葡萄的脫毒與快繁植物組織培養(yǎng)

葡萄的脫毒與快繁植物組織培養(yǎng)第一頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日第二頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日葡萄屬落葉木質(zhì)藤本植物，葡萄地上部分的莖細(xì)。節(jié)上具有卷須，可向上攀援。葉近圓型或卵型，3～5裂。葡萄原產(chǎn)于溫帶地區(qū)，不太抗寒。葡萄的根系抗寒力很弱，在－5～－7℃時(shí)即受凍。一、形態(tài)特征和生物學(xué)習(xí)性

第三頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日二、葡萄的組織培養(yǎng)1、選材接種：從生長(zhǎng)旺盛的葡萄新梢頂端取1～2㎝的莖尖,消毒,分離出約2mm長(zhǎng)的莖尖，接種到培養(yǎng)基上。2、培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基，再添加6-BA1～2mg/L，NAA0.01mg/L，LH100mg/L，蔗糖2%，瓊脂0.6%，而B(niǎo)5培養(yǎng)基愈傷組織化嚴(yán)重，莖尖生長(zhǎng)不好。3、苗分化：6-BA0.5mg/L，同時(shí)添加GA30.2，黑暗處理可促進(jìn)幼莖的伸成，提高成苗率。4、根分化：將苗轉(zhuǎn)入

MS+IAA0.4mg/L+NAA0.05mg/L

培養(yǎng)基中進(jìn)行生根。第四頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日三、脫毒與快繁

葡萄受到26種病毒的危害,主要有卷葉病毒、栓皮病毒、扇葉病毒、黃脈病毒和斑點(diǎn)病毒等。由于病毒的危害，葡萄的長(zhǎng)勢(shì)減弱，產(chǎn)量降低，果實(shí)的糖分含量減少，風(fēng)味變劣。葡萄卷葉病是危害最大的病毒病。（一）脫毒第五頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日（1）將材料置于38℃，CO21200mg/L的人工空氣侯箱內(nèi)。經(jīng)30min處理，較易從枝條尖端或休眠芽中除去扇葉病毒。其他病毒較難消除。（2）直接將葡萄蔓浸泡在50℃的溫水中10～20min，可以治療皮爾斯病。（3）將感染材料的修面芽插入健康指示植物的蔓中，然后在38℃的環(huán)境中保持2個(gè)月，以后取出枝條和接種芽繼續(xù)生長(zhǎng)。1、熱處理脫毒：第六頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日2、莖尖培養(yǎng)脫毒在25℃，相對(duì)濕度80%，每日16h的長(zhǎng)日照條件下水培生成新芽，剝離切取帶1~3個(gè)葉原基0.2~0.3mm莖尖進(jìn)行立體培養(yǎng)，即可獲得脫毒苗。第七頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日3、無(wú)病毒苗的鑒定用抗血清法、電子顯微鏡檢測(cè)法、ELISA法或指示植物進(jìn)行病毒鑒定，以確保脫毒后的試管苗不含病毒。第八頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日（二）快繁1、材料與消毒取經(jīng)過(guò)脫毒的枝條稍1~2cm，用5%的次氯酸鈉aq消毒2~3min，用無(wú)菌水沖洗3次，再在0.1%升汞aq中浸泡2min，用無(wú)菌水沖洗4次。把芽放在解剖鏡下，無(wú)菌條件下，去除幼葉和葉原基，使生長(zhǎng)點(diǎn)暴露。用刀切下含有1~2個(gè)葉原基，大小為0.2~0.3mm的生長(zhǎng)點(diǎn)接種于培養(yǎng)基上。第九頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日2、培養(yǎng)條件培養(yǎng)基莖尖分化與繼代培養(yǎng)培養(yǎng)基：1/2MS+6-BA0.5mg/L+LH100mg/L+NAA0.01mg/L+GA0.2mg/L,2%蔗糖，0.6%瓊脂，PH=5.8生根培養(yǎng)基：1/2MS+IAA0.4mg/L+NAA0.05mg/L溫度：25±2℃光照：1000lx，16小時(shí)第十頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日3、生長(zhǎng)與分化接種成活的莖尖在一個(gè)月左右開(kāi)始分化出芽和側(cè)芽，兩個(gè)月左右形成芽叢，即可進(jìn)行大量增殖。每月繼代一次，每個(gè)芽叢切成10個(gè)。第十一頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日4、生根培養(yǎng)剪取2~3cm長(zhǎng)的無(wú)根幼苗，插于上述培養(yǎng)基上，1~2周內(nèi)幼苗生根，一個(gè)月形成發(fā)達(dá)的根系，同時(shí)長(zhǎng)出5~6片新葉，生根率達(dá)90%以上。第十二頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日5、試管苗的馴化與移栽試管苗長(zhǎng)出5~7片新葉時(shí)，把瓶子移入溫室中，即時(shí)可打開(kāi)培養(yǎng)瓶，歷時(shí)7d。把苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗凈培養(yǎng)基，栽于經(jīng)過(guò)干熱滅菌處理的蛭石內(nèi)，盤(pán)上塑料薄膜罩嚴(yán)，置于陽(yáng)光下，20℃，自然條件下鍛煉15d。移入土中。第十三頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日小結(jié)：葡萄的脫毒與快繁形態(tài)特征和生物學(xué)習(xí)性

葡萄的組織培養(yǎng)選材接種培養(yǎng)基苗分化根分化脫毒與快繁脫毒快繁熱處理脫毒莖尖培養(yǎng)脫毒無(wú)病毒苗的鑒定材料與消