藥物分析第四章-前處理-柳

一、定量分析樣品前處理方法

Pretreatmentofsampleusedinquantitativeanalysis概述定量分析樣品前處理方法第一頁，共21頁。泛影酸碘番酸磺溴酞鈉三氯叔丁醇碘苯酯第二頁，共21頁。含金屬有機(jī)藥物酒石酸銻鉀富馬酸亞鐵卡巴胂金屬有機(jī)藥物第三頁，共21頁。定量分析樣品前處理方法＊不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法直接測定法經(jīng)水解后測定法直接回流后測定法硫酸水解后測定法經(jīng)氧化還原后測定法堿性還原后測定法酸性還原后測定法利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測定含量第四頁，共21頁。＊經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法濕法破壞

HNO3-HClO4HNO3-H2SO4H2SO4-MSO4干法破壞氧瓶燃燒法第五頁，共21頁?？招腁.燃燒瓶B.鉑絲網(wǎng)C.D.盛固體樣品濾紙及其折疊法E.F.G.稱取液體樣品方法7mm50mm30mm尾部7mm13mm20mm25mm356mm166mm濾紙濾紙AGFEDCB氧瓶燃燒裝置及稱樣方法第六頁，共21頁。氧瓶燃燒法樣品吸收液

測定方法含氟有機(jī)藥物H2O

pH4.3HAc-NaAc

Buffer茜素氟藍(lán)

分光光度法含氯有機(jī)藥物NaOH溶液

銀量法汞量法

分光法含溴有機(jī)藥物H2O2-NaOH液

或NaOH液-

銀量法分光法

硫酸肼飽和液含碘有機(jī)藥物NaOH液-銀量法碘量法硫酸肼飽和液

汞量法分光法第七頁，共21頁。碘苯酯含量測定

取本品約20mg，精密稱定，照氧瓶燃燒法進(jìn)行有機(jī)破壞，用NaOHT.S.2ml與H2O10ml為吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液10ml，密塞，振搖放置數(shù)分鐘，加甲酸約1ml，用水洗滌瓶口，并通入空氣流約3~5min，以除去剩余的溴蒸氣，加KI2g，密塞，搖勻，用Na2S2O3液(0.02mol/L)滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml的硫代鈉液(0.02mol/L)相當(dāng)于1.388mg的C19H29IO2C19H29IO2分子量為416.34第八頁，共21頁。二、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則藥物穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則緩釋、控釋制劑指導(dǎo)原則微囊、微球與脂質(zhì)體制劑指導(dǎo)原則細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則第九頁，共21頁。

第三節(jié)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證

目的：

證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測要求

效能指標(biāo)：評(píng)價(jià)分析方法的尺度

效能指標(biāo)包括:

精密度,準(zhǔn)確度,檢測限,定量限,選擇性,線性與范圍,耐用性第十頁，共21頁。(1)準(zhǔn)確度（accuracy）：測量值與真實(shí)值接近的程度表示:回收率測定方法：回收試驗(yàn)加樣回收試驗(yàn)第十一頁，共21頁。(2)精密度（precision）：定義:同一樣品多次測量值之間相互接近的程度表示：標(biāo)準(zhǔn)偏差(s),相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)重復(fù)性:同一實(shí)驗(yàn)室,同一人多次測定的精密度中間精密度:同一實(shí)驗(yàn)室，不同人，不同儀器測定的精密度

重現(xiàn)性:不同實(shí)驗(yàn)室，不同人測定的精密度第十二頁，共21頁。

(3)專屬性（specificity）指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測定出被測物的特性)。第十三頁，共21頁。(4)檢測限（limitofdetection，LOD）：藥物能被檢出的最低濃度(μg/ml)測定:信噪比法(S:N=3:1)(5)定量限（1imitofquantitation，LOQ）：藥物能被定量測出的最低濃度(μg/ml)測定:信噪比法(S:N=10:1)第十四頁，共21頁。(6)線性與范圍（linearityandrange）：待測物濃度與響應(yīng)值成線性關(guān)系的濃度范圍線性關(guān)系：Y=a+bx（r=0.9999)線性程度：相關(guān)系數(shù)(7)耐用性（robustness）:測定條件稍有變動(dòng)時(shí)，對(duì)測定結(jié)果的影響程度影響因素：被測溶液的穩(wěn)定性，流動(dòng)相的組成和pH，商品柱的品牌，柱溫等第十五頁，共21頁。檢驗(yàn)項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容項(xiàng)目內(nèi)容鑒別雜質(zhì)測定含量測定及溶出量測定定量限度準(zhǔn)確度＋＋精密度－＋重復(fù)性＋＋中間精密度＋①＋①專屬性②＋＋＋＋檢測限－③＋－定量限＋－線性＋＋范圍＋＋耐用性＋＋＋①已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度②如一種方法不夠?qū)?，可用其他分析方法予以補(bǔ)充③視具體情況予以驗(yàn)證第十六頁，共21頁。第四節(jié)、生物樣品分析的基本步驟1.藥物從蛋白結(jié)合或綴合物中釋出⑴蛋白變性：如應(yīng)用三氯醋酸、HClO4、有機(jī)溶劑(乙醇、丙酮、乙腈)使蛋白沉淀⑵鹽酸水解⑶酶消化法：最常使用蛋白水解酶中枯草菌溶素(一種細(xì)菌性蛋白分解酶，可在pH7.0~11.0使肽鍵降解)第十七頁，共21頁。第十八頁，共21頁。樣品固相凈化

及反相高效液相色譜法

測定血漿中茶堿

血漿樣品0.5ml+0.8ml內(nèi)標(biāo)液(0.01mg/ml咖啡因)+2ml甲醇

上清液加于2g

Al2O3柱，用甲醇洗脫

收集洗脫液

用空氣流揮干

殘?jiān)?0.0μl流動(dòng)相溶解上清液10μl進(jìn)樣伍朝筼等藥學(xué)學(xué)報(bào),1989,24(10):769~773旋渦振蕩0.5′離心15′(3000r/min)離心6′17000r/min第十九頁，共21頁。血漿樣品凈化后空白血漿凈化前空白血漿ColumnZorbaxC185μm2.5cm4.6mm254nmPrecolumnYWG-ODS9-11μm54.6mmMobilePhase:甲醇-醋酸鈉(0.05mol/LpH3.0)50?5012840min茶堿咖啡因12840min12840min第二十頁，共21頁。50100150200252015105茶堿(μg/ml)(min)