動(dòng)物實(shí)驗(yàn)graduate課件

如何做好動(dòng)物實(shí)驗(yàn)——?jiǎng)游飳?shí)驗(yàn)與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)2010.01“I’msoproud!Allofmykidsaregoingintoresearch”田楓2010.10.28主要內(nèi)容動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型影響動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的因素動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本技術(shù)如何做好動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是根據(jù)研究目的，恰當(dāng)?shù)剡x用標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品種、品系，進(jìn)行各種科學(xué)實(shí)驗(yàn)，觀察和記錄動(dòng)物的反應(yīng)過(guò)程或反應(yīng)結(jié)果，以探討或檢驗(yàn)生命科學(xué)中未知因素的一種活動(dòng)。是生物研究中的重要方法之一，也是從動(dòng)物身上獲得有關(guān)情報(bào)資料的唯一手段。

關(guān)于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)相似性原則

利用與人體某些機(jī)能、代謝、結(jié)構(gòu)及疾病特點(diǎn)的相似性選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組織結(jié)構(gòu)：豬的皮膚組織結(jié)構(gòu)與人類(lèi)的相似系統(tǒng)機(jī)能：犬有發(fā)達(dá)的血液循環(huán)和神經(jīng)系統(tǒng)，毒理方面反應(yīng)和人也較接近繁殖特性：哺乳動(dòng)物和人近似，性成熟、妊娠期和壽命一般是成比例的疾病特點(diǎn)：如旱獺肝炎病毒感染體液成分：鳥(niǎo)類(lèi)糞尿混合排出；草食動(dòng)物尿液呈堿性；肉食動(dòng)物尿液呈酸性。選擇時(shí)要注意解剖特性：有些動(dòng)物的解剖結(jié)構(gòu)與人類(lèi)差別較大，要特別注意特殊性原則發(fā)熱、解熱和檢查致熱源實(shí)驗(yàn)-----適宜選用兔做實(shí)驗(yàn)；開(kāi)胸和心臟實(shí)驗(yàn)----適宜選用兔做實(shí)驗(yàn)；觀察藥物對(duì)排卵的影響，進(jìn)行避孕藥研究-----適宜選用兔、貓；動(dòng)脈粥樣硬化實(shí)驗(yàn)-----適宜選用兔、豬、猴；肝外科實(shí)驗(yàn)研究------適宜選用大鼠；膽囊功能研究------不能選用大鼠；充分利用不同品種品系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物存在的某些特殊反應(yīng)供研究用近交系小鼠

實(shí)

驗(yàn)

研

究

類(lèi)

別

動(dòng)

物

品

系心血管疾病DBA／2N自身免疫性疾病NZB／N、

腦積水 C57BL／KaLwN、D2／nSnN腎盂積水C57L／N、STR／N白內(nèi)障STAR／N牙周病DBA／2N(有抗力)、STR／N(易感)多尿癥STR／N、STR／1N白血病L615、L7212腭

裂A／HeN(自發(fā))、C57BL／6N(誘發(fā))放射線有抗力：C57BL／6N

敏感：BALB／cAnN，LACA．淀粉樣變A／HeN，NZW／N補(bǔ)體BALB／cAnN(活性高)．DBA／2N(活性低)標(biāo)準(zhǔn)化原則選擇與研究?jī)?nèi)容相匹配的標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，以保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性與可重復(fù)性。標(biāo)準(zhǔn)化動(dòng)物系指經(jīng)遺傳學(xué)、微生物學(xué)、環(huán)境及營(yíng)養(yǎng)控制而繁育的動(dòng)物。規(guī)格化原則年齡----年齡不同，其生物學(xué)特性往往不同，一般選性成熟后的青壯年動(dòng)物。太小的動(dòng)物的生理功能未達(dá)到成年水平。太老的動(dòng)物的各器官老化，代謝功能下降，只在老年醫(yī)學(xué)研究中使用；體重----在正常營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)和飼養(yǎng)條件下，體重與年齡有一定的相關(guān)性；性別----許多實(shí)驗(yàn)證明，同一品種（系）不同性別的動(dòng)物對(duì)外界刺激的反應(yīng)不一致。經(jīng)濟(jì)性原則無(wú)菌兔WhatistheAnimalModel?ananimalmodelinwhichnormativebiologyorbehaviorcanbestudied,orinwhichaspontaneousorinducedpathologicalprocesscanbeinvestigated,andinwhichthephenomenoninoneormorerespectsresemblesthesamephenomenoninhumansorotherspeciesofanimal.醫(yī)學(xué)研究中建立的具有人類(lèi)疾病模擬表現(xiàn)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)象和相關(guān)材料。ClassificationofAnimalModelsAccordingtocauseofthedevelopingSpontaneous(genetic)diseasemodels（自發(fā)）Induced(experimental)diseasemodels（誘發(fā)）Transgenicdiseasemodels（轉(zhuǎn)基因）Negativediseasemodels

（抗疾病）Spontaneous(genetic)DiseaseModels

Thesemodelsofhumandiseaseusenaturallyoccurringgeneticvariants(mutants).Manyhundredsofstrainsandstockswithinheriteddisordersmodelingsimilarconditionsinhumanshavebeencharacterizedandconserved.指實(shí)驗(yàn)動(dòng)物未經(jīng)任何人工處置，在自然條件下動(dòng)物自然發(fā)生、或由于基因突變的異常表現(xiàn)通過(guò)遺傳育種保留下來(lái)的動(dòng)物模型。血壓測(cè)定心電測(cè)定C3HMiceCoatColor:BlackAgoutiFeatures:TheC3Hiswidelyusedasamodelfordrugtreatmentsofneurologicdisorderswithapplicationsintoxicologyandoncology.Highincidencerateofbreastcancerinfemalemiceandlivercancerinmale.Non-ObeseDiabetic(NOD)MiceCoatColor:AlbinoFeatures:TheNODexhibitsdestructiveautoimmunepancreaticinsulitisasearlyasfourweeksofage.Insulin-dependentdiabetesisseeninfemalesbythreemonthsofage.SenescenceAcceleratedMouse

EachSAMPstrainshowsrelativelystrainspecificage-associatedpathologies.Thesecharacteristicpathologicalphenotypesaresimilartoage-associateddisordersoftenobservedinelderhumans.Theyincludesenileosteoporosis,osteoarthrosis,age-relateddeficitsinlearningandmemorywith/withoutforebrainatrophy,presbycusis,senileamyloidosis,age-relatedimpairmentoftheimmuneresponseandsoon.

SAMP8SAMR1MorisAssessmentofSpontaneousModelAdvantages

Spontaneouslydeveloping（自然發(fā)生）

Similartohumandiseases（與人類(lèi)疾病有較好的相似性）DisadvantageLimitedquantityanddifficulttoapply

（數(shù)量有限，應(yīng)用有難度）InducedDiseaseModelsAsthenameimplies,inducedmodelsarehealthyanimalsinwhichtheconditiontobeinvestigatedisexperimentallyinduced.以物理的、化學(xué)的或生物的致病因素作用于動(dòng)物，造成動(dòng)物組織、器官或全身一定的損害，出現(xiàn)某些類(lèi)似人類(lèi)疾病時(shí)的功能、代謝或形態(tài)結(jié)構(gòu)方面的改變，以供研究用。Methods原位誘發(fā)：指將致癌物直接與動(dòng)物靶組織或靶器官接觸而誘發(fā)該組織或器官發(fā)生腫瘤，接觸方法可通過(guò)涂抹、灌注、喂養(yǎng)或埋置等。異位誘發(fā)：將與致癌物接觸后的動(dòng)物組織或器官埋置于該動(dòng)物或另一正常動(dòng)物皮下而產(chǎn)生的該組織或器官的腫瘤。異位誘發(fā)腫瘤具有易于觀察和取材的優(yōu)點(diǎn)。誘癌物

放射線局部照射、化學(xué)致癌物（烷化劑、亞硝胺類(lèi)、芳香胺類(lèi)）、生物毒素（黃曲酶毒素）、細(xì)菌（幽門(mén)螺桿菌）等。

InducedTumorAnimalModelMethods實(shí)體瘤移植

腫瘤細(xì)胞皮下接種——7-10d處死荷瘤動(dòng)物——選擇生長(zhǎng)良好、無(wú)壞死液化的瘤組織——2-3mm3+生理鹽水或其它營(yíng)養(yǎng)液——無(wú)菌套管針抽吸——接種同種受體動(dòng)物右前腋窩皮下。腹水瘤移植

腫瘤細(xì)胞皮下接種——7-10d處死荷瘤動(dòng)物——取腹水——含葡萄糖平衡鹽水稀釋至適當(dāng)濃度——腹腔注射（腹水瘤）。TransplantTumorAnimalModelCardiovascularDiseasesAnimalModelAtherosclerosismodel：animalsfedbyhigh-fatandhighcholesteroldietornon-feedingmethodHypertensionmodel：kidneypacking、renalarterycoarctation、noisestimulusMyocardialischemiaandmyocardialinfarctionmodel：

electricstimulus、drugs、coronaryarteryblockageRespiratorySystemAnimalModelChronicbronchitisandpneumoniamodel：刺激性氣體刺激（二氧化硫、煙霧、甲醛蒸氣）Bronchialasthmamodel：

卵白蛋白激發(fā)：過(guò)敏原卵白蛋白注入豚鼠體內(nèi)，其可溶性抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生IgE抗體，使機(jī)體處于致敏狀態(tài)。當(dāng)豚鼠再次接觸此抗原時(shí)，IgE介導(dǎo)發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，使細(xì)胞脫顆粒，釋放出活性化學(xué)物質(zhì)如組胺、嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子等，作用于支氣管引起氣道高反應(yīng)致哮喘。

血小板活性因子(PAF)誘發(fā)：目前已知的唯一能引起氣道高反應(yīng)性炎癥介質(zhì)。DiabetesModel

注射致高血糖因子，如生長(zhǎng)激素、胰高糖素、糖皮質(zhì)激素以及兒茶酚胺類(lèi)激素等。注射化學(xué)物質(zhì)引起胰島β細(xì)胞的損傷，如鏈脲佐菌素(STZ)、四氧嘧啶可造成胰島β細(xì)胞不可逆損傷；環(huán)丙庚哌、天門(mén)冬素酶等可引起β細(xì)胞可逆性損傷。注射生物及生物制品引起β細(xì)胞破壞，如鼠腦炎、心肌炎病毒M型變異可誘發(fā)若干品系的成年小鼠糖尿病。手術(shù)切除胰腺的大部分或全部，并給予高糖飲食刺激，引起繼發(fā)性永久性糖尿病。AssessmentofInducedModelQuantityenough（數(shù)量足夠）Conditionaccord（條件一致）和自然產(chǎn)生的疾病模型在某些方面存在一定差異。ImmunodeficiencyAnimalModelAnimalsiscertainorsomeimmunodeficiencybecauseofspontaneousorartificialmethods.由于先天遺傳突變或用人工方法造成免疫系統(tǒng)某種或多種成分缺陷的動(dòng)物。ClassificationofImmunodeficiencyAnimal

CongenitalImmunodeficiencyanimal

（先天性）

T-lymphocytedeficiencyanimal：nudemice,nuderatsB-lymphocytedeficiencyanimal：CBA/NmiceNKcelldeficiencyanimal：Beigemice

Severecombinedimmunedeficiency：SCIDmiceAcquiredimmunodeficiencysyndrom（獲得性）

primate,miceandcatAIDSmodelHistoryofNudeMice1962年英國(guó)格拉斯哥醫(yī)院Grist在非近交系的小鼠中偶然發(fā)現(xiàn)有個(gè)別小鼠無(wú)毛。1966年證實(shí)是由于第11對(duì)染色體基因突變所致。1968年，Pantelouris解剖發(fā)現(xiàn)裸鼠失去了正常的胸腺。1969年Rygaard首先將人結(jié)腸腺癌移植裸小鼠獲得成功。

由于裸鼠原種抵抗力差，生育力低，壽命短，不能用于實(shí)際。和純系BALB/C，C3H，C57BL/6小鼠交配，不斷選育，獲得了三種近交系鼠（InbredNudeMice）新種。裸鼠自發(fā)現(xiàn)以來(lái)，廣泛應(yīng)用于腫瘤學(xué)、免疫學(xué)和病毒學(xué)等多個(gè)學(xué)科的研究。KMHairlessMiceA:Heterozygousmiceat10months.B,C:Homozygousmiceat10months.Themutantmouseiscoveredwithsparsehair,andcannotopenitseyesnormallyScd1ab-XymutationB-lymphocyteDeficiencyAnimalCBA/N

BcellfunctionislowSevereCombined

ImmuneDeficiencyAnimalSCIDmiceCoatColor:Albino

由于第16對(duì)染色體隱性基因突變，純合突變導(dǎo)致淋巴細(xì)胞抗原受體基因VDJ區(qū)域重排的重組酶活性異常，基因重排時(shí)斷裂無(wú)法正常連接，從而影響B(tài)、T細(xì)胞的正常功能分化。外觀體重與普通小鼠相同。對(duì)鼠肝炎，巴氏桿菌、卡氏肺囊蟲(chóng)極易感染，感染后易發(fā)病死亡。SPF環(huán)境沒(méi)有B、T陽(yáng)性標(biāo)志細(xì)胞，對(duì)外來(lái)抗原無(wú)細(xì)胞和體液免疫NK、LAK細(xì)胞功能正?；蛟龈?；FeatureofSCIDTheC.B-17-sciddoesexhibitextremelylowlevelsofIgin~20%ofthemiceat12weeksofage.TheincidenceofIgwillincreaseasthemiceage.Despitethis“l(fā)eakiness”（滲漏）C.B-17-scid'sdonotmountanantibodyresponsetochallengebyimmunogenicmaterial.

(部分小鼠出現(xiàn)低水平的功能性T和B細(xì)胞,血清中Ig含量明顯升高)。

SHO（SCIDHairlessOutbred）人們一直想讓SCID小鼠擁有裸鼠無(wú)毛的優(yōu)點(diǎn)CharlesRiverLab的研究人員自2007年開(kāi)始就著手培育無(wú)毛的SCID小鼠，他們通過(guò)Crl:HA-Prkdcscid和Crl:SKH1-Hrhr這兩個(gè)品系雜交，最終在2008年得到了兩條染色體上均帶有SCID基因的無(wú)毛封閉群小鼠模型SHO（SCIDHairlessOutbred）.2008年6月，實(shí)驗(yàn)人員通過(guò)對(duì)比的方法將人前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3分別接種到SCID和SHO身上，研究發(fā)現(xiàn)，SHO除去具有與SCID小鼠相同的腫瘤生長(zhǎng)特性之外，還摒除了Nu/Nu裸鼠接種PC-3時(shí)出現(xiàn)的皮膚潰瘍現(xiàn)象。Other

ImmuneDeficiencyAnimalNZBWF1

野生色WBB6F1—W/WV

（WB—W/+♀XC5TBL/6—WV/+）F1Anaemia,gastriculcer，bonemarrowfailuremodelWhite,blackeye動(dòng)物模型復(fù)制原則相似性可重復(fù)性可靠性適用性和可控性易行性和經(jīng)濟(jì)性疾病動(dòng)物模型的注意事項(xiàng)沒(méi)有一種動(dòng)物模型能完全復(fù)制人類(lèi)疾病，模型實(shí)驗(yàn)結(jié)論的正確性只是相對(duì)的，最終必須在人體身上得到驗(yàn)證。盡可能使模型動(dòng)物處于最小的變動(dòng)和最少的干擾之中；動(dòng)物進(jìn)化的高級(jí)程度并不意味著所有器官和功能接近于人的程度；不能盲目使用近交系動(dòng)物；查找文獻(xiàn)并咨詢動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所需動(dòng)物和條件是否可行，了解前人所積累的經(jīng)驗(yàn)，避免低水平的重復(fù)或缺乏科學(xué)依據(jù)的盲動(dòng)所造成人力物力的浪費(fèi)。影響動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的因素R=(A+B+C)×D+ER:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的總反應(yīng)A:動(dòng)物種間的共同反應(yīng)B:動(dòng)物品種，品系特有的反應(yīng)C:動(dòng)物的個(gè)體反應(yīng)D:環(huán)境因素（包括實(shí)驗(yàn)處理）E:實(shí)驗(yàn)誤差A(yù),B,C是由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本身的遺傳因素決定的，被選擇的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，在嚴(yán)格控制環(huán)境因素D或改變其中某一條件后就可能得到一個(gè)理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果R。動(dòng)物對(duì)實(shí)驗(yàn)處理的反應(yīng)可用以下公式表示：小鼠肝炎病毒感染裸鼠的肝臟病變wastesyndrome出現(xiàn)消耗性疾病，給腫瘤免疫學(xué)研究造成嚴(yán)重干擾仙臺(tái)病毒感染仙臺(tái)病毒感染肺病變對(duì)麻醉實(shí)驗(yàn)和吸入毒理學(xué)研究等產(chǎn)生嚴(yán)重干擾最適宜溫度20-24℃，溫差：3或4℃溫度不同種類(lèi)動(dòng)物“熱平衡”區(qū)的范圍不同。在熱平衡區(qū)，動(dòng)物呈基礎(chǔ)代謝率。如果環(huán)境溫度降至低于熱平衡區(qū)溫度的下限，動(dòng)物的代謝率將呈線性增長(zhǎng)。如果環(huán)境溫度高于熱平衡區(qū)溫度的上限，代謝率也將增長(zhǎng)，這不是防御機(jī)制，而是由于環(huán)境溫度導(dǎo)致體溫升高，升高的體溫提高了代謝率。因此，環(huán)境溫度高于熱平衡區(qū)比低于它使動(dòng)物的應(yīng)激反應(yīng)更強(qiáng)烈。

濕度Ringtail:

Lowenvironmentalhumidity,hightemperatures,anddraftspredisposeyoungratsandmicetodevelopannularconstrictionsofthetailandoccasionallyfeetordigits.Localizededemacanleadtodrygangreneandtissuesloughing.噪聲（Noise）噪音是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)的常見(jiàn)原因。引起動(dòng)物緊張，導(dǎo)致不安和騷動(dòng)。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)≤60dB超過(guò)100dB的噪聲，能夠引起某些品系的小鼠、大鼠和倉(cāng)鼠發(fā)生抽搐；能夠引起動(dòng)物心跳、呼吸次數(shù)增加，引起大鼠血液甘油三酯水平升高和血壓升高，而血糖降低；我們難以使房間內(nèi)籠具的環(huán)境條件完全相等，因此，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)在籠架中自由的分布，尤其對(duì)照組動(dòng)物和給藥組動(dòng)物在籠架的位置應(yīng)是自由分布的。此外，在塑料和金屬籠具中動(dòng)物的反應(yīng)也會(huì)不同?；\具（Cages）

籠具必須易于清洗和足夠堅(jiān)固。不透明籠具可能最適于動(dòng)物生長(zhǎng)，盡管這些籠具給實(shí)驗(yàn)觀察帶來(lái)不便，而且觀察在不透明籠具中的動(dòng)物可能會(huì)打擾它們。一個(gè)籠子中可以放多少只動(dòng)物？經(jīng)驗(yàn)告訴我們是每籠2-5只動(dòng)物變異最低，動(dòng)物單籠飼養(yǎng)變異高，當(dāng)每籠動(dòng)物數(shù)量超過(guò)5只時(shí)變異同樣迅速攀升。飼養(yǎng)密度——每籠動(dòng)物數(shù)（Numberofanimalspercage）飼養(yǎng)密度飼養(yǎng)密度身處狹小籠中，實(shí)驗(yàn)小鼠精神失常。英國(guó)和瑞士的研究人員曾安裝一臺(tái)24小時(shí)監(jiān)控的攝像機(jī)，記錄了實(shí)驗(yàn)小鼠的一舉一動(dòng)。老鼠們反復(fù)地做著同一動(dòng)作。其中有些老鼠沿著籠子的不銹鋼毫不費(fèi)力地爬到頂部，前腿掛在天花板上，嘴則咬住籠欄，而后又跳到籠子底部。而另一只老鼠則在不停地翻跟斗，每秒鐘一個(gè)，一口氣能翻40分鐘。它們每一個(gè)動(dòng)作的目的就是為了不停地重復(fù)整套動(dòng)作，而且做得那么認(rèn)真執(zhí)著，與精神病人的表現(xiàn)一模一樣，毫無(wú)二致。勢(shì)力范圍

Malemicewillfightwhenfirstco-mingledinacage,andtheyneedtobeobservedverycloselyduringthistimeofestablishingasocialdominancehierarchywithinthegroup.Weakandnon-aggressiveanimalsmightbeinjuredorkilledifnotremovedfromthecage.大多數(shù)動(dòng)物已經(jīng)形成了對(duì)人類(lèi)的不信任，傾向于逃離人類(lèi)。經(jīng)過(guò)小心的捉拿操作和逐漸的適應(yīng)，動(dòng)物能夠在某種程度上學(xué)會(huì)調(diào)整其逃走的本能。粗暴的捉拿操作和新的員工可再激活動(dòng)物逃跑的本能，并可能影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本技術(shù)主要內(nèi)容抓取與固定編號(hào)方法給藥方法采血方法麻醉方法處死方法職業(yè)安全無(wú)害化處理AnimalRestraintMouse-AvoidgraspingandpullingthetipofthetailRatTailshouldbeliftedonlyatthebaseandforshortperiod,tailskinmaytearRestrainerofMiceandRatGuineapigHoldwithtwohandsRabbitUsetwohandsforliftingandshouldnotberestrainedbytheearsRestrainerofRabbitDog性別鑒定Furcoloring-picricacid染色法：一般適用于短期實(shí)驗(yàn)，大小鼠常用。原則：動(dòng)物背部朝上頭頂1、右前肢2、右側(cè)腰部3、右后肢4、尾跟部5、左后肢6、左側(cè)腰部7、左前肢8、背部9、不標(biāo)號(hào)0或10

后面的數(shù)字永遠(yuǎn)大于前面的數(shù)字，如12、23、56、89、123、345等等；而沒(méi)有11、21、43、65等等。Earpunching152金屬耳號(hào)玻璃管動(dòng)物標(biāo)記(微芯片microchip)）1、可以標(biāo)記的動(dòng)物種類(lèi)多2、體內(nèi)標(biāo)簽，不易破壞3、使用壽命長(zhǎng)，達(dá)到20年,可循環(huán)使用4、準(zhǔn)確率高，讀錯(cuò)率為10萬(wàn)分之一5、可以準(zhǔn)確標(biāo)記每一個(gè)動(dòng)物動(dòng)物標(biāo)簽編碼規(guī)則3位國(guó)家代碼+3位地區(qū)代碼+12位動(dòng)物標(biāo)簽編碼如：國(guó)碼：720區(qū)域：899序號(hào)：2玻璃管動(dòng)物標(biāo)簽注射器注射（植入）標(biāo)簽前一定要保證消毒到位，以避免不必要的感染玻璃管動(dòng)物標(biāo)簽閱讀器注射（植入）標(biāo)簽時(shí)應(yīng)15-45度角注射，方便閱讀器以之發(fā)生電磁感應(yīng)，敏捷地讀出數(shù)據(jù)。玻璃管動(dòng)物標(biāo)簽閱讀器的最佳閱讀距離為7-12CM，不要太近或太遠(yuǎn)紋身皮下注射腹腔注射肌肉注射VeinInjectionofMouseVeinInjectionofRabbitVeinInjectionofDogGavagingMethodofMouseGavagingMethodofRabbitInjectionvolumeinmillilitersAnimalSCIMIVIPRat5-80.30.55-10Mouse2-30.20.052-3Hamster3-40.10.33-4G.P.5-100.50.55-8Rabbit30-500.5-11-550-100人與動(dòng)物的給藥量換算方法人與動(dòng)物對(duì)同一藥物的耐受性相差很大。一般情況下，動(dòng)物的耐受性比人大，也就是單位體重動(dòng)物的用藥量比人要大。一般可按下列比例換算：人用藥量為1；小鼠、大鼠為25-50；豚鼠、家兔為15-20；犬、貓為5-10。BleedingRequiringanesthesiaCardiacpunctureJugularveinPosteriorvenacavaLateralsaphenousvein(GP)NotrequiringanesthesiaOphthalmicvenousplexusTailveinEarveinCephalicvein(rabbit,dogs,cat)LateralsaphenousveinToe&tailclipingBleeding(cont.)Maximumamountofbloodthatcanbesafelyremovedforbloodcollection=1%ofbodyweight.Totalbloodvolumeisapproximately6%ofbodyweighte.g.5kgrabbitX1%=50mlbloodAnimalproduce0.75-1.0ml/kg/dayofblood5kgrabbit,1ml/kg=Xml/5kg,X=5ml/dayItwilltakes10daysfortheanimalstoreplacethe50mlthatwerewithdrawnOphthalmicvenousplexusCardiacpuncture實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的采尿方法代謝籠法：能將尿液和糞便分開(kāi)而達(dá)到收集動(dòng)物尿液目的的特殊裝置。適用于大、小鼠。導(dǎo)尿法：適用于雄性兔、犬等。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉動(dòng)物麻醉目的：消除動(dòng)物手術(shù)疼痛，便于實(shí)驗(yàn)操作，保證動(dòng)物安全，為手術(shù)創(chuàng)造良好的條件。麻醉的意義：第一是善待動(dòng)物，第二是提高動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的效率。全身麻醉：

局部麻醉：（普魯卡因、利多卡因等）揮發(fā)性麻醉劑：吸入給藥——乙醚、氯仿等非揮發(fā)性麻醉劑：靜脈、皮下、肌肉、腹腔給藥——氯胺酮、戊巴比妥鈉等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的安樂(lè)死(euthanasia)

指以人道的方法處死動(dòng)物的過(guò)程。處死過(guò)程中盡量減少其驚恐和焦慮，使其安靜地?zé)o痛苦的死亡。

安樂(lè)死必須符合的標(biāo)準(zhǔn)：1.死亡時(shí)盡可能減少驚恐、疼痛。2.使其在最短時(shí)間內(nèi)失去意識(shí)迅速死亡。3.方法可靠且可重復(fù)。4.對(duì)操作人員安全。5.采用的方法要與研究的要求和目的一致。6.對(duì)觀察者和操作者的情緒影響最小。7.對(duì)環(huán)境污染的影響最小。8.需要的機(jī)械設(shè)備簡(jiǎn)單，價(jià)廉，易操作。9.處死動(dòng)物的地點(diǎn)應(yīng)遠(yuǎn)離并與動(dòng)物房分開(kāi)。Euthanasia(cont.)-RodentsAcceptableInhalantanestheticoverdoseCOCO2BarbiturateoverdoseMicrowaveirraditationConditionallyacceptableN2(sedatedoranesthetized)ArgonCervicaldislocation(BW<200g)DecapitationEuthanasia(cont.)-UnacceptableHumaneconcernsDecompressionDrowningStrychnineForuseinconsciousanimalsExsanguinationRapidfreezingAirembolismSolemethodNicotineMagnesiumsulfatePotassiumchlorideAllcurariformagentsStunningHazardoustohumansChloroformCyanide常用脊椎動(dòng)物安樂(lè)死方法小于125g嚙齒動(dòng)物125g—1kg嚙齒動(dòng)物/兔1-5kg嚙齒動(dòng)物/兔狗貓非人靈長(zhǎng)類(lèi)反芻動(dòng)物、馬、豬二氧化碳OOONNNNXBarbiturate注射液，靜脈注射OOOOOOOBarbiturate注射液，腹腔注射OOONONO先麻醉，之后放血致死OOOOOOO先麻醉，之后靜脈注射KCl(2mmol/kg)OOOOOOO先麻醉，之后斷頭OOMNNNN先麻醉，之后頸椎脫臼OONNNNN動(dòng)物清醒中直接斷頭MMMNNNN動(dòng)物清醒中直接頸椎脫臼MNNNNNN電昏后放血致死NNNNNNO說(shuō)明：O:建議使用方法；N:不得使用方法；M:一般情況不推薦使用，除非實(shí)驗(yàn)需要。OccupationalHealthandSafetyProgramforPersonnelwithLaboratoryAnimalContactRiskAssessment:AllergiesBitesandScratchesSharpsinjuries(punctures,cuts,etc.)ChemicalExposureZoonoticDiseaseSHARPSIfneedlesareused,needlesarenottobepurposelybentorbrokenbyhand,removedfromdisposablesyringesorotherwisemanipulatedbyhand.Needlesshouldnotberecappedunlessabsolutelynecessary.Ifneedlesmustberecapped,asingle-handedtechniqueshouldbeused.SHARPSForsharpsthatposeadefinitepuncturepotential,anapprovedsharpscontainerisapunctureandleakresistantcontainer(i.e.,aredsharpscontainer).污物的無(wú)害化處理一次性口罩、帽子等使用后應(yīng)裝入專(zhuān)用垃圾袋回收焚燒處理。一次性使用的注射器、針頭、手套等物品使用后經(jīng)消毒劑浸泡清洗，毀形后按要求統(tǒng)一進(jìn)行無(wú)害化處理。絕不可自行處理和隨意扔掉。用過(guò)的廢墊料要裝入垃圾袋中或?qū)Ｓ玫膲|料容器內(nèi)，注意防蠅、防滲漏，并及時(shí)焚燒處理。進(jìn)行放射性實(shí)驗(yàn)所產(chǎn)生的廢棄物，如果屬于短半衰期且放射性較低的物品，放置6-10個(gè)半衰期后可以焚化處理。其他放射性廢棄物，應(yīng)進(jìn)行中、長(zhǎng)期安全包裝后送放射性廢物處理站處理。如何做好動(dòng)物實(shí)驗(yàn)？1、明確目的及必要性

首先要弄清其目的是什么,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也不例外。只有明確動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的目的,才能避免實(shí)驗(yàn)的盲目性,真正做到有的放矢,少走彎路,節(jié)約經(jīng)費(fèi)和時(shí)間,從而達(dá)到科學(xué)、節(jié)儉和高效。2、確認(rèn)必要性“3R”原則動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理和動(dòng)物福利3、作好實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)照原則

隨機(jī)化原則

重復(fù)原則均衡性原則如何做好動(dòng)物實(shí)驗(yàn)？4、選擇適宜的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳特性的選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物等級(jí)的選擇