流行性乙型腦炎病毒危害評(píng)估報(bào)告

流行性乙型腦炎病毒危害評(píng)估報(bào)告流行性乙型腦炎病毒危害評(píng)估報(bào)告的部分內(nèi)容如下，流行性乙型腦炎是經(jīng)蚊蟲媒介傳播的一種人畜共患性疾病。1935年日本的學(xué)者從病死腦炎病人的腦組織中分離到該病毒，國(guó)際上，將這種病原體命名為日本腦炎病毒(JapaneseencephalitisvirusJEV)，簡(jiǎn)稱''乙腦病毒〃。我國(guó)稱為''流行性乙型腦炎〃，簡(jiǎn)稱''乙腦〃。根據(jù)《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》，流行性乙型腦炎屬于乙類傳染病。(-)不同實(shí)驗(yàn)室操作生物安全實(shí)驗(yàn)室級(jí)別要求根據(jù)《名錄》的要求，在實(shí)驗(yàn)室操作可能含有和確定含有乙型腦炎病毒感染性材料或未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料以及病毒培養(yǎng)、動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)，務(wù)必在BSL—2實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行；在對(duì)滅活、無感染性材料進(jìn)行操作時(shí)，確認(rèn)的乙腦病毒滅活措施有效后，方可進(jìn)入BSL—1實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行諸如ELISA,PCR等后續(xù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過程。二、背景資料(一)一般生物學(xué)特性1、形態(tài)染色乙型腦炎病毒屬于黃病毒科(Flaviviridae),黃病毒屬(flavi-virus)。電鏡下病毒顆粒大致呈球形，直徑40~60nm左右。超薄切片上可看到一層外膜(膜蛋白囊膜)和一個(gè)電子密集的核心(RNA蛋白)，圍繞成一個(gè)清晰的結(jié)構(gòu)。負(fù)染色體可見一些明顯的突起部分分布在外膜上，由32個(gè)子粒組成的衣殼呈明顯的對(duì)稱二十面體。病毒基因組為llkb左右的單股、正鏈RNA。脂質(zhì)雙分子層中鑲嵌有糖基化的包膜蛋白(E)和膜蛋白(M)。在脂蛋白囊膜表面有血凝素刺突，能凝集雞、鵝、羊等動(dòng)物紅細(xì)胞。JEV抗原性穩(wěn)定，人和動(dòng)物感染JEV后，均產(chǎn)生補(bǔ)體結(jié)合抗體、中和抗體和血凝抑制抗體。2、培養(yǎng)特性JEV能夠感染多種細(xì)胞，C6/36、BHK21、Vero等細(xì)胞株和金黃色地鼠腎、豬腎、狗腎、雞胚等原代細(xì)胞均對(duì)乙型肝炎病毒敏感，并引起典型的細(xì)胞病變。較敏感的細(xì)胞包括金黃色地鼠腎細(xì)胞，豬腎細(xì)胞。上述細(xì)胞感染乙型腦炎病毒后均能夠大量繁殖擴(kuò)增到增到較高的滴度，并引起明顯的細(xì)胞病變，細(xì)胞病變表現(xiàn)為細(xì)胞圓縮,脫落：C6/36細(xì)胞上的病變可以表現(xiàn)為聚集、圓縮以及脫落等。在瓊脂糖覆蓋下，雞胚、地鼠腎、Vero等細(xì)胞均能形成蝕斑。本病毒的這一特性可用于減毒疫苗苗株的篩選。乙型腦炎病毒有明顯的嗜神經(jīng)特性，接種小鼠、金黃色地鼠、猴、馬、綿羊、山羊等動(dòng)物內(nèi)均可引起典型的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，乳鼠可經(jīng)皮下接種而感染，小鼠是常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。能凝集多種動(dòng)物血紅細(xì)胞。病毒在細(xì)胞和鼠腦內(nèi)連續(xù)傳代，可使毒力下降。(1)原代細(xì)胞：原代細(xì)胞較敏感。而常用的為黃金色地鼠腎細(xì)胞(BHK-21)o培養(yǎng)環(huán)境：含EagLe's液、胎牛血清、青霉素和鏈霉素(PS)1%谷氨酰胺(G)的生長(zhǎng)維持液；ph值至7.2~7.4；37℃5%CO2培養(yǎng)箱孵育。以小量病毒(10TCID50)感染后，病毒很快繁殖，24H開始出現(xiàn)病變，72H病變明顯，病毒滴度可達(dá)107TCID50/ml以上。其他常用細(xì)胞有雞胚纖維母細(xì)胞，常用于蝕斑培養(yǎng)。（2）傳代細(xì)胞：以白蚊伊蚊C6/36細(xì)胞為最敏感，培養(yǎng)環(huán)境：含EagLe's液、1640培養(yǎng)液、胎牛血清、青霉素和鏈霉素（PS）、1%1%谷氨酰胺（G）的生長(zhǎng)維持液；ph值至7.2~7,4。在28℃的5%CO2培養(yǎng)箱孵育。病毒反之滴度高達(dá)108TCID50/ml,但細(xì)胞病變不甚明顯。BHK-21細(xì)胞可用于培養(yǎng)，也可適用于做蝕斑，此外，人二倍體細(xì)胞也可培養(yǎng)病毒。不同細(xì)胞的敏感性不同。（二）乙腦病毒對(duì)外環(huán)境的穩(wěn)定性L自然環(huán)境中的穩(wěn)定性與對(duì)溫度的敏感性乙型腦炎病毒對(duì)外界抵抗力弱，不耐熱，50°C30min或54°C10min即可滅活，對(duì)低溫和干燥抵抗力較強(qiáng)，在4℃冰箱中能保存數(shù)年，如加甘油或血清保存可增加其穩(wěn)定性。病毒感染性在PH7~9時(shí)最為穩(wěn)定，在-70°C或冷凍干燥存放較為穩(wěn)定，存于4℃的患者血清或其他感染材料的感染性可保持?jǐn)?shù)周之久。2.對(duì)紫外線、生物試劑的敏感性超聲波（560千周/S）、紫外線可滅活病毒。毒粒經(jīng)蛋白酶處理，不僅可以滅活，且表面突出物及血凝素也全部消失。病毒在不同的稀釋劑內(nèi)的穩(wěn)定性有明顯的不同，如10%水解乳蛋白和5%乳糖是較好的稀釋劑。3,化學(xué)因子的敏感性乙型腦炎病毒屬于有包膜的RNA病毒，對(duì)乙醛、氯仿、蛋白酶、乳酸、高鎰酸鉀、龍膽紫等均可滅活病毒。（三）乙型病毒的致病性和感染數(shù)量L致病性當(dāng)攜帶乙腦病毒的蚊蟲叮咬宿主時(shí)，病毒隨蚊蟲的唾液進(jìn)入人體內(nèi)。首先在局部的毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和局部淋巴組織的細(xì)胞中增殖，然后病毒釋放入血形成短暫的低水平的病毒血癥期，病毒經(jīng)過血液循環(huán)擴(kuò)散到肝、脾等處的細(xì)胞中增殖，一般僅表現(xiàn)出輕微的癥狀或無癥狀。乙腦病毒通過附著于人體的中樞神經(jīng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞，內(nèi)吞作用下進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)囊泡中，進(jìn)而被血管周圍的細(xì)胞攝取并運(yùn)送至中樞神經(jīng)系統(tǒng)。尤其在血腦屏障受損或腦實(shí)質(zhì)已被病毒入侵時(shí)更容易誘發(fā)腦炎。經(jīng)過4~7D的病毒增殖過程，大量病毒再次釋放入血形成第二次病毒血癥，引起發(fā)熱、寒戰(zhàn)、出疹和其他全身不適的癥狀；乙腦病毒能夠?qū)е聡?yán)重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)病理改變，表現(xiàn)為：可引起腦實(shí)質(zhì)廣泛病變，以大腦皮質(zhì)、腦干及基底核的病變最為明顯；腦橋、小腦和延髓次之，脊髓病變最輕。其基本病理改變?yōu)椋孩傺軆?nèi)皮細(xì)胞損害，可見腦膜與腦實(shí)質(zhì)小血管擴(kuò)張、充血、出血及血栓形成，血管周圍套式細(xì)胞浸潤(rùn)；②神經(jīng)細(xì)胞變性壞死，液化溶解后形成大小不等的篩狀軟化灶；③局部膠質(zhì)細(xì)胞增生，形成膠質(zhì)小結(jié)。部分患者腦水腫嚴(yán)重，顱內(nèi)壓升高或進(jìn)一步導(dǎo)致腦疝。病后免疫力強(qiáng)而持久，罕有二次發(fā)病者。多種動(dòng)物敏感對(duì)乙型腦炎病毒，將乙型腦炎病毒顱內(nèi)接種小白鼠、金黃色地鼠、馬、綿羊、山羊、馬等都能夠發(fā)生典型的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀和病理改變。一般顱內(nèi)接種3日齡乳鼠，2~3D內(nèi)病變達(dá)到最強(qiáng)表現(xiàn)為死亡，首先表現(xiàn)為離群、抽搐、拒乳、行動(dòng)遲緩、后肢活動(dòng)障礙、平衡能力下降，中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀漸進(jìn)性發(fā)展最終對(duì)外界刺激反映能力下降或消失、體溫下降直至死亡，通常皮下方式接種21日齡以下的小白鼠，致病變作用明顯，病毒先在神經(jīng)組織繁殖，再通過血腦屏障侵入神經(jīng)組織，引起腦炎而死亡。2,感染數(shù)量目前尚無乙腦對(duì)人的感染劑量的相關(guān)報(bào)道（四）乙腦病毒的傳播途徑及暴露的后果.自然狀態(tài)下乙腦的傳播途徑乙腦屬于血液傳播的自然疫源性疾病。病毒通常在豬一蚊一豬之間循環(huán)。通過媒介昆蟲叮咬處于病毒血癥的動(dòng)物，乙腦病毒在昆蟲體內(nèi)增殖，再叮咬人，通過口器把病毒傳到人體而引起感染發(fā)病。乙腦的傳染源是受感染的動(dòng)物和人。動(dòng)物：主要是豬，其次為家鼠、猴、馬、牛、羊、兔、田鼠、倉鼠、雞、鴨以及鳥類等。豬成為主要傳染源，蚊蟲是乙腦病毒的最主要的擴(kuò)散宿主和傳染源。.實(shí)驗(yàn)室操作所致的非自然狀態(tài)下乙腦感染途徑實(shí)驗(yàn)室操作可能發(fā)生感染的途徑主要有：大量活病毒操作時(shí)形成的感染性氣溶膠傳播、開放型傷口等。氣溶膠的產(chǎn)生環(huán)節(jié)包括：離心、病毒懸液分裝、病毒培養(yǎng)換液以及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)本注射、標(biāo)本解剖等環(huán)節(jié)。開放型傷口感染模式主要發(fā)生在：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接種與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物解剖過程中注射器針頭或破裂的病毒培養(yǎng)瓶扎傷、劃破；被實(shí)驗(yàn)室內(nèi)感染有病毒的齒動(dòng)物咬傷；破損的皮膚或黏膜組織接觸到病毒等造成意外胃腸外接種等（六）乙腦的預(yù)防、診斷和治療L預(yù)防（1）免疫接種：接種乙腦疫苗以提高人群免疫力是預(yù)防乙腦的重要措施之一。接種對(duì)象是流行區(qū)的兒童及從非流行區(qū)到流行區(qū)的敏感人群。目前有滅活疫苗和活疫苗兩種。為了確保疫苗接種效果，接種時(shí)間應(yīng)在流行季節(jié)前1~3個(gè)月完成。兒童初次基礎(chǔ)免疫后應(yīng)按規(guī)定加強(qiáng)免疫。疫苗在運(yùn)輸和儲(chǔ)存過程中均應(yīng)在4℃保存。以保證其有效性。我國(guó)目前廣泛使用的乙腦疫苗有地鼠腎滅活疫苗和地鼠腎減毒活疫苗。目前已研制出純化濃縮的滅活疫苗。我國(guó)的乙腦減毒活疫苗自1989年批準(zhǔn)生產(chǎn)以來，10年多共生產(chǎn)兩億多人份，接種約1億多人,實(shí)驗(yàn)觀察副反應(yīng)較輕，認(rèn)為是安全有效的，但免疫持久性有待進(jìn)一步觀察。（2）滅蚊防蚊：滅蚊、防蚊為預(yù)防本病的主要環(huán)節(jié)。針對(duì)傳播乙腦病毒的蚊蟲所采取的以環(huán)境智力為主的綜合防制措施是切斷法。宜開展以滅蚊為中心的群眾性愛國(guó)衛(wèi)生運(yùn)動(dòng)，在農(nóng)村重點(diǎn)是消滅牲畜（特別是豬圈）的蚊蟲。黃昏戶外活動(dòng)應(yīng)避免蚊蟲叮咬。（3）化學(xué)藥物等防制：在我國(guó)現(xiàn)階段，采用化學(xué)防制方法也是最重要的手段,對(duì)一時(shí)無法清除的孽生地，可使用滅幼蟲殺蟲劑定期噴灑,如20%清氛殺蟲乳油、生物蛙、必克幼、2%毗蟲琳滅幼顆粒劑等藥物，效果較好。尤其在發(fā)生蚊媒傳染病的疫區(qū)，使用化學(xué)藥物，迅速降低成蚊密度是當(dāng)務(wù)之急，通過化學(xué)藥物的空間噴霧和滯留噴灑達(dá)到成蚊防制。（4）實(shí)驗(yàn)室防護(hù)：針對(duì)前述可能出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室感染的環(huán)節(jié)：離心時(shí)，使用帶蓋的密封離心機(jī)；嚴(yán)格按照生物安全操作規(guī)范，病毒培養(yǎng)操作時(shí)，要求實(shí)驗(yàn)操作務(wù)必輕柔規(guī)范，并且要求使用負(fù)壓設(shè)施；實(shí)驗(yàn)操作過程中，佩戴符合生物安全標(biāo)準(zhǔn)的防護(hù)器材包括：口罩、帽子、手套和隔離衣等；定期進(jìn)行生物安全耗材的評(píng)價(jià)、評(píng)估工作；進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，務(wù)必小心，警惕不要被銳器扎傷，動(dòng)作輕柔最大限度地減少氣溶膠產(chǎn)生的可能性。2.診斷根據(jù)流行病學(xué)資料、臨床癥狀和體征以及實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果的綜合分析進(jìn)行診斷，但確診則需要依靠抗體檢查或病原分離。(1)流行病學(xué)：在乙腦流行區(qū)居住，在蚊蟲叮咬季節(jié)發(fā)病或發(fā)病前25D內(nèi)在蚊蟲叮咬季節(jié)到過乙腦流行區(qū)。(2)臨床癥狀和體征：急性起病，發(fā)熱頭痛、噴射性嘔吐、嗜睡，伴有腦膜刺激癥狀。急性起病，發(fā)熱2~3D后出現(xiàn)不同程度的意識(shí)障礙，如昏迷、驚厥、抽搐、肢體痙攣性麻痹等中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，或發(fā)展至中樞性呼吸循環(huán)衰竭。(-)乙腦病毒的復(fù)蘇L凍存的細(xì)胞培養(yǎng)病毒毒種的復(fù)蘇(略).干燥管保存的毒種的復(fù)蘇(略),感染的鼠腦組織(1)可能危害：在振蕩器上振蕩破碎及離心過程中易形成氣溶膠的溢出、液體濺出和離心管的可能破裂。(2)預(yù)防及處置措施：振蕩過程中一定要把離心管口封嚴(yán)，同時(shí)要在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行操作。離心后一定要在生物安全柜內(nèi)打開離心管吸取上清液。若離心管發(fā)生破裂，按《BSL-2實(shí)驗(yàn)室安全手冊(cè)》中意外事故處理辦法章節(jié)處理。打開離心管時(shí)，若液體濺出到安全柜臺(tái)面應(yīng)及時(shí)消毒處理。方法參見《BSL-3實(shí)驗(yàn)室安全手冊(cè)》中以外事故處理辦法章節(jié)中相關(guān)內(nèi)容。若濺到操作者身體上，其處理參見《BSL-2室安全手冊(cè)》中《意外事故處理辦法》章節(jié)中相關(guān)內(nèi)容。若手套污染必須經(jīng)高壓處理后才允許運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行集中處理。（二）病毒的培養(yǎng)與擴(kuò)增（略）（三）病毒滅活和滅活效果評(píng)價(jià)L可能危害吸取病毒液時(shí)有可能發(fā)生液體濺出、滴灑到實(shí)驗(yàn)臺(tái)面上等。裝有毒液的的蓋子上可能沾有病毒液，開蓋時(shí)可能會(huì)濺出，吸液時(shí)可能會(huì)污染移液槍壁：稀釋混勻過程可能會(huì)形成氣溶膠。2,預(yù)防及處置措施加液過程中臺(tái)面上鋪上浸有消毒劑的紗布或一次性吸水紙，一旦發(fā)生意外，馬上將污染的紗布或紙棄入含10%有效氯的次氯酸鈉的消毒缸內(nèi)并立即消毒臺(tái)面并更換新的紗布或吸水紙。幻業(yè)過程中動(dòng)作要輕，棄液時(shí)應(yīng)將吸管插入消毒液面下，方法參見《BSL-3實(shí)驗(yàn)室安全手冊(cè)》中《意外事故處理辦法》相關(guān)章節(jié)內(nèi)容。裝有病毒液的管子開蓋前先離心；稀釋混勻過程不要用吸頭吹打，而是蓋緊瓶蓋后在振蕩器上混勻。3,病毒的保存略。（四）病毒凍干保存1,可能危害分裝操作中可能有氣溶膠的產(chǎn)生；在毒種管封口、儲(chǔ)存中可能發(fā)生破裂；破裂的毒種管可能劃傷實(shí)驗(yàn)人員。2,預(yù)防及處置措施操作輕柔，病毒液要貼壁緩緩流下，封口時(shí)要力度合適，如發(fā)生毒種管破裂或劃傷情況，請(qǐng)參見《BSL-2實(shí)驗(yàn)室安全手冊(cè)》中《意外事故處理辦法》章節(jié)中相關(guān)內(nèi)容處理。（五）毒種的運(yùn)輸（略）（六）標(biāo)本采集、運(yùn)輸和保存（略）（七）病毒分離（略）（A）病毒檢測(cè)1.ELISALISA檢測(cè)中使用全病毒抗原的情況下，包被抗原和檢測(cè)后包被材料的消毒、廢棄值得注意。要求在生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室生物安全柜內(nèi)進(jìn)行活病毒抗原包被，操作者應(yīng)著防護(hù)裝備，戴手套，包被好的檢測(cè)板最好密封，放置4℃冰箱內(nèi)過夜。由于活病毒的存在及造成擴(kuò)散的危險(xiǎn)，檢測(cè)后應(yīng)將檢測(cè)板放置于消毒液內(nèi)，將可能存留的病毒滅活，而后廢棄。2.IFAIFA檢測(cè)中也會(huì)涉及使用活病毒作為抗原的情況，所以制備抗原片時(shí)應(yīng)在生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，用過的抗原片應(yīng)在消毒液中浸泡消毒后再廢棄。.PCR嚴(yán)格執(zhí)行PCR功能分區(qū)，防止病原核酸和環(huán)境雙向污染極其重要。PCR過程中使用的與核酸或CDNA接觸的槍頭要回收至密閉容器內(nèi)。使用的一次性手套等物品，務(wù)必置于密閉垃圾桶內(nèi)廢棄。.Real-timePCR對(duì)環(huán)境潔凈度要求比PCR嚴(yán)格，因此每次Real-timePCR使用的槍頭，一次性手套均應(yīng)即使置于密閉容器中，回收廢棄。5,中和試驗(yàn)中和試驗(yàn)中一定會(huì)使用活病毒，操作費(fèi)時(shí)費(fèi)力，應(yīng)特別注意安全，應(yīng)在生物二級(jí)實(shí)驗(yàn)室生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，留下的可能有活病毒的物品，要及時(shí)浸泡消毒液，消毒后方可廢棄。（九）病毒滴定（略）（+）乙型腦炎病毒的中和試驗(yàn)1,可能危害裝有病毒液的蓋子上可能沾有毒液，開蓋時(shí)可能回濺出,吸液時(shí)可能會(huì)污染移液槍壁；稀釋混勻過程可能會(huì)形成氣溶膠；病毒液滴有可能發(fā)生液體濺出、灑在實(shí)驗(yàn)臺(tái)面上。2,預(yù)防及處置措施裝有病毒液的管子開蓋前先離心；稀釋混勻過程不要用吸頭吹打，而是蓋緊后在振蕩器上混勻；吸液過程中動(dòng)作要輕,棄液時(shí)應(yīng)將吸管插入液面下；加液過程中臺(tái)面上鋪上浸有消毒劑的紗布，一旦發(fā)生上述意外，實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)生的耗材等都必須經(jīng)高壓處理后才允許運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行處理。（H八一）蚊蟲飼養(yǎng)與蚊蟲的病毒接種（略）四.工作人員的預(yù)防接種和工作人員素質(zhì)（-）工作人員的預(yù)防接種根據(jù)《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》及《突法公共衛(wèi)生事件應(yīng)急條例》有關(guān)法律法規(guī)，并參照《中國(guó)疾病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室人員管理規(guī)定（試行）》及世界衛(wèi)生組織關(guān)于《實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊(cè)》等制定出實(shí)驗(yàn)室人員健康管理規(guī)定。集體措施如下：1,進(jìn)行乙型腦炎病毒相關(guān)操作的人員必須取得以下資格或處于以下工作狀態(tài)（1）完成乙型腦炎病毒疫苗接種程序，并且進(jìn)行抗體檢測(cè)（2）經(jīng)過規(guī)范的生物安全培訓(xùn)，并經(jīng)過嚴(yán)格考核和取得上級(jí)主管部門人員許可；發(fā)生嚴(yán)重的發(fā)熱性疾病、卡他性炎癥以及有近期較深的開放性傷口的人員應(yīng)該禁止或限制其進(jìn)入相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作區(qū)。（3）限制在妊娠早期的工作人員進(jìn)行乙型腦炎病毒相關(guān)的感染性材料的操作。.根據(jù)實(shí)驗(yàn)室從事乙腦病毒需要，為實(shí)驗(yàn)室人員建立健康檔案；新工作人員進(jìn)實(shí)驗(yàn)室前必須進(jìn)行本實(shí)驗(yàn)室規(guī)定項(xiàng)目的體檢，并根據(jù)需要進(jìn)行疫苗接種；每年最少一次為本實(shí)驗(yàn)室職工提供相關(guān)項(xiàng)目體檢，體檢日期定在每年9、10月份流行期過后，有條件的話，最好每年流行期前后都要進(jìn)行體檢；項(xiàng)目包括內(nèi)科常規(guī)檢查，血常規(guī)、尿常規(guī)檢查,肝功能、肝、脾B超，心電圖，抗體檢測(cè)，血凝抑制試驗(yàn)。.實(shí)行健康監(jiān)測(cè)報(bào)告，實(shí)驗(yàn)室人員必須在身體狀況良好的情況下，才能進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作。建立監(jiān)測(cè)網(wǎng)，有關(guān)人員必須每天監(jiān)察實(shí)驗(yàn)人員健康狀況，一旦出現(xiàn)體溫升高和身體狀況異常及時(shí)向本單位醫(yī)務(wù)室報(bào)告，進(jìn)行必要的醫(yī)學(xué)觀察和處置。從事與乙腦病毒有關(guān)的實(shí)驗(yàn)工作后,在相應(yīng)疾病的平均潛伏期內(nèi)不得離開實(shí)驗(yàn)室所在地，因工作原因必須離開時(shí)，務(wù)必采取相應(yīng)的監(jiān)測(cè)或預(yù)防措施。.對(duì)所有從事乙腦病毒的實(shí)驗(yàn)室工作人員在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室前都要做健康體檢，保留血樣，定期體檢采集的血清標(biāo)本留在健康檔案中備案。五,評(píng)估結(jié)論（一）各種實(shí)驗(yàn)活動(dòng)的防護(hù)措施1?凡是涉及到活病毒的操作如病毒分離、組織培養(yǎng)、TCID50測(cè)定、中和實(shí)驗(yàn)和空斑實(shí)驗(yàn)等，因?yàn)橐恢辈《?，而且病毒種子的濃度較高，可能會(huì)發(fā)生通過意外胃腸外接種、皮膚和黏膜接觸感染或通過氣溶膠感染等實(shí)驗(yàn)室意外感染。因此，對(duì)JEV活病毒的操作都必須在生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室的外排式生物安全柜內(nèi)操作。上崗前必須接受嚴(yán)格的生物安全以及該病毒實(shí)驗(yàn)技術(shù)的培訓(xùn)I,在個(gè)人防護(hù)措施上應(yīng)按生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室防護(hù)級(jí)別進(jìn)行個(gè)人防護(hù)。實(shí)驗(yàn)完畢后能高壓的廢棄物在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)121C高壓處理20min后才允許運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室，不能高壓的物品用含10%有效氯的次氯酸鈉溶液進(jìn)行浸泡消毒30min以上。2.臨床疑是病人標(biāo)本（血清和腦脊液標(biāo)本）中JEV的分離：如果知識(shí)未知病毒性腦炎暴發(fā)，而且根據(jù)流行季節(jié)和暴露史等懷疑為蟲媒病毒性腦炎，因臨床疑是病人標(biāo)本中病毒較少，且蟲媒病毒一般都需要通過感染的媒介蚊蟲叮咬傳播，氣溶膠造成的感染罕見報(bào)道，因此分離病毒可在生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室，在個(gè)人防護(hù)措施上應(yīng)按生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室防護(hù)級(jí)別進(jìn)行個(gè)人防護(hù)。3,已經(jīng)滅活的病毒或標(biāo)本，用于病毒特異性核酸和特異性抗體的檢測(cè)：此類實(shí)驗(yàn)因病毒已經(jīng)滅活，可BSL級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行操作。用于核酸提取的已知病毒和臨床疑是病人標(biāo)本的滅活過程，而且在PCR室進(jìn)行后續(xù)抽提過程，然后進(jìn)