體外診斷試劑研發(fā)全流程管理培訓(xùn)課程-分析性

2/2“體外診斷試劑研發(fā)全流程管理培訓(xùn)課程—分析性能評(píng)價(jià)”精彩回顧之100問（6）2022年11月17日，由中國醫(yī)學(xué)裝備協(xié)會(huì)應(yīng)用評(píng)價(jià)分會(huì)主辦、北京水木濟(jì)衡生物技術(shù)有限公司承辦的《體外診斷試劑研發(fā)全流程管理培訓(xùn)課》第三期分析性能評(píng)價(jià)課程正式開課，培訓(xùn)課程持續(xù)三天，邀請(qǐng)了多位行業(yè)資深專家授課，吸引了上百家企業(yè)參加。培訓(xùn)的最后一天，設(shè)置了討論環(huán)節(jié)，多位專家就學(xué)員提出的問題進(jìn)行了詳細(xì)的解答，現(xiàn)將部分問題及專家回復(fù)整理如下。本節(jié)主要針對(duì)線性（區(qū)間）、測(cè)量區(qū)間、可報(bào)告區(qū)間相關(guān)問題。51咨詢問題對(duì)于定量產(chǎn)品線性的檢驗(yàn)，一些較早期的推薦性標(biāo)準(zhǔn)（YY/T）中要求的線性性能指標(biāo)為劑量-反應(yīng)曲線符合相關(guān)要求，此處的“劑量-反應(yīng)曲線”是否指的是稀釋比例（理論濃度）與實(shí)際測(cè)量值之間的關(guān)系？專家答復(fù)不是。一些較早期的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)線性的描述確實(shí)是指劑量-反應(yīng)曲線，以YY/T1223-2014《總甲狀腺素定量標(biāo)記免疫分析試劑盒》為例，原文描述如下：這里的劑量-反應(yīng)曲線指的是校準(zhǔn)曲線（定標(biāo)曲線），不是稀釋比例（理論濃度）與實(shí)際測(cè)量值之間的關(guān)系。logit（B/B0）對(duì)校準(zhǔn)品濃度的對(duì)數(shù)作圖，經(jīng)過轉(zhuǎn)換后，進(jìn)行最小平方回歸可得到良好的直線。下圖左是校準(zhǔn)曲線的原始數(shù)據(jù)作圖，下圖右為轉(zhuǎn)化后的作圖?！熬€性”的定義：在給定的測(cè)量范圍內(nèi)，使測(cè)定結(jié)果與樣本中分析物的量直接成比例的能力,此處的測(cè)定結(jié)果指最終的分析結(jié)果，而非儀器輸出的原始信號(hào)（GB/T29791.1）。后來的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)“線性”的要求更接近其定義，如下所示。52咨詢問題線性范圍的建立過程濃度水平個(gè)數(shù)選擇是否有具體標(biāo)準(zhǔn)可參考？專家答復(fù)線性范圍的建立，一般選擇至少9個(gè)濃度水平樣本，所選用的濃度水平應(yīng)可覆蓋整個(gè)預(yù)期測(cè)量范圍。具體可參考CLSIEP06A2-2020EvaluationofLinearityofQuantitativeMeasurementProcedures（2ndEdition）。53咨詢問題不精密度和ADL臨界值表中L×R最大只有20，但是我們做線性建立時(shí)，L×R往往都是大于20的，這種情況怎么對(duì)比ADL與臨界值？專家答復(fù)ADL臨界值是通過含有不精密度、測(cè)量次數(shù)、濃度水平等參數(shù)計(jì)算的統(tǒng)計(jì)量，可以通過公式計(jì)算或直接通過不精密度和ADL臨界值表獲得。當(dāng)通過查表不可獲得時(shí)建議使用統(tǒng)計(jì)公式計(jì)算。54咨詢問題線性區(qū)間的下限是LOQ，測(cè)量區(qū)間的下限也是LOQ，測(cè)量區(qū)間在線性區(qū)間內(nèi)，是否有沖突？專家答復(fù)線性區(qū)間是指使實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的最終分析結(jié)果為可接受的線性的濃度范圍，此時(shí)非線性誤差應(yīng)低于允許誤。測(cè)量區(qū)間是在沒有任何樣品預(yù)處理的情況下測(cè)量的一系列量值，測(cè)量值在可接受的不精密度、線性偏差、偏倚范圍內(nèi)。線性區(qū)間應(yīng)包含測(cè)量區(qū)間。以上情況，企業(yè)宣稱線性區(qū)間下限定得保守一些，取LOQ也是可以的。55咨詢問題將稀釋度作為X值帶入方程進(jìn)行線性驗(yàn)證，稀釋度指的是?比如稀釋20倍就是X=20?

專家答復(fù)稀釋20倍的話，稀釋度是1/20。56咨詢問題關(guān)于鉤狀效應(yīng)，是怎么定義的？一般采取什么樣的方法進(jìn)行評(píng)估？可參考標(biāo)準(zhǔn)有哪些？專家答復(fù)鉤狀效應(yīng)（hookeffect）定義：在免疫化學(xué)測(cè)量程序中由于相對(duì)抗體濃度抗原濃度過量或相對(duì)抗原濃度抗體濃度過量而使得抗原-抗體交聯(lián)減少而引起的負(fù)偏倚。鉤狀效應(yīng)有時(shí)候被稱為前帶現(xiàn)象。目前針對(duì)鉤狀效應(yīng)的評(píng)價(jià)，可參考《定性檢測(cè)體外診斷試劑分析性能評(píng)估注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》，里面提到“對(duì)于部分免疫學(xué)原理的產(chǎn)品，檢測(cè)含有極高濃度的待測(cè)抗體/抗原的樣本時(shí)，飽和反應(yīng)可能導(dǎo)致檢測(cè)濃度值低于真實(shí)值或出現(xiàn)假陰性結(jié)果。建議對(duì)多個(gè)含有高濃度分析物的樣本進(jìn)行梯度稀釋后由低濃度至高濃度檢測(cè)，每個(gè)梯度的稀釋液重復(fù)多份進(jìn)行檢測(cè)，明確不產(chǎn)生鉤狀效應(yīng)的最高分析物濃度?！?7咨詢問題定性膠體金產(chǎn)品在進(jìn)行高劑量勾狀效應(yīng)評(píng)價(jià)時(shí)，如何確定驗(yàn)證樣本的濃度，需要同類型定量產(chǎn)品確定嗎?如果不存在定量產(chǎn)品,怎么辦？

專家答復(fù)定性產(chǎn)品在進(jìn)行高劑量勾狀效應(yīng)評(píng)價(jià)時(shí)，最好能確定樣品濃度。如果確實(shí)沒有同類型定量產(chǎn)品，可采用其他科學(xué)合理的方法確定樣品陰陽性和濃度水平。例如新冠抗