微生物的實驗室培養(yǎng)SK

微生物包括哪五類：病毒細(xì)菌放線菌真菌原生動物原核生物界原生生物界真菌界病毒界微生物基礎(chǔ)知識特點：小;簡單;低等;代謝速度快?，F(xiàn)在是1頁\一共有70頁\編輯于星期三常見的三種細(xì)菌典型形態(tài)A.球菌B.桿菌C.弧菌細(xì)菌的形態(tài)現(xiàn)在是2頁\一共有70頁\編輯于星期三細(xì)菌細(xì)胞由外向里依次有鞭毛、菌（纖）毛、莢膜、細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞質(zhì)中又有液泡、儲存性顆粒、核質(zhì)等。細(xì)菌的構(gòu)造圖1-3細(xì)菌的結(jié)構(gòu)現(xiàn)在是3頁\一共有70頁\編輯于星期三芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細(xì)菌.芽孢：橢圓形的休眠體現(xiàn)在是4頁\一共有70頁\編輯于星期三現(xiàn)在是5頁\一共有70頁\編輯于星期三1.何為培養(yǎng)基？3.不同的培養(yǎng)基有不同的配方，但是其基本成分都相同，都包括哪些營養(yǎng)成分？有何作用？請舉例說明。閱讀教材P14~15相關(guān)內(nèi)容，回答以下問題：2.按照不同的培養(yǎng)基劃分標(biāo)準(zhǔn)，培養(yǎng)基有哪些種類、配制特點及其應(yīng)用？一、培養(yǎng)基現(xiàn)在是6頁\一共有70頁\編輯于星期三液體培養(yǎng)基：不加瓊脂。用于工業(yè)生產(chǎn)。半固體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基中加少量瓊脂。用于觀察細(xì)菌運動、鑒定和保藏菌種。固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加較多瓊脂。用于微生物的分離、計數(shù)和鑒定（一）培養(yǎng)基的種類1、按物理狀態(tài)分：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配置出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)稱培養(yǎng)基現(xiàn)在是7頁\一共有70頁\編輯于星期三液體培養(yǎng)基現(xiàn)在是8頁\一共有70頁\編輯于星期三半固體培養(yǎng)基無動力有動力(彌散)(是否運動？)

現(xiàn)在是9頁\一共有70頁\編輯于星期三固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔現(xiàn)在是10頁\一共有70頁\編輯于星期三2、按功能分：選擇培養(yǎng)基：加入（缺少）某種化學(xué)物質(zhì)，從眾多微生物中分離出所需微生物鑒別培養(yǎng)基：加入某種指示劑，鑒別不同種類的微生物現(xiàn)在是11頁\一共有70頁\編輯于星期三加入青霉素的培養(yǎng)基:不加氮源的無氮培養(yǎng)基:不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基:

幾種選擇培養(yǎng)基舉例：分離酵母菌、霉菌等真菌分離固氮菌分離自養(yǎng)型微生物唯一碳源為纖維素的培養(yǎng)基分解纖維素的細(xì)菌現(xiàn)在是12頁\一共有70頁\編輯于星期三3、按化學(xué)成分：合成培養(yǎng)基：由已知成分配制，成分明確。用于菌種分離鑒定天然培養(yǎng)基：由天然成分配制，成分不明確。用于工業(yè)生產(chǎn)?，F(xiàn)在是13頁\一共有70頁\編輯于星期三（二）不同的微生物的生長往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方（三）不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、和氮源、無機鹽、等營養(yǎng)物質(zhì)。⑴碳源無機碳源：有機碳源：CO2、CO32-、HCO3--牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物⑵氮源無機氮源：有機氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含氮的有機物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源現(xiàn)在是14頁\一共有70頁\編輯于星期三除上述幾種主要營養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)（如維生素、堿基、某些氨基酸）以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。培養(yǎng)乳酸桿菌需添加維生素、培養(yǎng)霉菌需將培養(yǎng)基pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)細(xì)菌需將pH調(diào)至中性或微堿性，培養(yǎng)厭氧生物提供無氧的條件。現(xiàn)在是15頁\一共有70頁\編輯于星期三（四）配制原則⑴目的明確：⑵營養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當(dāng)⑶適宜的pH值：有機碳源異養(yǎng)型：根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的選擇原料自養(yǎng)型：不加碳源加入緩沖劑（空氣中CO2為碳源）生產(chǎn)科研現(xiàn)在是16頁\一共有70頁\編輯于星期三1.何為無菌技術(shù)？無菌技術(shù)包括哪些方面？2.什么是消毒？滅菌？兩者有何區(qū)別？3.常用的消毒與滅菌的方法有哪些？有何要求？4.請說出干熱滅菌法和高壓蒸汽滅菌法的操作步驟。二、無菌技術(shù)現(xiàn)在是17頁\一共有70頁\編輯于星期三(一)無菌技術(shù)的概念

無菌技術(shù)泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法技術(shù)。獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵，無菌技術(shù)就是防止雜菌污染的操作技術(shù)?，F(xiàn)在是18頁\一共有70頁\編輯于星期三2.無菌范圍：實驗操作空間、操作者的手和衣著清潔和消毒實驗接種用具、培養(yǎng)的器皿、培養(yǎng)基滅菌實驗操作過程酒精燈旁操作超凈工作臺避免已滅菌的材料用具與周圍物品接觸現(xiàn)在是19頁\一共有70頁\編輯于星期三耐高溫需保持干燥的物品，160～170℃1～2小時接種環(huán)、接種針等金屬用具70~75℃、30min80℃、15min100℃、5~6min消毒滅菌定義方法較為溫和理化方法，殺死部分有害菌體（不包括芽孢、孢子）強烈的理化方法，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法巴氏消毒法化學(xué)藥劑紫外線灼燒滅菌干熱滅菌酒精、氯氣、石炭酸等高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基，100KPa、121℃、15～30min1.消毒與滅菌：（二）無菌技術(shù)現(xiàn)在是20頁\一共有70頁\編輯于星期三現(xiàn)在是21頁\一共有70頁\編輯于星期三1.無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實驗操作者的雙手答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。旁欄思考現(xiàn)在是22頁\一共有70頁\編輯于星期三1．關(guān)于微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是A、是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源B、凡碳源都提供能量C、除水以外的無機物只提供無機鹽D、無機氮源也能提供能量答案：D課堂練習(xí)現(xiàn)在是23頁\一共有70頁\編輯于星期三2．下面對發(fā)酵工程中滅菌的理解不正確的是A、防止雜菌污染B、消滅雜菌C、培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌D、滅菌必須在接種前答案：B現(xiàn)在是24頁\一共有70頁\編輯于星期三編號成分含量①粉狀硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml3．右表是某微生物培養(yǎng)基成分，請據(jù)此回答：（1）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類型是

。（2）若不慎將過量NaCl加入培養(yǎng)基中。如不想浪費此培養(yǎng)基，可再加入

。自養(yǎng)型微生物

含碳有機物

現(xiàn)在是25頁\一共有70頁\編輯于星期三（3）若除去成分②，加（CH2O），該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng)

。（4）表中營養(yǎng)成分共有

類。（5）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后分裝前，要進(jìn)行是

。（6）右表中各成分重量確定的原則是

。（7）若右表培養(yǎng)基用于菌種鑒定，應(yīng)該增加的成分是

。固氮微生物

3

調(diào)整pH

依微生物的生長需要確定

瓊脂（或凝固劑）

現(xiàn)在是26頁\一共有70頁\編輯于星期三1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g瓊脂20.0g四.實驗操作㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計算：培養(yǎng)基用量依配方計算各成分的用量2.稱量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙、少量水加熱溶解→取紙→蛋白胨、NaCl→瓊脂→補水定容4.調(diào)pH、分裝、封口：5.滅菌：6.倒平板：培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿培養(yǎng)基冷卻到50℃現(xiàn)在是27頁\一共有70頁\編輯于星期三滅菌:

將50ml培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃，滅菌15～30min。將培養(yǎng)皿用舊報紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170℃下滅菌2h?，F(xiàn)在是28頁\一共有70頁\編輯于星期三

1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進(jìn)行倒平板了。問題討論現(xiàn)在是29頁\一共有70頁\編輯于星期三倒平板技術(shù)1.將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手撥出棉塞。1234現(xiàn)在是30頁\一共有70頁\編輯于星期三倒平板技術(shù)2.右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過火焰。1234現(xiàn)在是31頁\一共有70頁\編輯于星期三

2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基?，F(xiàn)在是32頁\一共有70頁\編輯于星期三倒平板技術(shù)12343.用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約10~

20mL)倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋?，F(xiàn)在是33頁\一共有70頁\編輯于星期三倒平板技術(shù)12344.等待平板冷卻凝固，大約需5~10min。然后，將平板倒過來放置，使皿蓋在下，皿底在上。現(xiàn)在是34頁\一共有70頁\編輯于星期三3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，將平板倒置，既可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染，又可以防止培養(yǎng)基水分過快揮發(fā)?，F(xiàn)在是35頁\一共有70頁\編輯于星期三

4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物?，F(xiàn)在是36頁\一共有70頁\編輯于星期三無菌檢查：將未接種的培養(yǎng)基放入37℃的溫室中培養(yǎng)24—48小時，以檢查滅菌是否徹底。2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種.現(xiàn)在是37頁\一共有70頁\編輯于星期三（二）純化大腸桿菌方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法純化大腸桿菌是讓大腸桿菌分散成單個細(xì)胞，每個細(xì)胞繁殖成一個菌落現(xiàn)在是38頁\一共有70頁\編輯于星期三單個或少數(shù)菌體2.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。3.功能：1.定義：菌落鑒定菌種的重要依據(jù)固體培養(yǎng)基上大量繁殖子細(xì)胞群體現(xiàn)在是39頁\一共有70頁\編輯于星期三平板劃線的操作方法現(xiàn)在是40頁\一共有70頁\編輯于星期三現(xiàn)在是41頁\一共有70頁\編輯于星期三現(xiàn)在是42頁\一共有70頁\編輯于星期三現(xiàn)在是43頁\一共有70頁\編輯于星期三一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個細(xì)胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落?，F(xiàn)在是44頁\一共有70頁\編輯于星期三現(xiàn)在是45頁\一共有70頁\編輯于星期三現(xiàn)在是46頁\一共有70頁\編輯于星期三現(xiàn)在是47頁\一共有70頁\編輯于星期三現(xiàn)在是48頁\一共有70頁\編輯于星期三現(xiàn)在是49頁\一共有70頁\編輯于星期三現(xiàn)在是50頁\一共有70頁\編輯于星期三現(xiàn)在是51頁\一共有70頁\編輯于星期三現(xiàn)在是52頁\一共有70頁\編輯于星期三現(xiàn)在是53頁\一共有70頁\編輯于星期三問題討論

1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？

答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；

每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。

劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。現(xiàn)在是54頁\一共有70頁\編輯于星期三

2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。

3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？

答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落?，F(xiàn)在是55頁\一共有70頁\編輯于星期三稀釋涂布平板法現(xiàn)在是56頁\一共有70頁\編輯于星期三

1.將分別盛有9mL水的6支試管滅菌，并按101~106的順序編號?，F(xiàn)在是57頁\一共有70頁\編輯于星期三2.用移液管吸取1mL培養(yǎng)的菌液，注入第二支試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，使菌液與水充分混勻。現(xiàn)在是58頁\一共有70頁\編輯于星期三3.從101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液，注入102倍稀釋的試管中，重復(fù)第2步的操作。依次類推，直到完成最后一支試管的稀釋?，F(xiàn)在是59頁\一共有70頁\編輯于星期三注意：移液管需要經(jīng)過滅菌。操作時，試管口和移液管離火焰1~2cm處.現(xiàn)在是60頁\一共有70頁\編輯于星期三現(xiàn)在是61頁\一共有70頁\編輯于星期三現(xiàn)在是62頁\一共有70頁\編輯于星期三現(xiàn)在是63頁\一共有7