細(xì)菌的培養(yǎng)法

本文格式為Word版，下載可任意編輯——細(xì)菌的培養(yǎng)法試驗(yàn)一細(xì)菌的培養(yǎng)法

一般細(xì)菌均可用人工方法進(jìn)行培養(yǎng)，使其生長(zhǎng)繁殖，以便進(jìn)一步觀測(cè)和研究它們的各種生物學(xué)特性。為了獲得良好的細(xì)菌培養(yǎng)物，在分開(kāi)培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，除采用適合的培養(yǎng)基并考慮到其他的培養(yǎng)條件（如溫度、濕度、酸堿度、氣體等）之外，把握各種分開(kāi)培養(yǎng)和接種的基本技術(shù)，也是重要環(huán)節(jié)。

在土壤、水、空氣、以及人和動(dòng)、植物體中，不同種類的細(xì)菌混雜地生活在一起。若要研究其中某種細(xì)菌，就必需先將各種細(xì)菌進(jìn)行分開(kāi)，以得到只含有這一種細(xì)菌的純培養(yǎng)。分開(kāi)培養(yǎng)細(xì)菌的方法有多種，平板劃線法即是其中之一。該法主要是借劃線而將混雜的細(xì)菌在瓊脂平板表面分散開(kāi)，使單個(gè)細(xì)菌能固定在某一點(diǎn)，生長(zhǎng)繁殖后形成單個(gè)的細(xì)菌集團(tuán)（即菌落）以達(dá)到分開(kāi)純種的目的。

當(dāng)細(xì)菌分開(kāi)成純種后，常需要接種到有關(guān)的培養(yǎng)基中，以測(cè)試其各種生物學(xué)性狀。一般可用斜面、液體和半固體培養(yǎng)基來(lái)檢驗(yàn)細(xì)菌的培養(yǎng)特征，因此接種方法可相應(yīng)的分為三種。

斜面培養(yǎng)基接種法常用于細(xì)菌的大量繁殖，保存菌種，或觀測(cè)其某些生化特性。瓊脂斜面、尿素培養(yǎng)基、雙糖鐵培養(yǎng)基、檸檬酸鹽培養(yǎng)基等具有斜面外形的固體培養(yǎng)基均可用此法接種。

液體培養(yǎng)基接種法可用于觀測(cè)細(xì)菌不同的生長(zhǎng)狀況，有的呈均勻混濁，有的呈沉淀生長(zhǎng)，還有的在液體表面形成菌膜；另外還可以供測(cè)定細(xì)菌生化特性之用。凡是肉湯、葡萄糖蛋白胨水以及各種單糖發(fā)酵管等液體培養(yǎng)基均用此法接種。

穿刺接種法常用于半固體瓊脂培養(yǎng)基、醋酸鉛培養(yǎng)基、雙糖鐵培養(yǎng)基等的接種，前者用于測(cè)定細(xì)菌的動(dòng)力，后二者則用于觀測(cè)細(xì)菌的生化反應(yīng)。

目的要求

1．學(xué)習(xí)和把握細(xì)菌分開(kāi)和培養(yǎng)的各種基本技術(shù)。2．進(jìn)一步熟悉和把握微生物的無(wú)菌操作技術(shù)。材料

1．菌種和培養(yǎng)基

菌種

平板劃線接種法葡萄球菌和大腸桿菌的混合菌液

培養(yǎng)基*

普通瓊脂平板

瓊脂斜面培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)基接種法大腸桿菌培養(yǎng)物

液體培養(yǎng)基接種法大腸桿菌培養(yǎng)物枯草桿菌培養(yǎng)物普通肉湯培養(yǎng)基

穿刺接種法變形桿菌培養(yǎng)物痢疾桿菌培養(yǎng)物半固體瓊脂培養(yǎng)基

*各培養(yǎng)基的組成及配置方法參見(jiàn)書(shū)后附錄。2．接種環(huán)、接種針、酒精燈、記號(hào)筆、試管架等方法

1．平板劃線接種法

（1）標(biāo)記在培養(yǎng)皿底玻璃上，用記號(hào)筆注明接種的菌名、接種者姓名、班級(jí)、日期等。

（2）滅菌接種環(huán)點(diǎn)燃酒精燈，右手以持筆式握持接種環(huán)并放置火焰中燒灼滅菌，如

圖1-1，先將接種環(huán)的接種絲部分置于火焰中，待金屬絲燒紅并曼延至金屬環(huán)端，再直接燒灼金屬環(huán)直至燒紅，然后由金屬環(huán)至金屬桿方向快速通過(guò)火焰，隨后再反方向通過(guò)火焰，如此2～3次。

圖1-1接種環(huán)的滅菌操作

然后將接種環(huán)移開(kāi)火焰，待其冷卻。注意，接種環(huán)不能距離火焰過(guò)遠(yuǎn)，一般應(yīng)在距火焰10cm范圍之內(nèi)（視此范圍為無(wú)菌環(huán)境）；滅菌后的接種環(huán)不能再碰及他物。（3）取菌種

左手持裝有葡萄球菌和大腸桿菌混合菌液的試管，用持有接種環(huán)的右手手掌及小指拔取試管棉塞，將試管管口迅速通過(guò)火焰2～3次進(jìn)行滅菌。

將已滅菌且已冷卻的接種環(huán)伸入菌種管中，取一接種環(huán)的混合菌液，然后退出菌種管。將菌種管管口再次通過(guò)火焰2～3次滅菌，塞好棉塞，放至原來(lái)的位置。（4）分開(kāi)劃線接種細(xì)菌（見(jiàn)圖3-1）

左手持瓊脂平板培養(yǎng)基（將皿蓋反放在桌上酒精燈附近），盡量使之直立以免空氣中的細(xì)菌落入其中，并靠近火焰。右手持接種環(huán)在瓊脂平板上端來(lái)回劃線，涂成一細(xì)菌薄膜（約占平板面的1/10），視為一區(qū)。劃線時(shí)使接種環(huán)與平板面成30～40度角，以腕力在平板表面行輕而快地來(lái)回滑動(dòng)動(dòng)作。切記，接種環(huán)不應(yīng)嵌進(jìn)培養(yǎng)基內(nèi)，避免將瓊脂表面戳破。

旋轉(zhuǎn)瓊脂平板90度。燒灼接種環(huán)，以殺滅環(huán)上的殘留細(xì)菌，將接種環(huán)觸及培養(yǎng)基表面以使其冷卻。滅菌接種環(huán)通過(guò)薄膜處作連續(xù)平行劃線（約占平板1/5），此為二區(qū)。注意接種環(huán)只通過(guò)薄膜1～2次，以獲取薄膜處少量的細(xì)菌。

旋轉(zhuǎn)瓊脂平板90度。燒灼接種環(huán)滅菌并使之冷卻。將滅菌接種環(huán)接二區(qū)連續(xù)平行劃線（約占平板1/4），此為三區(qū)。接種環(huán)只通過(guò)二區(qū)1～2次以獲得少量細(xì)菌。旋轉(zhuǎn)瓊脂平板90度。接種環(huán)不必再滅菌，接三區(qū)連續(xù)平行劃線，劃滿平板其余部分，此為四區(qū)。

注意各區(qū)接種線間盡量互不交接，以達(dá)到細(xì)菌逐漸稀釋的目的。

（5）劃線完畢，將瓊脂平板放進(jìn)皿蓋，將培養(yǎng)皿倒放（這樣可避免培養(yǎng)過(guò)程中凝結(jié)水自皿蓋滴下，沖散菌落），送進(jìn)37℃溫箱培養(yǎng)。

（6）培養(yǎng)18～24小時(shí)后將培養(yǎng)皿取出。觀測(cè)瓊脂平板表面生長(zhǎng)的各種菌落，注意其

大小、形狀、邊緣、表面結(jié)構(gòu)、透明度、顏色等性狀。

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圖1-2四區(qū)劃線接種法

2．斜面培養(yǎng)基接種法

（1）用記號(hào)筆在待接種的培養(yǎng)管上寫(xiě)明標(biāo)記。（2）點(diǎn)燃酒精燈。

（3）左手拇指、食指、中指及無(wú)名指分別握持菌種與待接種的培養(yǎng)基管，使菌種管位于左側(cè)，斜面部均應(yīng)向上，勿成水平，以免凝結(jié)水浸潤(rùn)培養(yǎng)基表面，甚至沾濕棉塞。（4）以右手拇指和食指捏持轉(zhuǎn)動(dòng)兩管棉塞，以便在接種時(shí)易于拔取。（5）右手持接種環(huán)，在火焰上燒灼滅菌。

（6）以右手手掌及小指，小指及無(wú)名指分別拔取并夾持兩管棉塞，將兩管管口滅菌。（7）將已滅菌且已冷卻的接種環(huán)伸入菌種管內(nèi)，從斜面上輕輕挑取少量菌苔退出菌種管（注意，一要防止取菌過(guò)多；二要防止弄破培養(yǎng)基表面）。再伸進(jìn)待接種的培養(yǎng)基管，如圖3-2進(jìn)行斜面培養(yǎng)基接種，從斜面底部輕輕向頂端彎曲劃線，不要觸破培養(yǎng)基表面。沾有細(xì)菌的接種環(huán)進(jìn)出試管時(shí)不應(yīng)觸及到試管內(nèi)壁和試管口。

（8）接種完畢，滅菌兩試管的管口，塞好棉塞，并放至原來(lái)的位置上。重新燒灼接種

環(huán)，滅菌后放回試管架上。接種好的試管放37℃溫箱培養(yǎng)，18～24小時(shí)后觀測(cè)生長(zhǎng)狀況。

圖1-3斜面培養(yǎng)基接種法

3．液體培養(yǎng)基接種法

（1）用記號(hào)筆在待接種培養(yǎng)基上寫(xiě)明標(biāo)記。

（2）如斜面培養(yǎng)基的接種方法一樣，握持菌種管及待接種的肉湯管。

（3）接種環(huán)滅菌冷卻后，伸入菌種管取少量細(xì)菌再伸入肉湯管內(nèi)，在接近液面管壁處輕輕研磨，蘸取少量肉湯調(diào)和，使菌混于肉湯中（見(jiàn)圖3-3）。塞好試管棉塞后，搖動(dòng)液體，使細(xì)菌在液體中均勻分布。

（4）接種完畢，將接種環(huán)滅菌后放回試管架上。肉湯管放37℃溫箱培養(yǎng)，18～24小時(shí)后觀測(cè)生長(zhǎng)狀況。

圖1-4液體培養(yǎng)基接種法

4．穿刺接種法

（1）用記號(hào)筆在待接種培養(yǎng)基上寫(xiě)明標(biāo)記。

（2）如斜面培養(yǎng)基接種法，握持菌種管及待接種的半固體瓊脂培養(yǎng)基。

（3）右手持接種針，滅菌冷卻后，以針挑取菌苔，如圖3-4垂直刺入半固體瓊脂培養(yǎng)基的中心，刺達(dá)近管底部，但不必及于管底，然后循原路退出。

（4）接種完畢，接種針重行滅菌后放至試管架上，塞好棉塞，37℃培養(yǎng)18～24小時(shí)后取出觀測(cè)細(xì)菌的生長(zhǎng)狀況。

圖1-5穿刺接種法

試驗(yàn)二細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)

各種細(xì)菌在一定環(huán)境條件下，有相對(duì)恒定的形態(tài)與結(jié)構(gòu)。了解細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)是鑒別細(xì)菌的重要方法之一。此外，對(duì)分析細(xì)菌的致病性和免疫發(fā)生的機(jī)理等方面，也有一定的意義。

目的要求觀測(cè)細(xì)菌的基本形態(tài)和一些細(xì)菌的特別結(jié)構(gòu)。

一、細(xì)菌的基本形態(tài)

細(xì)菌在適合的生長(zhǎng)繁殖條件下所顯示的形態(tài)可分為三大類：球菌、桿菌和螺形菌。不同的細(xì)菌又可表現(xiàn)出不同的排列方式，在細(xì)菌的鑒別上有一定的參考價(jià)值。材料

1．球菌示教片葡萄球菌、鏈球菌和肺炎鏈球菌2．桿菌示教片大腸桿菌和炭疽桿菌3．螺形菌示教片霍亂弧菌方法

1．使用顯微鏡的油鏡觀測(cè)球菌、桿菌和螺形菌的示教片。

2．注意各菌的形狀、大小