了生產(chǎn)成本，嚴(yán)峻時(shí)可造成培養(yǎng)材料的丟失，給組培生殖帶來較大的損失。為了減少損失，提高工作效率，必須在每一具操作環(huán)節(jié)均注意防止污染的發(fā)生。在組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室中，污染的病原分為細(xì)菌和真菌兩大類，

依照污染的病原和種類，可采取以下措施來預(yù)防：①保持潔凈整潔的環(huán)境；②用干凈的培養(yǎng)容器；③培養(yǎng)基的完全滅菌；④嚴(yán)格規(guī)范且熟練的無菌操作；⑤培養(yǎng)材料（外植體和基礎(chǔ)母瓶）的嚴(yán)格篩選和完全的表面消毒；⑥污染物的正確處理（高壓滅菌后再倒棄）能有效防止污染傳播蔓延。

植物組織培養(yǎng)高效抗污殺菌劑S106是一種長效、廣譜、高活性、植物組織培專用防污染殺菌劑，本品具實(shí)用量少，使用方便，操作安全、配伍性好，其活性成分對環(huán)境無殘留，別破壞培養(yǎng)基活性成分、耐高壓滅菌、穩(wěn)定性高、使用成本低等優(yōu)點(diǎn)，可有效落低瓶苗廢棄率，落低組培成本，提高組培效益。

一、使用辦法

1、S106母液的配制

先把S106A（白群粉末）用350毫升左右無菌水充分溶解，再把S106B（液體有結(jié)晶）開瓶前搖勻，再打開瓶蓋倒入其中，（用無菌水洗瓶二次倒入）。充分溶解后用無菌水定容至500毫升，瓶裝低溫貯藏。

2、使用辦法

按增殖、生根堷養(yǎng)基配方加入各種母液、瓊脂、蔗糖、激素，每升培養(yǎng)基加入S106

母液0.2至0.3毫升，充分?jǐn)嚢杈鶆蛑箝_后再舉行分裝。

二、注意事項(xiàng)

1、、A與B藥劑別可分開使用，否則抗污染效果會落低。

2、未使用完畢的混合母液可用冰箱冷藏1個(gè)月，并在上述期限內(nèi)使用完，否則抗污染效果會落低。

3、高濃縮植物組織培養(yǎng)高效抗污殺菌劑（生根型）S106在未稀釋事情下，避光、常溫25℃下保質(zhì)期一年，冰箱冷藏二年。

4、本品為植物組織培養(yǎng)專用藥劑，別能用作人和動(dòng)物的疾病消毒

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污染普通分為真菌性污染和細(xì)菌性污染,其來源可分成3大類:材料帶菌,接種污染,培養(yǎng)過程

感染[1]"污染是桉樹組織培養(yǎng)過程中的難題,特殊在春夏季高溫高濕季節(jié)組培苗的污染

率相當(dāng)高,對組

培苗的工廠化生產(chǎn)造成非常大的損失,怎么操縱桉樹組培的污染咨詢題已成了桉樹組培工廠化育苗的關(guān)鍵"

11111外植體消毒與接種誘導(dǎo)培養(yǎng)的關(guān)鍵在于外植體是否消毒完全以及被損傷,這取決于以下幾個(gè)方

面"外植體的自身生理事情"桉樹的初代培養(yǎng)普通以帶芽莖段作為外植體來誘導(dǎo)腋芽萌發(fā),選取木質(zhì)

化程度適中!生命力旺盛的枝條,桉樹無性系采穗圃里當(dāng)年生的茁壯枝條,或成年植株的基部萌條作為外

植體,誘導(dǎo)容易,成活率可達(dá)到70%~80%以上;消毒劑的挑選及消毒時(shí)刻的長短"桉樹帶芽莖段的消

毒大多選用011%升汞和75%酒精相結(jié)合的消毒方式,莖段的木質(zhì)化程度別同,酒精和升汞消毒的時(shí)刻

別一樣,普通酒精消毒的時(shí)刻為10~60s,升汞消毒的時(shí)刻為1~10min"關(guān)于非常嫩的帶芽莖段酒精消毒

的時(shí)刻低于10s,即莖段在75%酒精里浸泡5s左右時(shí)立即倒入無菌水舉行清洗,然后用011%升汞消毒

40s左右;關(guān)于非常老的莖段酒精消毒達(dá)1~2min,升汞消毒達(dá)10~15min"外植體的采集時(shí)刻"枝條的

[1].真菌的污染

真菌(fungi)一類沒有葉綠素,異養(yǎng)的真核微生物，除極少數(shù)種類是單細(xì)胞外,絕大多數(shù)是由多細(xì)胞組成的

菌絲，結(jié)成一團(tuán)的菌絲稱菌絲體，菌絲分有隔菌絲和無隔菌絲兩種.在地球上泛存於空氣、水、土壤以及

各類生物的體表或體內(nèi)。皆可有真菌生長。大氣中已知的真菌有11255屬10萬種，在室內(nèi)常附著在物體表

面，能自動(dòng)或隨人的活動(dòng)而擴(kuò)散。種類豐富，分布廣泛，生殖快速，無處沒有，無處別在。一具季節(jié)生殖

4-5代，孢子可達(dá)1萬億個(gè)。

室內(nèi)真菌種類：要緊有芽枝孢霉屬、曲霉屬、鉸鏈孢霉屬、鐮刀霉屬、青霉屬等，真菌數(shù)量的多少，與溫

度、濕度有非常大關(guān)系。真菌以腐生、寄生或共