霍亂弧菌檢測PPT

關(guān)于霍亂弧菌檢測PPT第一頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四概況霍亂弧菌（V.cholera）是人類霍亂的病原體，霍亂是一種古老且流行廣泛的烈性傳染病之一。曾在世界上引起多次（7次）大流行。主要表現(xiàn)為劇烈的嘔吐、腹瀉、失水，死亡率甚高。屬于國際檢疫的烈性傳染病。第二頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四病原學(xué)霍亂弧菌屬于弧菌科弧菌屬，革蘭染色陰性菌體短小，稍彎曲，兩端鈍圓，長1.5～2.0μm,寬0.3～0.4μm。菌體尾端有鞭毛，運(yùn)動(dòng)極為活潑，在暗視野顯微鏡下呈流星樣運(yùn)動(dòng)，培養(yǎng)溫度以37℃為最適宜，在堿性（PH8.8～9.0）肉湯或蛋白胨培養(yǎng)基上易于生長。第三頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四

霍亂弧菌染色圖片

革蘭染色鞭毛染色第四頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四分群和分型：根據(jù)O抗原的特異性，可將霍亂弧菌分成139個(gè)血清群。根據(jù)是否與O1抗血清凝集分兩大群，

O1群霍亂弧菌：凡能與O1群抗血清發(fā)生凝集非O1群霍亂弧菌：凡不被O1群抗血清凝集的。第五頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四O1群霍亂弧菌的生物型1、古典生物型（前六次大流行）2、E1Tor生物型（第7次1961年來）。兩個(gè)生物型具有相同的血清型。我國流行以ElTor霍亂弧菌為主。第六頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四第七頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四

O1群霍亂弧菌的血清分型型別別名O抗原成份原型稻葉型（Inaba）A、C異型小川型（Ogawa）A、B中間型彥島型（Hikojima）A、B、C第八頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四非O1群霍亂弧菌O139群霍亂弧菌1992年，在印度印度馬德拉斯、泰米爾納德發(fā)生的霍亂疫情，分離到的菌株不與O1群霍亂血清凝集，但是引起O1群霍亂的典型癥狀。引起WHO重視，定為O139群霍亂弧菌，被認(rèn)為下一次霍亂大流行主角。第九頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四O139的生物學(xué)特征：

生化特征與O1菌基本相同。含有與O1群霍亂弧菌相同毒力基因除O抗原不同外，其它性狀均與EL-Tor生物型相似。毒力蛋白及其調(diào)控因子與El-Tor霍亂具有高度同源的編碼。O139菌可以產(chǎn)生莢膜與O1群霍亂無交叉免疫力環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng)耐藥性強(qiáng)第十頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四標(biāo)本采集和送檢1、糞便采集（1）采樣應(yīng)在發(fā)病早期，服用抗菌藥物之前完成，并盡快送到檢驗(yàn)室。糞便標(biāo)本采集方法如下：用棉拭子采取自然排出的新鮮大便，也可用直腸棉拭或采便管由肛門插入直腸內(nèi)3cm-5cm處采取，水樣便采取1ml-3ml，成型便采取指甲大小的糞便量。病人的嘔吐物，沾染糞便的衣服和用具，也可作為檢材。第十一頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四（2）送檢劇烈腹瀉病人的水樣便含有大量病菌，直接分離培養(yǎng)不難檢出陽性。不能立即檢查的，要接種于培養(yǎng)基內(nèi)，盡快送往檢驗(yàn)室。送檢標(biāo)本可放入（PH8.6-9.0）堿性蛋白胨水，也可放入文—臘二氏保存液或插入Cary-Blair二氏半固體保存培養(yǎng)基中。第十二頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四2、環(huán)境水體：水體的采樣一般要求用滅菌的500ml水樣瓶采集相對(duì)靜止的30cm以內(nèi)）500ml，加蓋密封后在室溫表層水。取水點(diǎn)的選擇應(yīng)結(jié)合流行病學(xué)調(diào)查等資料確定，同時(shí)，采樣時(shí)應(yīng)選擇在水流平穩(wěn)或靜止處吸取。非疫情狀態(tài)下的監(jiān)測采樣時(shí)間一般在清晨時(shí)，此時(shí)水體未受人群活動(dòng)等因素影響。每個(gè)采樣點(diǎn)中采樣位置應(yīng)相距數(shù)米、采集不少于2瓶做為平行檢測。（20-25℃）下送實(shí)驗(yàn)室檢測。第十三頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四3、水產(chǎn)品水生動(dòng)物的采樣通常選取活的或新鮮的水生動(dòng)物為采集對(duì)象，有時(shí)也應(yīng)考慮冰凍的水生動(dòng)物，以無菌操作采集合適的部位，如鰓部和/或腸內(nèi)容物等，置采樣瓶（管）或食品采樣袋密封，在常溫下送檢。有條件的采樣點(diǎn)可將水生動(dòng)物整體采回實(shí)驗(yàn)室再進(jìn)行相關(guān)處置。同時(shí)，要求以無菌棉簽涂抹五只（條）以上的某類水生動(dòng)物體表、鰓及/或肛門，置堿性蛋白胨水送檢，每管堿性蛋白胨水作一份樣品看待。第十四頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四培養(yǎng)1先以堿性蛋白胨水（pH8.6）作為增菌液；再用強(qiáng)選擇性分離培養(yǎng)基使用慶大霉素培養(yǎng)基或TCBS培養(yǎng)基或4號(hào)培養(yǎng)基；弱選擇性培養(yǎng)基使用堿性瓊脂或堿性膽鹽。應(yīng)注意不同廠商以及不同批號(hào)培養(yǎng)基的質(zhì)量，每批培養(yǎng)基在使用前必須進(jìn)行質(zhì)量檢測。第十五頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四培養(yǎng)2檢樣經(jīng)堿性胨水37℃，8-12h增菌后，每份樣品分別接種一個(gè)9cm直徑的慶大霉素瓊脂或TCBS瓊脂平板和一個(gè)堿性瓊脂平板進(jìn)行劃線分離培養(yǎng)。同時(shí)，以無菌吸管吸取0.2-0.5ml增菌液接種到新的堿性蛋白胨水中，進(jìn)行二次增菌培養(yǎng)后，再如上述步驟進(jìn)行劃線分離培養(yǎng)。特別強(qiáng)調(diào)所有環(huán)境樣品的增菌分離培養(yǎng)步驟必須包括上述二次增菌和強(qiáng)、弱雙平板分離。第十六頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四鑒定TCBS上出現(xiàn)黃色菌落，4號(hào)瓊脂或慶大霉素平板上出現(xiàn)灰褐色中心的菌落，均為可疑菌落，應(yīng)使用O1群和O139群霍亂弧菌的多價(jià)和單價(jià)抗血清進(jìn)行玻片凝集試驗(yàn)，結(jié)合菌落特征和菌體形態(tài)，作出初步報(bào)告。第十七頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四疑似菌落鑒定基本要求：分別從慶大霉素瓊脂或TCBS瓊脂、堿性瓊脂平板上各挑取5個(gè)以上的（少于5個(gè)的全部挑?。┮伤凭浣臃N于營養(yǎng)瓊脂斜面置37℃18-24h純培養(yǎng)（即每份樣品至少從4個(gè)分離平板上獲得約20株可疑菌落菌株），取斜面純培養(yǎng)物進(jìn)行O1群及O139群霍亂診斷血清玻片凝集試驗(yàn)，血清凝集陽性的菌株繼續(xù)相關(guān)的系統(tǒng)鑒定并報(bào)告結(jié)果。必須注意同一樣品中O1、O139群霍亂弧菌可能同時(shí)存在，有必要對(duì)所有選出的菌株都進(jìn)行凝集試驗(yàn)，以免遺漏。第十八頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四生化鑒定用于霍亂弧菌的鑒定試驗(yàn)有：①霍亂紅試驗(yàn):霍亂弧菌的兩種生物型均呈陽性反應(yīng)，但是，本反應(yīng)并非霍亂弧菌特有，許多能分解色氨酸和還原硝酸鹽的細(xì)菌，均能產(chǎn)生陽性反應(yīng)；②糖發(fā)酵試驗(yàn):霍亂弧菌分解葡萄糖、蔗糖、甘露醇產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不發(fā)酵阿拉伯糖；③粘絲試驗(yàn):弧菌屬細(xì)菌除副溶血弧菌部分菌株外，均有此反應(yīng)；④O/129敏感試驗(yàn)：參照藥敏試驗(yàn)方法進(jìn)行。將O/12910μg和150μg的紙片貼在接種有待測菌的瓊脂平板上，35℃孵育18～24h后，紙片周圍出現(xiàn)任何大小的抑菌環(huán)均為敏感；O1群和非O1群霍亂弧菌均敏感，但已有對(duì)O/129耐藥的菌株出現(xiàn)；O139群對(duì)O/129耐藥，用此試驗(yàn)作鑒定時(shí)需特別謹(jǐn)慎，需結(jié)合其他試驗(yàn)結(jié)果加以綜合考慮；⑤耐鹽試驗(yàn):霍亂弧菌可在不含氯化鈉和含有6％氯化鈉培養(yǎng)基中生長，氯化鈉濃度高于6％則不生長。第十九頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四第二十頁，共二十三頁，編輯于2023年，星期四TCBS平板培養(yǎng)菌落形態(tài)（呈黃色）第二十一頁，共二十三頁，編輯于20