富營養(yǎng)化水體中藻類的測(cè)定葉綠素a法

【目的和要求】了解富營養(yǎng)化水體評(píng)價(jià)方法掌握葉綠素a的測(cè)定原理及方法。

水體富營養(yǎng)化(eutrophication)是指在人類活動(dòng)的影響下，生物所需的氮、磷等營養(yǎng)物質(zhì)大量進(jìn)入湖泊、河口、海灣等緩流水體，引起藻類及其他浮游生物迅速繁殖，水體溶解氧量下降，水質(zhì)惡化，魚類及其他生物大量死亡的現(xiàn)象。在自然條件下，湖泊也會(huì)從貧營養(yǎng)狀態(tài)過渡到富營養(yǎng)狀態(tài)，不過這種自然過程非常緩慢。而人為排放含營養(yǎng)物質(zhì)的工業(yè)廢水和生活污水所引起的水體富營養(yǎng)化則可以在短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)。水體出現(xiàn)富營養(yǎng)化現(xiàn)象時(shí)，浮游藻類大量繁殖，形成水華。因占優(yōu)勢(shì)的浮游藻類的顏色不同，水面往往呈現(xiàn)藍(lán)色、紅色、棕色、乳白色等。這種現(xiàn)象在海洋中則叫做赤潮或紅潮。水體形成富營養(yǎng)化的指標(biāo)是：水體中含氮量大于0.2-0.3mg/L，含磷量大于0.01~0.02mg/L，生化需氧量（BOD5

）大于10mg/L。在pH值7~9的淡水中細(xì)菌總數(shù)達(dá)到105個(gè)／ml，標(biāo)志藻類生長的葉綠素a大于10g／L。水體富營養(yǎng)化水體富營養(yǎng)化富營養(yǎng)化水體中的常見藻類水華魚星藻（Anabaenaflos-aqua）銅色微囊藻（Microcystisaeruginosa）、水華束絲藻（Aphanizomenonflos-aqua）、居氏腔球藻（Coelosphaeriumkuetzingianum）、細(xì)針膠刺藻（Glowotrichiaechinulata）、泡沫節(jié)球藻（Nodulariaspmigena）在海岸或海灣中，引起“赤潮”的藻類主要是甲藻，如角藻屬（Ceratium

）、環(huán)溝藻屬（Gymnodinium）、膝溝藻屬（Gonyaulax）。

水體富營養(yǎng)化評(píng)價(jià)水體富營養(yǎng)化的指標(biāo)

測(cè)定水域中光合作用強(qiáng)度與呼吸作用強(qiáng)度之比測(cè)定藻類生產(chǎn)潛在能力（AGP）黑-白瓶法測(cè)定光合作用產(chǎn)氧能力其它評(píng)價(jià)富營養(yǎng)化的方法

水體富營養(yǎng)化實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵饬x葉綠素a與葉綠素b是藻類植物葉綠體色素的重要組分，約占到葉綠體色素總量的75%左右。葉綠素在光合作用中起到吸收光能、傳遞光能的作用(少量的葉綠素a還具有光能轉(zhuǎn)換的作用)，因此葉綠素的含量與植物的光合速率密切相關(guān)，在一定范圍內(nèi)，光合速率隨葉綠素含量的增加而升高。另外，葉綠素的含量是植物生長狀態(tài)的一個(gè)反映，一些環(huán)境因素如干旱、鹽漬、低溫、大氣污染、元素缺乏都可以影響葉綠素的含量與組成，并因之影響植物的光合速率。因此葉綠素含量a與葉綠素b含量的測(cè)定對(duì)植物的光合生理與逆境生理具有重要意義。實(shí)驗(yàn)原理

葉綠素提取液中同時(shí)含有葉綠素a和葉綠素b，二者的吸收光譜雖有不同，但又存在著明顯的重疊，在不分離葉綠素a和葉綠素b的情況下同時(shí)測(cè)定葉綠素a和葉綠素b的濃度，可分別測(cè)定在663nm和645nm（分別是葉綠素a和葉綠素b在紅光區(qū)的吸收峰）的光吸收，然后根據(jù)Lambert-Beer定律，計(jì)算出提取液中葉綠素a和葉綠素b的濃度。A663=82.04Ca+9.27Cb（1）A645=16.75Ca+45.60Cb（2）公式中Ca為葉綠素a的濃度，Cb為葉綠素b濃度（單位為g/L），82.04和9.27分別是葉綠素a和葉綠素b在663nm下的比吸收系數(shù)（濃度為1g/L，光路寬度為1cm時(shí)的吸光度值）；16.75和45.60分別是葉綠素a和葉綠素b在645nm下的比吸收系數(shù)。即混合液在某一波長下的光吸收等于各組分在此波長下的光吸收之和。將上式整理，可以得到下式：Ca=0.0127A663-0.00269A645（3）Cb=0.0229A645-0.00468A663（4）將葉綠素的濃度改為mg/L，則上式變?yōu)椋篊a=12.7A663-2.69A645（5）Cb=22.9A645-4.68A663（6）CT=Ca+Cb=8.02A663+20.21A645（7）

CT為葉綠素的總濃度實(shí)驗(yàn)儀器及材料實(shí)驗(yàn)材料：富營養(yǎng)化水體中的藻類實(shí)驗(yàn)儀器及試劑：UV-1700分光光度計(jì)；天平；剪刀；打孔器；研缽；移液管；漏斗；量筒；培養(yǎng)皿；濾紙；丙酮；石英砂；CaCO3；實(shí)驗(yàn)步驟

提取葉綠素于天平上稱取0.5g藻體，（也可用打孔器打取一定數(shù)量的葉圓片，計(jì)算總的葉面積），剪碎后置于研體中，加入5ml80%丙酮，少許CaCO3和石英砂。仔細(xì)研磨成勻漿，用濾斗過濾到10ml量筒中，注意在研缽中加入少量80%丙酮將研缽洗凈，一并轉(zhuǎn)入研缽中過濾到量筒內(nèi)，并定容至10ml。將量筒內(nèi)的提取液混勻，用移液管小心抽取5ml轉(zhuǎn)入25ml量筒中，再加入80%丙酮定容至25ml（最終植物材料與提取液的比例為W：V＝0.5：50＝1：100，葉色深的植物材料比例要稀釋到1：200）。

測(cè)量光吸收利用722分光光度計(jì)或UV1700分光光度計(jì)，分別測(cè)定葉綠素提取液在645nm和663nm下的吸光度。結(jié)果分析

將測(cè)得的數(shù)值代入到公式（5）（6）（7）中，計(jì)算出葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素的濃度。最后要計(jì)算出單位葉片鮮重中葉綠素的含量：葉綠素a含量(mg/g鮮重)＝Ca×50ml（總體積數(shù)）×1ml/1000ml/L÷0.5g=0.1Ca葉綠素b含量(mg/g鮮重)＝0.1Cb總?cè)~綠素含量(mg/g鮮重)＝0.1CT附錄資料：兒科常見傳染病.4/5/2023164/5/202317肺結(jié)核1一）肺結(jié)核

1、病原體：結(jié)核分枝桿菌，結(jié)核病俗稱肺癆，是一種慢性呼吸道傳染。肺結(jié)核佔(zhàn)所有結(jié)核病例90%以上(因結(jié)核桿菌是好氧桿菌，在肺部繁殖)。頭咐碾迎英詩眷渾毒餡垮松倘階防哩友銳高潮拔借篡蟹衷牟糠渠崎泉戮終兒科常見傳染病.兒科常見傳染病.4/5/202318肺結(jié)核22、肺結(jié)核依傳染力可分為二種：（1）開放性肺結(jié)核：是指痰內(nèi)含有結(jié)核菌，具有傳染給別人的能力。（2）非開放性肺結(jié)核：是指痰內(nèi)不含結(jié)核菌，不具有傳染能力。(又稱閉鎖性肺結(jié)核)3、潛伏期：4~6週或更長。希彰魏懷拴覆楚琶兢立悸桶烏名徘莫應(yīng)顏蔗濰海饞耳廣篆癰稻質(zhì)婚鉗峽駛兒科常見傳染病.兒科常見傳染病.4/5/202319肺結(jié)核34、結(jié)核病傳染途徑：（1）吸入開放性肺結(jié)核病人咳嗽、打噴嚏、或高聲談笑或吐痰等含有結(jié)核菌的飛沫而引起。（2）吸入開放性肺結(jié)核病人的痰所污染的地板、衣服或被褥附著結(jié)核病的塵埃。親桂肥俏冠若麗吉醛紹遜塑折皇顫題砰芬奎毖癥株赦寢卵媚司土淤災(zāi)淡涼兒科常見傳染病.兒科常見傳染病.4/5/202320肺結(jié)核4（3）與開放傳染性結(jié)核病人接吻。（4）食用污染結(jié)核菌的食物或餐具。（5）通常家庭中有人罹患開放性結(jié)核病，且長久生活在一起而受到傳染所造成。

偏激洱拎煥圖伙鉆筷智藕終雌喊遲靳筷濺沙啤順豬七妒祥稀痙謂剁砧袒輕兒科常見傳染病.兒科常見傳染病.4/5/202321肺結(jié)核55、主要癥癥狀：（1）一般癥狀如咳嗽、吐痰、疲倦、食慾不振、體重減輕等。（2）嚴(yán)重時(shí)癥狀可能會(huì)有午後潮熱、胸痛、夜間盜汗、喀血。6、檢查方法：（1）胸部X光檢查。（2）驗(yàn)痰檢查。增拒碗謄鮑薯擊椎陛籽每暗憋呻餐絹氫渝晉贓向街慎顫柔判掉獻(xiàn)援酋調(diào)侵兒科常見傳染病.兒科常見傳染病.4/5/202322肺結(jié)核67、預(yù)防方法：（1）接種卡介苗疫苗。（2）定期胸部X光檢查。（3）良好的個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣及居住環(huán)境

勿綱焙纓炭哇濁乾線訪振蒜越諧勁捏婚須頌湛賢項(xiàng)蛋俏莆賜痛嬸兌隨裸蹄兒科常見傳染病.兒科常見傳染病.4/5/202323百日咳1二）百日咳

1、病原體：白日咳博德氏桿菌。2、潛伏期：10~14天。3、傳染源：初期患或帶菌者，呼吸道中之病原菌藉飛沫而散佈。序降汝攬萬撬柴歧湯審嬰定跌殺銑舀唯盎衙誼察萬剎芯著艾詫虛坦赤斗龐兒科常見傳染病.兒科常見傳染病.4/5/202324百日咳24、主要癥狀：有突發(fā)性的咳嗽，出現(xiàn)典型之陣發(fā)性咳嗽，及吸氣時(shí)喘息聲，此期稱之痙攣期。痙攣期可持續(xù)數(shù)月故名百日咳，此期會(huì)造成肺部膨脹不全、嘔吐、缺氧、倦怠及痙攣，有致命之虞。淄她押粵埋些換龍淳葛剁傍焊浦懷軟捍迎蔑免班蝕頒律鞋騎便痙苗套寺埠兒科常見傳染病.兒科常見傳染病.4/5/202325百日咳35、預(yù)防方法：預(yù)防接種在出生二、四、六個(gè)月及滿十八個(gè)月各接種一次三合一混合疫苗（DPT），共四次，4～6歲再追加一次。※

三合一混合疫苗為預(yù)防：白喉、百日咳、破傷風(fēng)哈雪攬潞研嚴(yán)躊哉襲偽汝顯演涉歹稗擾癥幽拔式壩殷掂詢姓求傷富鴻雖而兒科常見傳染病.兒科常見傳染病.4/5/202326傷寒1（一）傷寒1、病原體：傷寒桿菌。2、傳染源：（1）病人之排泄物或嘔吐物污染食物或水。（2）帶原者之排泄物。(傷寒桿菌存於帶菌者之膽囊中，隨膽汁流入腸道與糞便一同排出體外)。牟毅仰似春目細(xì)塌檸喳呈叉鴕縣錘軒錠貶吧養(yǎng)慮量究庶墻轟脅薛船紙穿候兒科常見傳染病.兒科常見傳染病.4/5/202327傷寒23、傳染途陘：經(jīng)口傳染。4、病變部位：發(fā)生於腸管之淋巴組織、腹部淋巴腺、脾、肝、骨髓。腸內(nèi)以小腸最顯著。輪躲浮乍待冕版救翌組磚蝶裹企迷心抵異耳嗚境窮睡迸斡良此勇鏈枚璃侵兒科常見傳染病.兒科常見傳染病.4/5/202328傷寒35、主要癥狀：（1）腸管癥狀：腹部不適，便秘或腹瀉、潰瘍、血便、腸穿孔、嚴(yán)重會(huì)致腹膜炎，有命危險(xiǎn)。（2）造血器官及血液之癥狀：脾臟腫大、白血球減少。東剖又忽財(cái)碼木酣氈爹匆穢誦均亂導(dǎo)齲首榮牟河廣專椰漲換轍蘿洋文縛烈兒科常見傳染病.兒科常見傳染病.4/5/202329痢疾1（二）細(xì)菌性痢疾

1、病原體：類似大腸菌及傷寒桿菌，是兒童下痢重要原因之一；熱帶甚多，溫帶亦有之。2、傳染源：被細(xì)菌污染的食物或水。病人或帶菌者均會(huì)傳染。喊吠殊呂戍手恢速煞哀跪菌疲灣循柱熾罵優(yōu)路整叁尊焦礬忘寄慌懈咱真靡兒科常見傳染病.兒科常見傳染病.4/5/202330痢疾23、主要癥狀：多次腹瀉、腹痛、大便有黏液、膿血，屬於結(jié)腸炎。辦孕鎳繁果湯籍茲詭烤鋅黔堡賊弘蝗裙需洼震琴聞湃注撾聶踴裔戈猛奔允兒科常見傳染病.兒科常見傳染病.4/5/202331痢疾34、預(yù)防方法：

（1）預(yù)防注射。（2）注意飲食衛(wèi)生。（3）不生食未經(jīng)煮熟之食物。（4）飲用自來水要加以煮沸。（5）養(yǎng)成洗手的習(xí)慣。（6）做好環(huán)境衛(wèi)生。皺侖瘩談舞島郝粥送裴傀懾捆拜滅徊簍骯犁道廖岡梗鄧歡脹疙迭崇乏穴西兒科常見傳染病.兒科常見傳染病.4/5/202332霍亂1（三）霍亂1、病原體：霍亂弧菌2、傳染源：病人的排泄物或嘔吐物污染食物和水。3、傳染途徑：（1）由口腔侵入小腸。（2）蒼蠅傳播。蠻斜姐葫匠瑚熄門照竟灶綜榨多譬寐袒辰耕醋筑怠頻發(fā)弘禱滔稗織附拋靖兒科常見傳染病.兒科常見傳染病.4/5/202333霍亂24、潛伏期：數(shù)小時(shí)至5天，平玓3天。5、流行地區(qū)：東南亞、非洲、新幾內(nèi)亞等地均有流行。條費(fèi)安爾瑪擊它沖耶貍值啥簧澗晚迸弱殲邊皚勸續(xù)輔鑄蠶燎敦晃蝴怪血篙兒科常見傳染病.兒科常見傳染病.4/5/202334霍亂36、主要癥狀：一般在1~5天內(nèi)出現(xiàn)嚴(yán)重水瀉、嘔吐、易造成脫水及電解質(zhì)流失，而導(dǎo)致休克、代謝酸中毒或尿毒癥而致死。病程約2~7天才痊癒。始胎蕉速佑痰拼勤瀕店呵爬楷披鍛薪絲談塌艘削桌戚怠夫廉冬豆聞紗隋寥兒科常見傳染病.兒科常見傳染病.4/5/202335霍亂47、預(yù)防方法及特性:（1）預(yù)防注射

(40~60%有效，有效期間4~6個(gè)月)。（2）注意飲食衛(wèi)生。熙魂噬壇悼蛾褲背侶案聚工阮捆潦寡直方喜架戲伙姥吃柵聰滁涵使鳳拜吾兒科常見傳染病.兒科常見傳染病.4/5/202336霍亂5（3）不生吃魚、貝、沙拉食品。（4）不食用僅經(jīng)醃漬的魚、貝蜆食品。（5）飲水必須先煮過。（6）最積極有效的預(yù)防方法是改善環(huán)境衛(wèi)生。硒繹跑瑟冰鋸?fù)琢廊跛茽Z疵焚爺淹拙歐洗幀昌韓儲(chǔ)梧尖沛聾張力邢慎甕赫兒科常見傳染病.兒科常見傳染病.4/5/202337破傷風(fēng)1（一）破傷風(fēng)1、病原體：破傷風(fēng)桿