白血病細(xì)胞的免疫表達(dá)課件

白血病細(xì)胞的免疫表達(dá)03級(jí)交大教改班5031819004研究方法流式細(xì)胞術(shù)電鏡熒光顯微鏡免疫組織化學(xué)流式細(xì)胞術(shù)(FCM)流式細(xì)胞術(shù)白血病免疫分型是利用熒光素標(biāo)記的單克隆抗體（McAb）作分子探針，多參數(shù)分析白血病細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿或細(xì)胞核的免疫表型，由此了解被測白血病細(xì)胞所屬細(xì)胞系列及其分化程度。白血病形成的分化阻斷學(xué)說

流式細(xì)胞儀免疫分型實(shí)驗(yàn)1.樣本采集、運(yùn)輸、保存和操作2.樣本制備單細(xì)胞懸液的制備

分離靶細(xì)胞群體估細(xì)胞懸液

細(xì)胞染色3.抗體組合的確定4.樣本獲取5.數(shù)據(jù)分析6.數(shù)據(jù)解釋

電鏡(EM)電鏡不僅可以根據(jù)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)發(fā)育狀況提示幼稚細(xì)胞來源和功能狀態(tài)進(jìn)行診斷，也常常通過對(duì)紅系各階段細(xì)胞結(jié)構(gòu)分析判斷紅系病態(tài)造血的原因。

急性巨核細(xì)胞白血病(AMKL)A、小巨核細(xì)胞核不規(guī)則，有深切跡，異染色質(zhì)較多，胞漿中可見sER構(gòu)成管道網(wǎng)狀系統(tǒng)，顆粒少見，×6000；B、核膜和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)PPO陽性反應(yīng)，無陽性顆粒，×6000。免疫組化(IHC)免疫組織化學(xué)(IHC)以其方法簡單、特異性強(qiáng)、設(shè)備要求低、形態(tài)學(xué)與免疫學(xué)結(jié)合等優(yōu)勢，得到各級(jí)醫(yī)院尤其是基層醫(yī)院的廣泛認(rèn)可，成為其它方法不可完全取代的、血液系統(tǒng)腫瘤病理診斷、鑒別診斷與分型的常規(guī)檢測手段。

白血病細(xì)胞的免疫表達(dá)急性T淋巴細(xì)胞白血病(T-ALL)急性B淋巴細(xì)胞白血病(B-ALL)急性髓系白血病(AML)慢性淋巴細(xì)胞白血?。–LL）慢性髓細(xì)胞性白血病（CML）

急性B淋巴細(xì)胞白血病(B-ALL)CD10(CALLA)——區(qū)別ALL和AML與T細(xì)胞分化相同，在淋巴干細(xì)胞階段，只表達(dá)TDT，CD34等非系抗原；到B系祖細(xì)胞，出現(xiàn)CD19、CD79a及胞漿CD10表達(dá)；隨著B細(xì)胞分化發(fā)育到逐漸成熟，TDT消失，相繼出現(xiàn)CD10、CD22、CD45RA、CD20表達(dá)，同時(shí)出現(xiàn)膜免疫球蛋白；淋巴細(xì)胞發(fā)育到終末漿細(xì)胞，除表達(dá)漿細(xì)胞標(biāo)記抗體外，還表達(dá)胞漿免疫球蛋白。CD19、CD45RA、CD79a。急性非淋巴細(xì)胞白血病(AML)根據(jù)FAB分型：MO：有低的SSC和FSC。在CD45－SSC圖上出現(xiàn)在淋巴細(xì)胞位置上，至少表達(dá)一個(gè)特異性標(biāo)志如CD13或CD116，但MPO比CD13與CD33更靈敏。一般淋系標(biāo)志陰性，但也可表達(dá)CD7或CD4。一般HLA－DR、CD34陽性，有些研究表明CD7與CD34共表達(dá)在AML且預(yù)后差。

M1：流式上M1與M0相似不易區(qū)分，M1一般CD13＋、CD33＋、HLA－DR－，但CD34表達(dá)少于M0，可能表達(dá)部分CD15。

M2：M0與M1的主要區(qū)別是成熟度增加，blasts減少，CD15較M1較顯著，CD34弱于M1，CD13有時(shí)表達(dá)強(qiáng)于CD33，多數(shù)病例HLA－DR（-）。CD45－SSC圖顯示從髓系blast區(qū)至成熟骨髓細(xì)胞區(qū)的連續(xù)細(xì)胞帶，CD45－SSC圖有助于確定blasts比例。M3、高顆粒性，具較高的SSC，但CD45較成熟C少，多數(shù)情況HLA－DR（-）或表達(dá)減少，CD34少于M2、一般CD13弱（＋），可有CD2表達(dá)。

M4與M5：兩型表型相似，但M4較M5表達(dá)更多的CD34（＋），較之M0、M1，M4與M5有更大的FSS和SSC，CD45－SSC圖上，成熟C出現(xiàn)在單核區(qū)，重要的表型為CD13、CD33、HLA－DR、CD14和CD15，CD33可表達(dá)強(qiáng)于CD13，CD33（＋）、CD13（－）、CD34（－）很可能為M5，但只出現(xiàn)在少數(shù)病人中，部分M5可見CD56（＋）。

M6：M6較少見且特征不明顯，一般HLA－DR，CD34、CD13、CD33陽性，CD45－SSC圖顯示主要為紅系成份。

M7：巨核細(xì)胞白血病，在AML中少于1％。一般CD61（GpⅢa）和/或CD41（GpⅡb-Ⅲa）陽性，而注意由于血小板粘附在blasts上造成的假陽性，可以用流式雙色分析在EDTA存在下，測GpⅡb/Ⅲa與CD34以減少激活血小板的粘附。

慢性髓細(xì)胞性白血?。–ML）由于慢性期顯著的細(xì)胞分化，在CD45－SSC圖上除了髓系細(xì)胞占主導(dǎo)外，只顯示一個(gè)正常骨髓像，CML可確診，CML起病與發(fā)展相對(duì)緩慢，慢性期的持續(xù)1年左右最終發(fā)展為加速期和急變期。流式細(xì)胞技術(shù)對(duì)急變