流式細(xì)胞儀分析技術(shù)

流式細(xì)胞儀分析技術(shù)第一頁，共八十頁，2022年，8月28日流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometry,FCM)是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來的一種以流式細(xì)胞儀為工具，能快速測(cè)量細(xì)胞的物理或化學(xué)性質(zhì)，如大小、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、DNA、RNA、蛋白質(zhì)、抗原等，并可對(duì)其分類、收集的高新技術(shù)。概述第二頁，共八十頁，2022年，8月28日

流式細(xì)胞術(shù)（FCM）借鑒了熒光顯微鏡技術(shù),同時(shí)利用計(jì)算機(jī)技術(shù)、激光技術(shù)、電子技術(shù)、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、細(xì)胞免疫學(xué)等多門高新技術(shù)的發(fā)展,將熒光顯微鏡的激發(fā)光源改為激光,使之具有更好的單色性與激發(fā)效率,因而大大提高了檢測(cè)靈敏度,同時(shí)將固定的標(biāo)本臺(tái)改為流動(dòng)的單細(xì)胞懸液,用計(jì)算機(jī)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,從而大大提高了檢測(cè)速度與統(tǒng)計(jì)精確性,而且從同一個(gè)細(xì)胞中可以同時(shí)測(cè)得多項(xiàng)參數(shù),被譽(yù)為是細(xì)胞分析領(lǐng)域的“CT”。第三頁，共八十頁，2022年，8月28日

流式細(xì)胞術(shù)（FCM）以其快速、靈活、大量、靈敏和定量的特色，廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和臨床實(shí)踐各個(gè)方面，包括細(xì)胞生物學(xué)、腫瘤學(xué)、血液學(xué)、免疫學(xué)、藥理學(xué)、遺傳學(xué)及臨床檢驗(yàn)學(xué)等，在各學(xué)科領(lǐng)域發(fā)揮著重要的作用。第四頁，共八十頁，2022年，8月28日第一部分流式細(xì)胞儀的分析及分選原理第二部分?jǐn)?shù)據(jù)的顯示與分析第三部分流式細(xì)胞儀免疫分析的技術(shù)要求第四部分流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)檢查中的應(yīng)用第五部分應(yīng)用舉例第五頁，共八十頁，2022年，8月28日

流式細(xì)胞儀是將流體噴射技術(shù)、激光技術(shù)、空氣技術(shù)、γ射線能譜術(shù)及電子計(jì)算機(jī)等技術(shù)與顯微熒光光度計(jì)密切結(jié)合的一種非常先進(jìn)的檢測(cè)儀器。

第一部分流式細(xì)胞儀的分析及分選原理第六頁，共八十頁，2022年，8月28日

該儀器具有高度的精密性，測(cè)定的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠。既可分析單個(gè)細(xì)胞，也能區(qū)分群體細(xì)胞，檢測(cè)的速度可達(dá)5000個(gè)細(xì)胞/秒，分選純度可高達(dá)99%以上。由于該儀器的多參數(shù)性、準(zhǔn)確性、快速性及分選的高純度性等特點(diǎn)，所以在細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、病理學(xué)及臨床醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域中得到越來越廣泛的應(yīng)用。

第七頁，共八十頁，2022年，8月28日第八頁，共八十頁，2022年，8月28日細(xì)胞組成細(xì)胞功能大小細(xì)胞表面/胞漿/核--特異性抗原粒度細(xì)胞活性DNA,RNA含量胞內(nèi)細(xì)胞因子蛋白質(zhì)含量激素結(jié)合位點(diǎn)鈣離子,PH值,膜電位酶活性流式細(xì)胞儀常檢測(cè)的細(xì)胞特性第九頁，共八十頁，2022年，8月28日

經(jīng)熒光色素染色的細(xì)胞或包裹在鞘液里的其他生物微粒，從50－100μm的噴嘴逐個(gè)高速噴出，通過一個(gè)聚焦的光源，進(jìn)而通過各種光敏元件測(cè)量這些細(xì)胞或微粒所發(fā)射的散射光以及熒光，經(jīng)計(jì)算機(jī)分析和處理可得到多種信息參數(shù)。一、工作原理第十頁，共八十頁，2022年，8月28日結(jié)構(gòu)示意圖第十一頁，共八十頁，2022年，8月28日單細(xì)胞液柱已標(biāo)記的單細(xì)胞懸液和鞘液硅化管流動(dòng)室噴嘴熒光檢測(cè)系統(tǒng)和散射光感受系統(tǒng)收集光信號(hào)熒光染料被激發(fā)發(fā)光光電倍增管脈沖信號(hào)計(jì)算機(jī)系統(tǒng)分析結(jié)果放大垂直相交形成穩(wěn)態(tài)水平激光與之基本過程第十二頁，共八十頁，2022年，8月28日（1）液流系統(tǒng)（2）光學(xué)系統(tǒng)（3）數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)1.流式細(xì)胞儀的基本結(jié)構(gòu)：第十三頁，共八十頁，2022年，8月28日由樣本和鞘液組成待測(cè)細(xì)胞 單個(gè)細(xì)胞的懸液 熒光染料標(biāo)記的單抗對(duì)其染色受清潔氣體壓力 從樣品管進(jìn)入流動(dòng)室形成樣本流鞘液：輔助樣本流被正常檢測(cè)的基質(zhì)液。主要作用是包裹樣本流的周圍，保持樣本流中細(xì)胞處于噴嘴中心位置，防止其靠近孔壁而阻塞噴孔。

（1）液流系統(tǒng)第十四頁，共八十頁，2022年，8月28日噴嘴FluorescencesignalsFocusedlaserbeam鞘液液流系統(tǒng)示意圖第十五頁，共八十頁，2022年，8月28日FCM的液流系統(tǒng)（如何形成單個(gè)細(xì)胞流）樣本管鞘液管第十六頁，共八十頁，2022年，8月28日激光光源：氣冷式氬離子激光器分色反光鏡：反射長/短波長，通過短/長波長光束成形器：兩十字交叉放置的透鏡透鏡組：形成平行光，除去室內(nèi)光濾片：長通、短通、帶通光電倍增管：FS,SS（散射光），F(xiàn)L1,FL2,FL3,FL4（熒光）（2）光學(xué)系統(tǒng)第十七頁，共八十頁，2022年，8月28日FlowTipLaserSSandFLDetectorFSDetector光學(xué)系統(tǒng)示意圖第十八頁，共八十頁，2022年，8月28日主要由計(jì)算機(jī)及其軟件組成（3）數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)第十九頁，共八十頁，2022年，8月28日細(xì)胞在液柱中與激光束相交時(shí)向周圍360°立體角方向散射的光線信號(hào)，它的強(qiáng)弱與細(xì)胞的大小、形狀、胞內(nèi)顆粒折射等有關(guān)，主要分為前向散射光和側(cè)向散射光。二、散射光的測(cè)定第二十頁，共八十頁，2022年，8月28日第二十一頁，共八十頁，2022年，8月28日

前向散射光（forwardscatter,FS）：激光束照射細(xì)胞時(shí)，光以相對(duì)軸較小角度(0.5°～10°)向前方散射的訊號(hào)用于檢測(cè)細(xì)胞等粒子的表面屬性，信號(hào)強(qiáng)弱與細(xì)胞體積大小成正比。第二十二頁，共八十頁，2022年，8月28日FALSSensorLaser前向散射光示意圖第二十三頁，共八十頁，2022年，8月28日

側(cè)向散射光（sidescatter,SS）：激光束照射細(xì)胞時(shí)，光以90°角散射的訊號(hào)，用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)屬性。第二十四頁，共八十頁，2022年，8月28日FALSSensor90LSSensorLaser側(cè)向散射光示意圖第二十五頁，共八十頁，2022年，8月28日 測(cè)得的FS與SS信號(hào)通過計(jì)算機(jī)處理，可得到FS-SS圖，由此可僅用散射光信號(hào)對(duì)未染色的活細(xì)胞進(jìn)行分析或分選。此為血細(xì)胞分類的基本原理，但不能分析表面分子。淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞中性粒細(xì)胞光散射測(cè)量最有效用途：從非均一群體中鑒別出某些亞群

第二十六頁，共八十頁，2022年，8月28日熒光信號(hào)由被檢細(xì)胞上標(biāo)記的特異性熒光染料受激發(fā)后產(chǎn)生，發(fā)射的熒光波長與激發(fā)光波長不同。每種熒光染料會(huì)產(chǎn)生特定波長的熒光和顏色，通過波長選擇通透性濾片，可將不同波長的散射光和熒光信號(hào)區(qū)分開，送入不同的光電倍增管。選擇不同的單抗及染料就可同時(shí)測(cè)定一個(gè)細(xì)胞上的多個(gè)不同特征。線性放大器和對(duì)數(shù)放大器三、熒光測(cè)量第二十七頁，共八十頁，2022年，8月28日熒光染料的特性激發(fā)波長(EXCITING)發(fā)射波長(EMISSION)第二十八頁，共八十頁，2022年，8月28日第二十九頁，共八十頁，2022年，8月28日熒光補(bǔ)償?shù)谌?，共八十頁?022年，8月28日通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞分選主要是在對(duì)具有某種特征的細(xì)胞需進(jìn)一步培養(yǎng)和研究時(shí)進(jìn)行的。四、細(xì)胞分選原理第三十一頁，共八十頁，2022年，8月28日細(xì)胞懸液形成液流柱流動(dòng)室振動(dòng)液流斷裂成液滴空白液滴含細(xì)胞的液滴棄去偏轉(zhuǎn)落入收集器壓電晶體產(chǎn)生機(jī)械振動(dòng)不充電充電（一）分選基本原理第三十二頁，共八十頁，2022年，8月28日分選速度：單位時(shí)間內(nèi)分選的細(xì)胞數(shù)量。與懸液中細(xì)胞的含量成正比。分選純度：分選出的目的細(xì)胞占所有收獲細(xì)胞的百分率。分選收獲率：實(shí)際收獲的分選細(xì)胞與設(shè)定通過測(cè)量點(diǎn)的分選細(xì)胞之間的比率。與純度成反比。分選得率：從一群體細(xì)胞懸液中分辨出目的細(xì)胞的總量，再經(jīng)分選后得到目的細(xì)胞的實(shí)際得率。與分選速度成反比。（二）分選的技術(shù)要求第三十三頁，共八十頁，2022年，8月28日參數(shù)：FS,SS,FL數(shù)據(jù)顯示方式（單參數(shù)直方圖、雙參數(shù)散點(diǎn)圖、二維等高圖、假三維等高圖、三參數(shù)散點(diǎn)圖）設(shè)門分析技術(shù)第二部分?jǐn)?shù)據(jù)的顯示與分析第三十四頁，共八十頁，2022年，8月28日FS：反映顆粒的大小SS：反映顆粒的內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度FL：反映顆粒被染上的熒光數(shù)量多少一、參數(shù)第三十五頁，共八十頁，2022年，8月28日單參數(shù)直方圖雙參數(shù)直方圖:點(diǎn)圖 二維等高圖 假三維等高圖三參數(shù)直方圖多參數(shù)分析直分析方圖設(shè)門分析:REGION和GATE設(shè)置二、數(shù)據(jù)顯示方式第三十六頁，共八十頁，2022年，8月28日由一維參數(shù)(散射光或熒光)與顆粒計(jì)數(shù)(COUNT)構(gòu)成，反映同樣散射光或熒光強(qiáng)度的顆粒數(shù)量的多少。（一）單參數(shù)直方圖第三十七頁，共八十頁，2022年，8月28日單參數(shù)直方圖細(xì)胞相對(duì)數(shù)量信道(channel)第三十八頁，共八十頁，2022年，8月28日雙參數(shù)直方圖：縱軸和橫軸分別代表被測(cè)量細(xì)胞的兩個(gè)測(cè)量參數(shù)，根據(jù)這兩個(gè)參數(shù)就可以確定細(xì)胞在圖上的表達(dá)位置。雙參數(shù)信號(hào)通常采用對(duì)數(shù)信號(hào)，最常用的是點(diǎn)密圖，在圖中，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)細(xì)胞，點(diǎn)圖利用顆粒密度反映同樣散射光或熒光強(qiáng)度的顆粒數(shù)量的多少。（二）雙參數(shù)直方圖第三十九頁，共八十頁，2022年，8月28日1.雙參數(shù)直方圖點(diǎn)圖綠色熒光強(qiáng)度紅色熒光強(qiáng)度第四十頁，共八十頁，2022年，8月28日雙參數(shù)直方圖點(diǎn)圖第四十一頁，共八十頁，2022年，8月28日2.二維等高圖由類似地圖上的等高線組成，其本質(zhì)也是雙參數(shù)直方圖。等高圖上每一條連續(xù)曲線上具有相同的細(xì)胞相對(duì)或絕對(duì)數(shù)，即“等高”。曲線層次越高(越里面的線)所代表的細(xì)胞數(shù)愈多。等高線越密集則表示細(xì)胞數(shù)變化率越大。第四十二頁，共八十頁，2022年，8月28日二維等高圖第四十三頁，共八十頁，2022年，8月28日3.假三維等高圖第四十四頁，共八十頁，2022年，8月28日（三）三參數(shù)直方圖第四十五頁，共八十頁，2022年，8月28日多參數(shù)分析：當(dāng)細(xì)胞標(biāo)記了多色熒光，被激發(fā)光激發(fā)后，得到的熒光信號(hào)和散射光信號(hào)可根據(jù)需要進(jìn)行組合分析。（四）流式細(xì)胞儀的多參數(shù)分析第四十六頁，共八十頁，2022年，8月28日

Gate設(shè)置：指在某一張選定參數(shù)的直方圖上，根據(jù)該圖的細(xì)胞群分布選定其中想要分析的特定細(xì)胞群，并要求該樣本所有其他參數(shù)組合的直方圖只體現(xiàn)這群細(xì)胞的分布情況。根據(jù)門的形狀又分為了線性門、矩形門、圓形門、多邊形門、任意形狀門和十字門。三、設(shè)門分析技術(shù)第四十七頁，共八十頁，2022年，8月28日A淋巴細(xì)胞B單核細(xì)胞C中性粒細(xì)胞A、B、C均為任意門第四十八頁，共八十頁，2022年，8月28日線性門第四十九頁，共八十頁，2022年，8月28日Region設(shè)置:

區(qū)閾（region,R）與門(gate,G)是兩個(gè)相關(guān)的概念，區(qū)閾可與門對(duì)應(yīng)，但是也可以包含于門。第五十頁，共八十頁，2022年，8月28日D1

CD4+/CD3-D2

CD4+/CD3+D3

CD4-/CD3-D4

CD4-/CD3+如十字門分析時(shí)，起就可以由四個(gè)區(qū)域構(gòu)成，即G=D1+D2+D3+D4。

第五十一頁，共八十頁，2022年，8月28日樣本制備標(biāo)記染色液相芯片技術(shù)質(zhì)量控制第三部分流式細(xì)胞儀免疫分析的技術(shù)要求

第五十二頁，共八十頁，2022年，8月28日外周血淋巴細(xì)胞樣品的制備 分離單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞的樣品制備蛋白酶消化機(jī)械吹打使貼壁細(xì)胞脫落 洗滌尼龍網(wǎng)過濾單細(xì)胞懸液一、免疫檢測(cè)樣品制備第五十三頁，共八十頁，2022年，8月28日新鮮實(shí)體組織單細(xì)胞懸液的制備機(jī)械法酶處理法化學(xué)試劑處理法表面活性劑處理法單細(xì)胞懸液的保存深低溫保存法（一年）乙醇或甲醇保存法（2周）甲醛或多聚甲醛保存法（2月）第五十四頁，共八十頁，2022年，8月28日適用條件:有較高的量子產(chǎn)額和消光系數(shù)對(duì)488nm的激發(fā)光波長有較強(qiáng)的吸收發(fā)射光波長與激發(fā)光波長間有較大的波長差易與標(biāo)記單抗結(jié)合而不影響抗體的特異性二、常用的熒光染料與標(biāo)記染色第五十五頁，共八十頁，2022年，8月28日FITCTexasredPE.PC.APCPEcy5FL1FL2FL3FL4激光細(xì)胞懸液異硫氰酸熒光素得州紅能量傳遞復(fù)合染料藻膽蛋白類（一）幾種常見的熒光染料第五十六頁，共八十頁，2022年，8月28日名稱染料激發(fā)波長熒光顏色溶解性對(duì)PH敏感性特點(diǎn)異硫氰酸熒光素FITC488綠525易敏感易溶于水，與抗體結(jié)合不影響特異性得州紅Texasred568紅615不易不敏感穩(wěn)定，偶聯(lián)后量子產(chǎn)額低藻紅蛋白PE488橙575易不敏感具較多發(fā)光基團(tuán)，消光系數(shù)和量子產(chǎn)額高藻青蛋白PC488別藻青蛋白APC633紅670能量傳遞復(fù)合染料PEcy5488紅670易不敏感減少交叉，成本高常用的幾類熒光染料第五十七頁，共八十頁，2022年，8月28日 用化學(xué)法將兩種不同激發(fā)波長的染料結(jié)合在一起，在488nm激發(fā)光照射下，通過一個(gè)熒光染料被激發(fā)后產(chǎn)生的發(fā)射波長再激發(fā)另一熒光染料產(chǎn)生熒光信號(hào)，從而檢測(cè)到該特定熒光信號(hào)。能量傳遞復(fù)合染料第五十八頁，共八十頁，2022年，8月28日PECY5CY5CY5488nm575nm670nm紅色熒光花青苷5藻紅蛋白能量傳遞復(fù)合染料機(jī)制第五十九頁，共八十頁，2022年，8月28日熒光染料與細(xì)胞成分的四種結(jié)合方式

結(jié)構(gòu)親和式 嵌入結(jié)合 共價(jià)鍵結(jié)合 熒光標(biāo)記抗體特異性結(jié)合免疫熒光標(biāo)記方法

直標(biāo):干擾少,但需購買多種單抗 間標(biāo):步驟多,干擾多,不需標(biāo)記多種抗體 組合標(biāo)記（二）免疫熒光標(biāo)記第六十頁，共八十頁，2022年，8月28日免疫膠乳顆粒的應(yīng)用即液相芯片技術(shù)是把微小的乳膠微球分別染成上百種不同的熒光色，把針對(duì)不同檢測(cè)物的乳膠微球混合后再加入待測(cè)標(biāo)本，在懸液中與微粒進(jìn)行特異性地結(jié)合，經(jīng)激光照射后不同待測(cè)物產(chǎn)生不同顏色，并可進(jìn)行定量分析。因檢測(cè)速度極快，所以又有“液相芯片”之稱。三、免疫膠乳顆粒技術(shù)的應(yīng)用第六十一頁，共八十頁，2022年，8月28日微小的乳膠微球分別染成上百種不同的熒光色（固相芯片是用探針在芯片上的坐標(biāo)位置給基因的特異性編碼；而液相芯片則是用顏色來編碼）第六十二頁，共八十頁，2022年，8月28日第六十三頁，共八十頁，2022年，8月28日通過對(duì)標(biāo)記不同熒光素分子的檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)FCM對(duì)可溶性物質(zhì)的定量分析第六十四頁，共八十頁，2022年，8月28日適當(dāng)?shù)闹苽浞绞教幚砑t細(xì)胞實(shí)體組織來源標(biāo)本用機(jī)械法溫度25~37℃，pH7.0~7.2四、流式細(xì)胞免疫學(xué)技術(shù)的質(zhì)量控制（一）單細(xì)胞懸液制備的質(zhì)控第六十五頁，共八十頁，2022年，8月28日溫度pH染料濃度固定劑（二）免疫熒光染色的質(zhì)控第六十六頁，共八十頁，2022年，8月28日光路與流路校正:確保激光光路與樣品流處于正交狀態(tài)，減少變異（CV）。PMT（光電倍增管）校準(zhǔn):保證樣品檢測(cè)時(shí)儀器處于最佳靈敏度工作狀態(tài)。絕對(duì)計(jì)數(shù)校準(zhǔn):保證計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。Flow-checkFlow-setFlow-count（三）儀器操作的質(zhì)控第六十七頁，共八十頁，2022年，8月28日同型對(duì)照：即免疫熒光標(biāo)記中的陰性對(duì)照，選用相同源性的未標(biāo)記單抗作為對(duì)照調(diào)整和設(shè)置電壓，以保證特異性。全程質(zhì)量控制：與待測(cè)標(biāo)本一起標(biāo)記和檢測(cè)，結(jié)果達(dá)靶值，提示本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠。（四）免疫檢測(cè)的質(zhì)控第六十八頁，共八十頁，2022年，8月28日流式細(xì)胞術(shù)目前已廣泛地被應(yīng)用于免疫學(xué)基礎(chǔ)研究和逐步進(jìn)入臨床應(yīng)用各方面，用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞表面的抗原成分進(jìn)行標(biāo)記分析，可區(qū)別多種細(xì)胞的特性，為細(xì)胞免疫的研究增加了有效的手段和幫助。第四部分流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用第六十九頁，共八十頁，2022年，8月28日T淋巴細(xì)胞及其亞群分析

Th(CD3+CD4+CD8-T);Tc(CD3+CD4-CD8+T)B淋巴細(xì)胞及其亞群分析

B1(CD19+CD5+):產(chǎn)生IgM型自身抗體,參與免疫調(diào)節(jié)、與自身免疫病的發(fā)生有關(guān)

B2(CD19+CD5-):受外來抗原刺激,產(chǎn)生高親和性特異性抗體NK細(xì)胞分析

NK(CD3-CD16+CD56+)一、淋巴細(xì)胞及其亞群的分析第七十頁，共八十頁，2022年，8月28日細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒性試驗(yàn)(死細(xì)胞與活細(xì)胞比例)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子測(cè)定二、淋巴細(xì)胞功能分析三、淋巴造血系統(tǒng)及白血病免疫分型對(duì)淋巴瘤和白血病進(jìn)行多色免疫分型用于選擇化療方案、判斷預(yù)后及檢出微小殘留病變第七十一頁，共八十頁，2022年，8月28日CD4+Th細(xì)胞、CD4+/CD8+比例

MDR(+)表示對(duì)化療藥物耐藥四、腫瘤耐藥基因分析五、AIDS病檢測(cè)中的應(yīng)用第七十二頁，共八十頁，2022年，8月28日HLA-B27可出現(xiàn)在58%～97%的強(qiáng)直性脊椎炎(As)患者 六、自身免疫病相關(guān)HLA抗原分析第七十三頁，共八十頁，2022年，8月28日

FCM作為一個(gè)強(qiáng)大的技術(shù)平臺(tái)，已應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域，其在移植免疫分析中的應(yīng)用也越來越廣泛。目前移植免疫中的FCM應(yīng)用主要包括流式細(xì)胞術(shù)的交叉配型（Flowcytometrycross-matching,FCXM）和群體反應(yīng)性抗體（Panelreactiveantibody,PRA）檢測(cè)。七、移植免疫中的應(yīng)用第七十四頁，共八十頁，2022年，8月28日小結(jié)流式細(xì)胞術(shù)（FCM）是在保持細(xì)胞及細(xì)胞器或微粒的結(jié)構(gòu)及功能不被破壞的狀態(tài)下，從分子水平上獲取多種信號(hào)實(shí)現(xiàn)對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行定量分析或純化分選。FCM分析中前向散射光反映顆粒的大?。粋?cè)向散射光反映顆粒內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度、表面的光滑程度；熒光反映顆粒被染上熒光部分?jǐn)?shù)量的多少，根據(jù)其標(biāo)記的抗原分子不同，即反映了不同抗原分子的表達(dá)情況。同型對(duì)照為免疫熒光標(biāo)記中的陰性對(duì)照，可使熒光標(biāo)記單抗的信號(hào)保持其特異性。對(duì)各項(xiàng)工作環(huán)節(jié)和儀器性能進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制和規(guī)范化操作，是保證FCM分析中各項(xiàng)檢測(cè)數(shù)據(jù)和指標(biāo)可靠性的關(guān)鍵。第七十五頁，共八十頁，2022年，8月28日

以北京寶賽生生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的Annexin-v-FITC凋亡檢測(cè)試劑盒為例，介紹一種Annexin-v-FITC和PI雙標(biāo)記流式細(xì)胞檢測(cè)法。第五部分、應(yīng)用舉例第七十六頁，共八十頁，2022年，8月28日膜聯(lián)蛋白V(Annexin-V)一種分子量為35-36KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的磷脂酰絲氨酸（phosphatidylserine,PS）高親和力特異性結(jié)合。碘化丙啶（propidiumiodide,PI)