現(xiàn)代微生物生態(tài)學(xué)

關(guān)于現(xiàn)代微生物生態(tài)學(xué)第一頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二現(xiàn)代生態(tài)學(xué)的研究領(lǐng)域現(xiàn)代生態(tài)學(xué)要回答和解決的主要問題微生物生態(tài)系統(tǒng)多樣性微生物生態(tài)學(xué)研究方法傳統(tǒng)方法分子生物學(xué)方法微生物酶活性測(cè)定第二頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二1現(xiàn)代生態(tài)學(xué)的研究領(lǐng)域生態(tài)系統(tǒng)中種群規(guī)模的調(diào)控生物生產(chǎn)力的利用和保護(hù)研究人工生物群落的穩(wěn)定性和提高生產(chǎn)力環(huán)境污染防治城市生態(tài)系統(tǒng)生態(tài)學(xué)和人類生態(tài)學(xué)的研究和建設(shè)第三頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二2現(xiàn)代生態(tài)學(xué)要研究與解決的主要問題能源短缺問題環(huán)境污染問題防止自然生態(tài)系統(tǒng)的萎縮、保護(hù)森林，防止沙漠化等城市有機(jī)廢棄物的處理及綜合利用的生態(tài)工程建立高產(chǎn)高效、持續(xù)發(fā)展的生態(tài)農(nóng)業(yè)和企業(yè)化生態(tài)工廠。如：白色農(nóng)業(yè)生命活動(dòng)密切相關(guān)元素、化合物及生態(tài)效應(yīng)與人體健康關(guān)系。海洋資源的生態(tài)調(diào)查、開發(fā)利用、保護(hù)的研究第四頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二3微生物生態(tài)系統(tǒng)多樣性陸生微生物生態(tài)系統(tǒng)水生微生物生態(tài)系統(tǒng)大氣微生物生態(tài)系統(tǒng)根系微生物生態(tài)系統(tǒng)腸道(消化道)微生物生態(tài)系統(tǒng)極端環(huán)境微生物生態(tài)系統(tǒng)活性污泥微生物生態(tài)系統(tǒng)“生物膜”微生物生態(tài)系統(tǒng)第五頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二海洋古菌的分布海洋真細(xì)菌的分布海洋真菌的分布海洋真核微藻的分布海洋病毒的分布海洋微生物的分布第六頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二海洋古菌的分布古菌的絕對(duì)數(shù)量大約占微型浮游生物的2%。表層海水中多為廣域古菌，而在150米深以下的水域中則以泉古菌為主。浮游古菌的分布還受到季節(jié)、海水溫度和海流等環(huán)境因素影響。不同海域、不同深度的沉積物中古菌分布不均。同一海域沉積物中，影響古菌分布的主要因素是有機(jī)物。海底火山口主要分布為泉古菌，少量為廣古菌。海底熱泉口主要分布嗜熱古菌（典型類群為熱網(wǎng)菌屬Pyrodictium和火葉菌屬Pyrolobus）。海洋浮游古菌沉積物中古菌特殊生境古菌第七頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二大多數(shù)古菌難以分離培養(yǎng)，主要利用分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行多樣性研究。近幾年在沿岸水域發(fā)現(xiàn)海洋古菌群Ⅰ和海洋古菌群Ⅱ，在不透光層以下海域發(fā)現(xiàn)海洋古菌群Ⅲ，在深海海水中發(fā)現(xiàn)海洋古菌群Ⅳ。泉古菌目廣古菌目第八頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二第九頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二ThemarinespongeAxinellamexicanaanditsarchaealsymbiont,Cenarchaeumsymbiosum.3A.,AxinellamexicanaabrightreddemospongefoundofftheCaliforniacoast.3C.,FISHexperimentshowingC.symbiosumpopulationpresentinthespongetissues(ingreen).ManyoftheC.symbiosumcellsarevisiblydividing.第十頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二海洋真細(xì)菌的分布海洋浮游細(xì)菌分布受可利用有機(jī)物、季節(jié)、深度、鹽度、及葉綠素濃度影響較大而區(qū)域性差異影響較小。沉積物中的海洋細(xì)菌分布表現(xiàn)區(qū)帶化特征。海洋浮游細(xì)菌主要屬于α-變形菌綱、γ-變形菌、擬桿菌綱等。海底沉積物中酸桿菌門、α-變形菌綱、γ-變形菌、δ-變形菌綱、擬桿菌綱等多種類型菌種。近年來，不斷有從海洋中新類群的發(fā)現(xiàn)。海洋細(xì)菌第十一頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二海洋真細(xì)菌的分布浮游放線菌是海洋放線菌的重要組成部分，數(shù)量處于中等豐度水平，相關(guān)報(bào)道較少。海洋沉積物中最重要的真細(xì)細(xì)類群。其中淺海區(qū)以鏈霉菌為主，也有較多游動(dòng)放線菌；而深海區(qū)沉積物中的優(yōu)勢(shì)放線菌為小孢囊菌和諾卡氏菌。無脊椎動(dòng)物及海洋植物的表面或體內(nèi)存在著相當(dāng)部分的海洋放細(xì)線菌，研究得較多的是海綿。海洋放線菌第十二頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二海洋真細(xì)菌的分布迄今為止發(fā)現(xiàn)的海洋藍(lán)細(xì)菌主要屬于原綠球藻屬（Prochlorococcus）和聚球藻屬（Synechococcus）。是海洋初級(jí)生產(chǎn)者的重要組成聚球菌分布于熱帶和溫帶海域。粒徑為0.5-1.5um。通常比其消費(fèi)者微型原生動(dòng)物至少高一個(gè)數(shù)量級(jí)，足以作為微型原生動(dòng)物的重要食物源。對(duì)總初級(jí)生產(chǎn)力的貢獻(xiàn)在世界大多數(shù)海區(qū)為20-60％原綠球菌(Prochlorococcus)分布廣泛。粒徑為0.4-0.8um。豐度大于聚球菌，對(duì)總初級(jí)生產(chǎn)力的貢獻(xiàn)約為50%海洋藍(lán)細(xì)菌第十三頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二海洋真菌的分布木生真菌藻體真菌紅樹林真菌海草真菌寄生動(dòng)物體真菌海底沉積物真菌存在于漂流木、沉積木。多數(shù)為子囊菌。其分布特點(diǎn)為熱帶海域和淺海較廣泛。種類與豐度受季節(jié)及附著基質(zhì)影響。生活方式為腐生、寄生或共生。海藻及其代謝物對(duì)其分布影響顯著。如含單寧酸的馬尾藻真菌極少；紅藻上有數(shù)量較多的酵母菌而褐藻相對(duì)較少，因后者分泌酚類。多數(shù)為腐生，能分解紅樹的枯枝敗葉，為海洋提供有機(jī)物碎片。多棲于海草的葉部和根部，數(shù)量少。寄生于動(dòng)物的外骨骼及腸道等。發(fā)現(xiàn)不同海域沉積物中都有真菌，但鑒定的很少。第十四頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二海洋真核微藻的分布寒帶種：最適溫度小于4℃。小于0℃左右為寒帶種；0℃-4℃來亞寒帶種。

溫帶種：最適溫度4℃-20℃

。4℃-12℃為冷溫帶種12℃-20℃為暖溫帶種。

熱帶種：最適溫度大于20℃

。20℃-25℃為亞熱帶種；大于25℃為熱帶種。主要影響因子為光強(qiáng)。分喜光藻與適陰藻。海底的分布與沉積物的組成及大小相關(guān)，含沙粒的多于泥濘。雙峰模式：溫帶海域春、秋各有一個(gè)高峰（受光強(qiáng)、營(yíng)養(yǎng)鹽影響）。單峰模式：寒帶海域春季一高峰；某些溫帶海域（受徑流影響）。水平模式：多見熱帶海域（季節(jié)不明顯）水平分布垂直分布季節(jié)變化第十五頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二海洋病毒的分布季節(jié)、水深、光密度、溫度、鹽度等理化因子影響海洋浮游病毒的分布。

赤潮發(fā)生期病毒豐度驟增。

豐度隨宿主變化而變化。病毒豐度與宿主豐度間的比值（virus-to-bacteriumratio,VBR）是研究病毒侵染對(duì)水生菌群影響的重要參數(shù)。底棲病毒豐度大于浮游病毒豐度。VBR也大于浮游病毒沉積層深度增加病毒豐度及VBR都降低。浮游病毒底棲病毒第十六頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二4.1微生物生態(tài)學(xué)研究中的傳統(tǒng)方法樣品的采集微生物菌量計(jì)數(shù)富集培養(yǎng)和菌種分離最大或然值法活菌計(jì)數(shù)法第十七頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二4.2微生物生態(tài)學(xué)研究中的分子生物學(xué)方法核酸探針雜交技術(shù)PCR特異性擴(kuò)增技術(shù)rRNA基因同源性分析方法第十八頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二核酸探針雜交技術(shù)核酸雜交技術(shù)快速，能靈敏地探測(cè)出環(huán)境微生物中特殊的核酸序列，并且用光密度測(cè)定法可直接比較核酸雜交所得到的陽性條帶或斑點(diǎn)就能得出定量的結(jié)果，從而反映出相關(guān)微生物的存在及功能。標(biāo)記核苷酸探針可直接用來探測(cè)溶液中、固定在膜上或細(xì)胞或組織內(nèi)的同源核酸序列。探針可以是長(zhǎng)探針(100-1000bp)，也可以是短的寡核苷酸(10-50bp)。雜交方式可以是菌落雜交、狹縫雜交或原位雜交。第十九頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二菌落雜交該法可從大量細(xì)菌中篩選含特異的DNA序列及基因工程重組體。雜交探針不僅可以鑒定細(xì)菌克隆也可以鑒定噬菌體形成的噬菌斑。

首先將克隆或噬菌斑轉(zhuǎn)移到纖維素膜或尼龍膜上，去掉所有的殘留物，只留下DNA，這種處理同時(shí)導(dǎo)致了DNA變性，使雙鏈的氫鍵斷裂形成單鏈分子。通過80℃短時(shí)間處理，將DNA分子固定在膜上（纖維素膜）；對(duì)于尼龍膜需要進(jìn)行紫外交聯(lián)，通過糖-磷酸中樞將分子連接到膜上。

標(biāo)記探針，加熱變性，加入到雜交膜上進(jìn)行雜交，然后洗去未結(jié)合的探針，干燥，接合探針的位置就可以檢測(cè)出來。第二十頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二斑點(diǎn)雜交或狹縫雜交法

基本過程：

將變性的DNA或RNA直接點(diǎn)到固相支持濾膜上→用標(biāo)記探針與之雜交→自顯影或顯色反應(yīng)→檢測(cè)雜交信號(hào)→分析結(jié)果。

優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便、快速、靈敏、樣本用量少；

缺點(diǎn)：特異性不高，有一定比例的假陽性。

用途：檢測(cè)樣本中存在的微量DNA或RNA第二十一頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二原位雜交

將標(biāo)記探針與細(xì)胞或組織切片中的核酸進(jìn)行雜交，進(jìn)而檢測(cè)特異的DNA或RNA序列。

細(xì)胞原位雜交

組織切片原位雜交

DNA-DNARNA-DNA

三類雜交

RNA-RNA

該法優(yōu)點(diǎn)：

不需提取核酸，故可完整保持組織或細(xì)胞的形態(tài)，因而更能準(zhǔn)確地反映組織細(xì)胞的功能狀態(tài)。有第二十二頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二PCR特異性擴(kuò)增技術(shù)在環(huán)境檢測(cè)中，靶核酸序列往往存在于一個(gè)復(fù)雜的混合物中，且含量極低，若探測(cè)這種復(fù)雜群體中特異微生物或某個(gè)基因，雜交就顯得不敏感。PCR技術(shù)使靶序列放大幾個(gè)數(shù)量級(jí)，再用探針雜交探測(cè)對(duì)被擴(kuò)增序列作定性或定量研究分析微生物群體結(jié)構(gòu)。PCR常與其他技術(shù)結(jié)合起來使用，如RT-PCR，competitivePCR、nestedPCR、RAPD、ARDRA等。第二十三頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二

第一步：第一對(duì)引物結(jié)合。第一對(duì)引物也可能結(jié)合到其他具有相似結(jié)合位點(diǎn)的片段上并擴(kuò)增多種產(chǎn)物。第二步：第二套引物對(duì)第一輪PCR擴(kuò)增的產(chǎn)物進(jìn)行第二輪PCR擴(kuò)增。由于第二套引物位于第一輪PCR產(chǎn)物內(nèi)部，而非目的片斷包含兩套引物結(jié)合位點(diǎn)的可能性極小，因此第二套引物不可能擴(kuò)增非目的片斷。NestedPCR

第二十四頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二competitivePCR是一種定量PCR（quantitativePCR），通過向PCR體系中加入人工構(gòu)建的帶有突變的競(jìng)爭(zhēng)模板、控制競(jìng)爭(zhēng)模板的濃度來確定目的模板的濃度，對(duì)目的模板作定量研究。靶基因與參考標(biāo)準(zhǔn)在同一反應(yīng)管中共同擴(kuò)增，但參照標(biāo)準(zhǔn)通常是一段人工合成的模板而不是內(nèi)源性基因。競(jìng)爭(zhēng)PCR必須構(gòu)建一個(gè)內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)，此標(biāo)準(zhǔn)能與靶基因競(jìng)爭(zhēng)聚合酶、核苷酸和引物分子，具有相同的引物結(jié)合位點(diǎn)，其擴(kuò)增產(chǎn)物能通過電泳或高效液相色譜(HPLC)等方法區(qū)分開來。對(duì)競(jìng)爭(zhēng)性模板作系列稀釋后加入到恒量的樣品DNA中進(jìn)行PCR，靶基因的量取決于所添加的競(jìng)爭(zhēng)性DNA片段的量，使兩者的PCR終產(chǎn)物有相等摩爾數(shù)。

competitivePCR第二十五頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二用那些對(duì)某一特定基因的非特異性的引物來擴(kuò)增某些片段。RAPD分析用于探測(cè)含有混合微生物種群的各種生物反應(yīng)器中的微生物多樣性。其分析得到的基因組指紋圖譜在比較一段時(shí)間內(nèi)微生物種群的變化以及比較小試規(guī)模和中試規(guī)模的反應(yīng)器方面是有用的。但不足以用來估測(cè)群落的微生物多樣性。RAPD(randomlyamplifiedpolymorphicDNA)第二十六頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二rRNA基因分析方法rRNAapproach是綜合應(yīng)用多項(xiàng)分子生物技術(shù)對(duì)細(xì)胞中rRNA基因進(jìn)行分析，從而揭示微生物多樣性。所使用的技術(shù)主要包括環(huán)境樣品中DNA的提取、引物及探針的設(shè)計(jì)、PCR擴(kuò)增、梯度膠電泳（主要是DGGE和TGGE）、限制性內(nèi)切酶長(zhǎng)度多態(tài)型（RFLP）、基因文庫的篩選、序列測(cè)定、序列分析及系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建、斑點(diǎn)雜交和全細(xì)胞原位雜交及巢式雜交等。第二十七頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二微生物樣品基因組DNA的提取16srRNA基因片段的獲得（pcr）16srRNA基因片段的分析16srRNA基因分析步驟第二十八頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二腸道微生物樣品基因組DNA的提取rRNA的含量很高，易于獲得較多的模板，但是RNA易降解，因此一般研究多采用提取細(xì)胞總DNA。腸道環(huán)境中存在的細(xì)菌種類繁多，形態(tài)及性質(zhì)各異，必須盡可能無選擇性地裂解腸道細(xì)菌細(xì)胞以得到代表性的核酸分子。菌體細(xì)胞裂解常用方法酶法化學(xué)法機(jī)械法目前認(rèn)為最可靠的方法是：溶菌酶配合微珠振蕩裂解，使腸道混合微生物的DNA充分釋放，再用酚-氯仿抽提總DNA。第二十九頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二16srRNA基因片段的獲得16SrRNA通用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增的一般程序94~96℃預(yù)變性2~5min94~95℃變性30~60s45~55℃退火60s68~72℃延伸2~4min

最后68~72℃延伸6~10min

缺點(diǎn)：可能出現(xiàn)嵌合產(chǎn)物和擴(kuò)增偏嗜性現(xiàn)象。第三十頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二16srRNA基因片段的分析1）將PCR產(chǎn)物克隆到質(zhì)粒載體上進(jìn)行測(cè)序，與16SrRNA數(shù)據(jù)庫中序列比較，確定其進(jìn)化樹中位置，從而鑒定樣品中可能存在的微生物種類。16SrRNA基因片段的分析方法特點(diǎn)：該方法獲得信息最全面，但在樣品復(fù)雜情況下測(cè)序工作繁重。主要應(yīng)用：?jiǎn)沃昃蔫b定；兩種菌的同源性比較，確定其歸屬。2）16SrRNA基因片段的多態(tài)性分析（又叫DNA遺傳指紋圖譜技術(shù)）。經(jīng)PCR后其產(chǎn)物為序列等長(zhǎng)但不同源的DNA混合物，常用DGGE、TGGE等手段分離。混合物中序列的多樣性和不同序列的豐度在一定程度上反映原始樣品中微生物種群的多樣性和不同物種的豐度。特點(diǎn)：PCR過程中的堿基插入等造成錯(cuò)誤主要應(yīng)用：微生物群體多樣性；微生物種群動(dòng)態(tài)分析等。第三十一頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二3）通過16SrRNA種屬特異性的探針與PCR產(chǎn)物雜交以獲得微生物組成信息。此外，探針也可以直接與樣品進(jìn)行原位雜交，通過原位雜交不僅可以測(cè)定微生物豐度，且能分析它們的空間分布16SrRNA基因片段的分析方法特點(diǎn)：簡(jiǎn)單快速。主要應(yīng)用：快速驗(yàn)證其它方法可能出現(xiàn)的假陰陽性；混合物中釣取已知特定種類。4）對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行RFLP或T-RFLP。將PCR產(chǎn)物酶切，通過觀察酶切電泳圖譜、數(shù)值分析，確定微生物基因的核糖體型，再同核糖體數(shù)據(jù)庫中的已有數(shù)據(jù)進(jìn)行比較分析。主要應(yīng)用：微生物組成和不同微生物的種屬關(guān)系分析。第三十二頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二樣品的采集土壤和污泥樣品的采集一般不要求無菌操作。而應(yīng)當(dāng)注意樣品的深度。水體樣品的采集，應(yīng)視水體清潔程度而定，或直接采集或用濾紙過濾濃縮（要求容器和過濾器無菌及無菌操作）空氣樣品的采集：要求在無菌操作下進(jìn)行濾紙過濾生物體上的樣品采集，要求取下一定量的組織，用無菌溶液把其中的微生物洗滌下來。第三十三頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二富集培養(yǎng)和菌種分離用一定的選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，把樣品中所含的特殊微生物數(shù)量得到提高。一般進(jìn)行2~3次富集培養(yǎng)分離通常還是采用與富集相同的培養(yǎng)基進(jìn)行劃線分離挑取單菌落再進(jìn)行2~3次的純化。第三十四頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二最大或然值法（MPN）適用于測(cè)定在一個(gè)混雜的微生物群落中雖不占優(yōu)勢(shì)，但卻具有特殊生理功能的類群

。菌液經(jīng)多次10倍稀釋后，然后每個(gè)稀釋度取3—5次重復(fù)接種于適宜的液體培養(yǎng)基中。培養(yǎng)后，將有菌液生長(zhǎng)的最后3個(gè)稀釋度（即臨界級(jí)數(shù)）中出現(xiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)的管數(shù)作為數(shù)量指標(biāo)，由最大或然數(shù)表上查出近似值，再乘以數(shù)量指標(biāo)第一位數(shù)的稀釋倍數(shù)，即為原菌液中的含菌數(shù)。應(yīng)注意兩點(diǎn)：菌液稀釋度選擇要合適，原則是最低稀釋度的所有重復(fù)都應(yīng)有菌生長(zhǎng)，而最高稀釋度的所有重復(fù)無菌生長(zhǎng)。每個(gè)接種稀釋度必須有重復(fù)，重復(fù)次數(shù)可根據(jù)需要和條件而定，一般3—5個(gè)重復(fù)。第三十五頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二例1：如某一細(xì)菌在稀釋法中的生長(zhǎng)情況如下；

稀釋度

10-3

10-4

10-5

l0-6

10-7

10-8

重復(fù)數(shù)

5

5

5

5

5

5

出現(xiàn)生長(zhǎng)的管數(shù)

5

5

5

4

1

0其數(shù)量指標(biāo)為“541”，查最大或然數(shù)表得近似值17，然后乘以第一位數(shù)的稀釋倍數(shù)即每毫升原菌液含活菌數(shù)為l700000個(gè)。

確定數(shù)量指標(biāo)：不管重復(fù)次數(shù)如何，都是3位數(shù)字，第一位數(shù)字必須是所有試管都生長(zhǎng)微生物的某一稀釋度的培養(yǎng)試管，后兩位數(shù)字依次為以下兩個(gè)稀釋度的生長(zhǎng)管數(shù)，如果再往下的稀釋仍有生長(zhǎng)管數(shù)，則可此數(shù)加到前面相鄰的第三位數(shù)上即可。例2：如某一微生物生理群稀釋培養(yǎng)記錄為：

稀釋度

l0-1

10-2

10-3

l0-4

10-5

10-6

重復(fù)數(shù)

4

4

4

4

4

4

出現(xiàn)生長(zhǎng)的管數(shù)

4

4

3

2

1

0數(shù)量指標(biāo)為“433”，查表得近似值為30，則每毫升原菌液中含活菌30×102個(gè)。第三十六頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二附表23-1幾種主要微生物生理群MPN計(jì)數(shù)法一覽表微生物生理群培養(yǎng)基常用稀釋度常用重復(fù)次數(shù)培養(yǎng)時(shí)間(天)主要檢查方法氨化細(xì)菌蛋白胨氨化培養(yǎng)基0-6—10-947根據(jù)培養(yǎng)液加奈氏試劑后是否出現(xiàn)棕色或褐色，確定是否產(chǎn)生氨。亞硝酸細(xì)菌銨鹽培養(yǎng)基0-2—10-7314根據(jù)培養(yǎng)液加格利斯試劑Ⅰ及Ⅱ的反應(yīng)，出現(xiàn)絳紅色證明有NO-2生成；或在培養(yǎng)中加鋅碘淀粉試劑及體積比值為20%的H2SO4，若出現(xiàn)藍(lán)色，證明有NO-3生成。硝酸細(xì)菌亞硝酸鹽培養(yǎng)基0-2—10-6314根據(jù)培養(yǎng)液加入濃硫酸及二苯胺試劑后，是否出現(xiàn)藍(lán)色，確定是否有NO-3生成。反硝化細(xì)菌反硝化細(xì)菌培養(yǎng)基0-4—10-8314根據(jù)杜氏小管有無氣體，確定有無N2生成；利用格利斯試劑Ⅰ及Ⅱ和二苯胺試劑、濃硫酸檢測(cè)有無NO-2生成及有無NH3存在，判斷反硝化作用進(jìn)行情況。好氣性自生固氮菌阿須貝無氮培養(yǎng)基0-2—10-637-14根據(jù)培養(yǎng)液表面與濾紙接觸處有無褐色或粘液狀菌膜生成，判斷有無好氣性自生固氮菌生長(zhǎng)。好氣性纖維素分解菌赫奇遜噬纖維培養(yǎng)基0-1—10-5314根據(jù)各試管中濾紙條上有無黃色或桔黃色菌斑出現(xiàn)及濾紙斷裂狀況，確定有無好氣性纖維素分解細(xì)菌的生長(zhǎng)。厭氣性纖維素分解菌嫌氣性纖維素分解細(xì)菌培養(yǎng)基0-1—10-5314-21根據(jù)各試管中濾紙條上有無穿洞、破裂、完全分解情況，確定有無嫌氣性纖維素分解細(xì)菌的生長(zhǎng)。硫化細(xì)菌硫化細(xì)菌培養(yǎng)基0-2—10-8321-23在每管培養(yǎng)液中加入10g/L的BaCL2溶液2滴，如有白色沉淀出現(xiàn)，則證明有硫化菌活動(dòng)。反硫化細(xì)菌斯塔克反硫化細(xì)菌培養(yǎng)基0-2—10-7321-30根據(jù)培養(yǎng)液試管底部、管壁有無黑色沉淀出現(xiàn)，判斷有無反硫化細(xì)菌活動(dòng)。第三十七頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二白色農(nóng)業(yè)白色農(nóng)業(yè)是指微生物資源產(chǎn)業(yè)化的工業(yè)型新農(nóng)業(yè)，包括高科技生物工程的發(fā)酵工程和酶工程。白色農(nóng)業(yè)生產(chǎn)環(huán)境高度潔凈，生產(chǎn)過程不存在污染，其產(chǎn)品安全、無毒副作用。目前白色農(nóng)業(yè)的研究應(yīng)用領(lǐng)域包括：微生物食品；微生物飼料；微生物肥料；微生物農(nóng)藥、獸藥；微生物能源；微生物生態(tài)環(huán)境保護(hù)劑等。第三十八頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二自然界中微生物酶活性測(cè)定水解酶類活性測(cè)定蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纖維素酶、脫氫酶活性的測(cè)定微生物呼吸率測(cè)定第三十九頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二第四十頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二Synechococcuscoloniesarefoundonlyinsaltwater,andcontributeabout25%ofprimaryproductioninpelagicwaters.第四十一頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期二Prochlorococcusmarinus,atinyglobularcyanobacterium.Thistypeoforganismisextremelyabundantinthe