實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備的使用和維護(hù)課件

實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備的使用和維護(hù)衛(wèi)生部腸道病原微生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室江蘇省疾病預(yù)防控制中心

210009唐

震

2010-07-28Telmail：njtangz@163.com工欲善其事必先利其器常用儀器設(shè)備試劑準(zhǔn)備區(qū)擴(kuò)增區(qū)產(chǎn)物檢測(cè)區(qū)標(biāo)本制備區(qū)ThemeGalleryisaDesignDigitalContent加樣器潔凈工作臺(tái)高速冷凍離心機(jī)漩渦振蕩混旋器全自動(dòng)樣本處理系統(tǒng)PCR儀Luminex系統(tǒng)加樣器電泳儀凝膠成像系統(tǒng)毛細(xì)管電泳&Contents擴(kuò)增m產(chǎn)a物llde檢ve測(cè)lop區(qū)edbyGuild區(qū)DesignInc.加樣器基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室應(yīng)備有4套連續(xù)可調(diào)加樣器，分別用于試劑準(zhǔn)備、樣本處理、擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測(cè)四個(gè)試驗(yàn)區(qū)。加樣器加樣器的類型P型移液器的型號(hào)和取液范圍加樣器的使用P型移液器的應(yīng)用范圍加樣器的校準(zhǔn)加樣器的類型單道連續(xù)可調(diào)式移液器多通道連續(xù)可調(diào)式移液器單道連續(xù)移液器單道移液管配合使用的移液器P型移液器的型號(hào)和取液范圍型號(hào)所用量程范圍（μL）GILSON0.1

2eppendorfP2P10P200.5

102

200.5

102

20P100

20

100P200

30

20010

10020

200P1000

200

1000

100

1000加樣器的使用加樣器的使用1、前進(jìn)式2、后退式吸液的位置把按鈕壓至第一停點(diǎn)垂直握持移液器，使吸嘴浸入液樣中，浸入液體深度視型號(hào)而定：P2和P10≤1mmP20和P100

2-3mmP200和P1000

2-4mmP50003-6mm5-7mmP10ML設(shè)定容量值P型移液器的應(yīng)用范圍P2，P10:

超微量計(jì)量及移液，應(yīng)用于DNA定序及酶分析等。P20，P100，P200和P1000:

應(yīng)用于一般水溶液、酸、堿的計(jì)量和移液。P5000和P10ML:

大體積移液和計(jì)量。加樣器的校準(zhǔn)校準(zhǔn)方式計(jì)量局廠家自較時(shí)間視使用頻率定（6個(gè)月-1年）加樣器-注意事項(xiàng)根據(jù)所需取液量選擇相應(yīng)的移液器及吸頭，基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)要求使用帶濾芯的吸頭，防止交叉污染。加樣器-注意事項(xiàng)吸取液體時(shí)應(yīng)緩慢勻速吸取，避免液體濺到移液器頭上；打出液體后拇指不應(yīng)松開(kāi)按鈕，將吸液嘴壓掉后再將拇指松開(kāi)，避免液體回吸。在調(diào)整取液量的旋鈕時(shí)，不要用力過(guò)猛，并應(yīng)注意計(jì)數(shù)器顯示的數(shù)值不要超過(guò)其可調(diào)范圍。連續(xù)可調(diào)式移液器不可在無(wú)吸頭時(shí)使用，吸頭有液體時(shí)不可平放或倒置。注意事項(xiàng)操作時(shí)要慢和穩(wěn)，吸嘴浸入液體深度要合適，吸液過(guò)程盡量保持不變；改吸不同液體、樣品或試劑前要換新吸嘴；發(fā)現(xiàn)吸嘴內(nèi)有殘液時(shí)必須更換；新吸嘴使用前應(yīng)先預(yù)測(cè)。為防止液體進(jìn)入移液器套筒內(nèi)，注意以下幾點(diǎn)：壓放按鈕時(shí)保持平穩(wěn)；移液器不得倒轉(zhuǎn)；吸嘴中有液體時(shí)不可將移液器平放；P5000及P10ML移液器一定要加過(guò)濾芯。切勿用油脂等潤(rùn)滑活塞或密封圈。使用了酸或有腐蝕蒸氣的溶液后，最好拆下套筒，用蒸餾水清洗活塞及密封圈。注意事項(xiàng)連續(xù)可調(diào)式移液器在取樣加樣過(guò)程中應(yīng)注意移液嘴不能觸及其他物品，以免被污染；移液嘴盒（架子）、廢液瓶、所取試劑及加樣的樣品管應(yīng)擺放合理，以方便操作過(guò)程、避免污染為原則。連續(xù)可調(diào)式移液器在使用完畢后應(yīng)置于以液器架上，遠(yuǎn)離潮濕及腐蝕性物質(zhì)。在取液之前，所取液體應(yīng)在室溫（15-25C）平衡；液體溫度與室溫有異時(shí)，將吸嘴預(yù)洗多次再用；移液溫度不得超過(guò)70℃。加樣器-維護(hù)加樣器應(yīng)根據(jù)使用頻率進(jìn)行維護(hù)，但至少應(yīng)每3個(gè)月進(jìn)行一次，具體方法如下：1．一般維護(hù)可用中性洗滌劑（如洗餐具用的洗滌靈）清潔，或者用60%的異丙醇，然后用蒸餾水反復(fù)洗滌，去除洗滌劑或異丙醇，請(qǐng)晾干加。清強(qiáng)潔后與活供塞處應(yīng)可使商用一聯(lián)定量系的潤(rùn)?。?！滑劑。2．如果有液體進(jìn)入加樣器內(nèi)的嚴(yán)重污染，可以將加樣器拆開(kāi)后進(jìn)行清潔，具體拆開(kāi)步驟參照加樣器說(shuō)明書（不同的加樣器的拆開(kāi)方式有所不同）。3．高壓消毒，有的加樣器的吸管部分可高壓消毒（121℃及1巴壓力下消毒20分鐘），如Eppendor的Research單道可調(diào)加樣器。但消毒時(shí)不可超溫超時(shí)，也不能擠壓放置，以免造成變型。4．各區(qū)（試劑準(zhǔn)備、樣本提取、擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測(cè)）的加樣器應(yīng)有各自的標(biāo)識(shí)，清潔和消毒時(shí)，應(yīng)分別處理。常用儀器設(shè)備試劑準(zhǔn)備區(qū)擴(kuò)增區(qū)產(chǎn)物檢測(cè)區(qū)標(biāo)本制備區(qū)ThemeGalleryisaDesignDigitalContent加樣器潔凈工作臺(tái)高速冷凍離心機(jī)漩渦振蕩混旋器全自動(dòng)樣本處理系統(tǒng)PCR儀Luminex系統(tǒng)加樣器電泳儀凝膠成像系統(tǒng)毛細(xì)管電泳&Contents擴(kuò)增m產(chǎn)a物llde檢ve測(cè)lop區(qū)edbyGuild區(qū)DesignInc.標(biāo)本制備區(qū)（一）高速（冷凍）離心機(jī)電機(jī)轉(zhuǎn)速

最低轉(zhuǎn)速

最高轉(zhuǎn)速轉(zhuǎn)頭消毒方式標(biāo)準(zhǔn)配件系統(tǒng)噪音高速（冷凍）離心機(jī)-使用方法離心機(jī)應(yīng)放置在水平堅(jiān)固的地板或平臺(tái)上，并力求使機(jī)器處于水平位置以免離心時(shí)造成機(jī)器震動(dòng)。打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，按要求裝上所需的轉(zhuǎn)頭，將預(yù)先平衡好的樣品放置于轉(zhuǎn)頭樣品架上（離心筒須與樣品同時(shí)平衡），關(guān)閉機(jī)蓋。按功能選擇鍵，設(shè)置各項(xiàng)要求：溫度、速度、時(shí)間、加速度及減速度，帶電腦控制的機(jī)器還需按儲(chǔ)存鍵，以便記憶輸入的各項(xiàng)信息。待離心機(jī)完全停止轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)打開(kāi)機(jī)蓋，取出離心樣品，用柔軟干凈的布擦凈轉(zhuǎn)頭和機(jī)腔內(nèi)壁，待離心機(jī)腔內(nèi)溫度與室溫平衡后方可蓋上機(jī)蓋。高速（冷凍）離心機(jī)-使用方法機(jī)體應(yīng)始終處于水平位置，外接電源系統(tǒng)的電壓要匹配，并要求有良好的接地線。開(kāi)機(jī)前應(yīng)檢查轉(zhuǎn)頭按裝是否牢固，機(jī)腔有無(wú)異物掉入。離心機(jī)運(yùn)行時(shí)，離心機(jī)周圍30cm范圍內(nèi)不能有人和危險(xiǎn)物品。揮發(fā)性或腐蝕性液體離心時(shí)，應(yīng)使用帶蓋的離心管，并確保液體不外漏以免腐蝕機(jī)腔或造成事故。高速（冷凍）離心機(jī)-使用方法易燃易爆以及易與其他物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)不能離心。在沒(méi)有相應(yīng)的防護(hù)措施時(shí)，不能離心有毒的、放射性的物質(zhì)或病原微生物。離心機(jī)運(yùn)行時(shí)不可人為地打開(kāi)蓋子。如果轉(zhuǎn)頭和蓋子有可見(jiàn)的腐蝕或磨損的痕跡，則應(yīng)立即停止使用。使用的玻璃或塑料離心管應(yīng)能承受相應(yīng)的離心力并大小合適。非金屬轉(zhuǎn)頭不可用紫外照射。高速（冷凍）離心機(jī)-維護(hù)和保養(yǎng)轉(zhuǎn)頭應(yīng)定期清洗和消毒。擦拭離心機(jī)腔時(shí)動(dòng)作要輕，以免損壞機(jī)腔內(nèi)溫度感應(yīng)器。使用消毒液處理時(shí)，溫度不可超過(guò)25℃，時(shí)間不可超過(guò)規(guī)定時(shí)間?？梢杂酶邏合镜霓D(zhuǎn)頭，應(yīng)在清洗后，121℃消毒20分鐘，轉(zhuǎn)頭務(wù)必平放，并不受擠壓，以免變形。每次操作完畢；應(yīng)作好使用情況記錄，并定期對(duì)機(jī)器各項(xiàng)性能進(jìn)行檢修。離心過(guò)程中若發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象，應(yīng)立即關(guān)閉電源，報(bào)請(qǐng)有關(guān)技術(shù)人員檢修。（二）全自動(dòng)樣本處理系統(tǒng)全自動(dòng)樣本處理系統(tǒng)全自動(dòng)樣本處理系統(tǒng)全自動(dòng)樣本處理系統(tǒng)清潔和維護(hù)（日常）?

1、每周都用不掉毛的布蘸上去離子水擦拭儀器的表面（包括恒溫箱周圍區(qū)域和清洗區(qū)）。如果發(fā)生了試劑潑灑，用70%的乙醇清洗。在清潔儀器前要關(guān)閉電源，拔下電源插頭。?

2、分析儀的可移動(dòng)內(nèi)部部件如試劑載盤，樣本載盤等要用不掉毛的布并蘸上70%的乙醇來(lái)清洗。?

3、要定期檢查儀器的周圍，以確保良好的通風(fēng)環(huán)境，書本，紙張或其它物品有沒(méi)有干擾儀器的通風(fēng)。?

4、如果樣本或其它有生物危害的物質(zhì)潑灑到儀器或任何系統(tǒng)載盤上，首先用10%（v/v）的漂白粉溶液（0.5%次氯酸鈉）擦拭，然后用70%的乙醇徹底擦洗改區(qū)域或載盤。全自動(dòng)樣本處理系統(tǒng)清潔和維護(hù)（定期）?

加強(qiáng)與供應(yīng)商的聯(lián)系，定期做維護(hù)保養(yǎng)工作。常用儀器設(shè)備試劑準(zhǔn)備區(qū)擴(kuò)增區(qū)產(chǎn)物檢測(cè)區(qū)標(biāo)本制備區(qū)ThemeGalleryisaDesignDigitalContent加樣器潔凈工作臺(tái)高速冷凍離心機(jī)漩渦振蕩混旋器全自動(dòng)樣本處理系統(tǒng)PCR儀Luminex系統(tǒng)加樣器電泳儀凝膠成像系統(tǒng)毛細(xì)管電泳&Contents擴(kuò)增m產(chǎn)a物llde檢ve測(cè)lop區(qū)edbyGuild區(qū)DesignInc.擴(kuò)增區(qū)（基于PCR擴(kuò)增的儀器）普通PCR儀實(shí)時(shí)熒光PCR儀Luminex分析系統(tǒng)實(shí)時(shí)PCR儀的發(fā)展歷史1993年第一篇文章發(fā)表1996年羅氏的LightCycler注冊(cè)1997年ABIPrism7700，第一個(gè)高通量的實(shí)時(shí)熒光PCR儀1999年Bio-RadiCycler2000年更多質(zhì)優(yōu)價(jià)廉的儀器進(jìn)入市場(chǎng)。PCR擴(kuò)增儀的原理及發(fā)展?fàn)顩r（1）梯度水浴法變性:

退火:

延伸:如94C

如55C

如72C（2）空氣驅(qū)動(dòng)循環(huán)恒溫裝置本系統(tǒng)力求降低部件的成本，用空氣作為熱傳導(dǎo)媒介。裝置包括機(jī)箱（外殼）、熱源、冷空氣源、控制器和輔助電器元件等部分。優(yōu)點(diǎn)：不用金屬的精密加工，成本降低。整個(gè)系統(tǒng)沒(méi)有液體流動(dòng)，不用致冷液，因而安全程度高。恒溫精度可達(dá)1℃

。缺點(diǎn)：?jiǎn)渭兛客獠靠諝庵评?，受環(huán)境溫度影響。（3）變溫金屬塊作恒溫裝置加熱方式有電熱發(fā)熱、半導(dǎo)體發(fā)熱，制冷方式有半導(dǎo)體制冷和壓縮機(jī)制冷等多種方式。國(guó)外產(chǎn)品的特點(diǎn)是產(chǎn)品質(zhì)量和性能較穩(wěn)定。機(jī)型：適用，建議

8*12孔的模式。PCR儀-檢測(cè)原理（Taqman探針）PCR

擴(kuò)增時(shí)，在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針。該探針為一直線型的寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)熒光報(bào)告基團(tuán)和一個(gè)熒光淬滅基團(tuán)，探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收，

PCR

儀檢測(cè)不到熒光信號(hào)；

PCR

擴(kuò)增時(shí)（在延伸階段），

Taq

酶的

5'

－

3'

外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條

DNA

鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與

PCR

產(chǎn)物形成完全同步。PCR儀-檢測(cè)原理（Taqman探針）PCR儀-檢測(cè)原理其它熒光探針?lè)肿有艠?biāo)水解探針。。。。。。PCR儀-使用PCR儀應(yīng)放在臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的第三區(qū)。儀器應(yīng)放置水平臺(tái)上，電源電壓需與儀器要求電壓相一致，并連接可靠的地線。儀器遠(yuǎn)離水源，明火及腐蝕性物質(zhì)。工作室溫要求：15-25℃接穩(wěn)壓電源。尤其是半導(dǎo)體升溫降溫的設(shè)備。每次實(shí)驗(yàn)時(shí)，最好能將擴(kuò)增儀內(nèi)的孔位全部放置樣品管，若樣品管少時(shí)可用空管代替，以保證實(shí)驗(yàn)的一致性和重復(fù)性。PCR儀-清潔與維護(hù)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)及時(shí)擦干孔內(nèi)的水分，蓋上機(jī)蓋。應(yīng)定期校準(zhǔn)（增強(qiáng)與供應(yīng)商之間的聯(lián)系）擴(kuò)增溫度光路定期清潔熱蓋和反應(yīng)孔95%乙醇常見(jiàn)的擴(kuò)增（檢測(cè)）系統(tǒng)介紹光源：鹵素?zé)魴z測(cè)：四色熒光（）可以檢測(cè)：，樣本量：常見(jiàn)的擴(kuò)增（檢測(cè)）系統(tǒng)介紹ROTORGene3000光源：發(fā)光二極管（LED）檢測(cè)：光電倍增管-四色熒光（PMT）可以檢測(cè)：SYBR-Green，F(xiàn)AM,HEX,TET,TANRAVIC樣本量：36/72常見(jiàn)的擴(kuò)增（檢測(cè)）系統(tǒng)介紹MJOption2光源：發(fā)光二極管（LED）檢測(cè)：2（523-543nm，540-570nm，PMT）可以檢測(cè)：SYBR-Green，F(xiàn)AM,HEX,TET,TANRAVIC樣本量：96常見(jiàn)的擴(kuò)增（檢測(cè)）系統(tǒng)介紹ROCHELightCycler光源：發(fā)光二極管（LED）檢測(cè)：6（熒光計(jì)）可以檢測(cè)：SYBR-Green，F(xiàn)AM,HEX,VIC，LightCycler紅色染料樣本量：32PCR儀-使用注意事項(xiàng)影響測(cè)定結(jié)果的因素光路維護(hù)加樣的準(zhǔn)確性和反應(yīng)體系的均一性反應(yīng)管中是否有氣泡反應(yīng)管不符合熒光檢測(cè)要求或疏水性差反應(yīng)管或反應(yīng)槽被熒光物質(zhì)污染需強(qiáng)調(diào)的是：加強(qiáng)與供應(yīng)商之間的聯(lián)系Luminex系統(tǒng)Luminex是多功能的液相芯片分析平臺(tái)，適用于免疫分析、核酸研究、酶學(xué)分析、受體和配體識(shí)別分析等研究。有色微球激光技術(shù)應(yīng)用流體學(xué)高速數(shù)字信號(hào)處理器Luminex系統(tǒng)優(yōu)點(diǎn)1、多元分析，可節(jié)約試劑、時(shí)間和精力；2、操作簡(jiǎn)單，減少實(shí)驗(yàn)誤差，具有更好的穩(wěn)定性、更好的重復(fù)性與更小的批間差；3、對(duì)樣本量的要求少，非常適合分析稀有樣本；4、開(kāi)放性的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，同一個(gè)儀器可以用于免疫分析、核酸研究、酶學(xué)分析、受體和配體識(shí)別分析等多種研究工作，增加實(shí)驗(yàn)的靈活性；5、液相反應(yīng)體系，更快地達(dá)到平衡點(diǎn)，縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間。常用儀器設(shè)備試劑準(zhǔn)備區(qū)擴(kuò)增區(qū)產(chǎn)物檢測(cè)區(qū)標(biāo)本制備區(qū)ThemeGalleryisaDesignDigitalContent加樣器潔凈工作臺(tái)高速冷凍離心機(jī)漩渦振蕩混旋器全自動(dòng)樣本處理系統(tǒng)PCR儀Luminex系統(tǒng)加樣器電泳儀凝膠成像系統(tǒng)毛細(xì)管電泳&Contents擴(kuò)增m產(chǎn)a物llde檢ve測(cè)lop區(qū)edbyGuild區(qū)DesignInc.常規(guī)電泳系統(tǒng)電泳儀將電泳槽兩個(gè)電極與電泳儀的直流輸出端聯(lián)接，注意極性不要接反；接通電源，緩緩旋轉(zhuǎn)電壓調(diào)節(jié)鈕直到達(dá)到的所需電壓為止，設(shè)定終止時(shí)間，此時(shí)電泳即開(kāi)始進(jìn)行。完畢后，應(yīng)將各旋鈕、開(kāi)關(guān)旋至零位或關(guān)閉狀態(tài)，并撥出電泳插頭；瓊脂糖凝膠電泳-注意事項(xiàng)緩沖系統(tǒng)：在沒(méi)有離子存在時(shí)，電導(dǎo)率最小，DNA不遷移，或遷移極慢，在高離子強(qiáng)度的緩沖液中，電導(dǎo)很高并產(chǎn)熱，可能導(dǎo)致DNA變性，因此應(yīng)注意緩沖液的使用是否正確。長(zhǎng)時(shí)間高壓電泳時(shí)，常更新緩沖液或在兩槽間進(jìn)行緩沖液的循環(huán)是可取的。不同廠家、不同批號(hào)的瓊脂糖，其雜質(zhì)含量不同，影響DNA的遷移及熒光背景的強(qiáng)度，應(yīng)有選擇地使用。凝膠的制備：凝膠中所加緩沖液應(yīng)與電泳槽中的相一致，溶解的凝膠應(yīng)及時(shí)倒入板中，避免倒入前凝固結(jié)塊。倒入板中的凝膠應(yīng)避免出現(xiàn)氣泡，影響電泳結(jié)果。樣品加入量：一般情況下，0.5cm寬的梳子可加0.5ug的DNA量，加樣量的多少依據(jù)加樣孔的大小及DNA中片段的數(shù)量和大小而定，過(guò)多的量會(huì)造成加樣孔超載，從而導(dǎo)致拖尾和彌散，對(duì)于較大的DNA此現(xiàn)象更明顯。瓊脂糖凝膠電泳-注意事項(xiàng)電泳系統(tǒng)的變化會(huì)影響DNA的遷移，加入DNA標(biāo)準(zhǔn)參照物進(jìn)行判定是必要的。DNA樣品中鹽濃度會(huì)影響DNA的遷移率，平行對(duì)照樣品應(yīng)使用同樣的緩沖條件以消除這種影響。DNA遷移率取決于瓊脂糖凝膠的濃度，遷移分子的形狀及大小。采用不同濃度的凝膠有可能分辨范圍廣泛的DNA分子，制備瓊脂糖凝膠可根據(jù)DNA分子的范圍來(lái)決定凝膠的濃度。小片段的DNA電泳應(yīng)采用聚丙烯酰胺凝膠電泳以提高分辨。電泳指示劑：核酸電泳常用的指示劑有兩種，溴酚藍(lán)呈藍(lán)紫色；二甲苯晴呈藍(lán)色，它攜帶的電荷量比溴酚藍(lán)少，在凝膠中的的遷移率比溴酚藍(lán)慢。常規(guī)電泳系統(tǒng)如果輸出端接多個(gè)電泳槽，則儀器顯示的電流數(shù)值為各槽電流之和，此時(shí)應(yīng)選擇穩(wěn)壓輸出，以減小各槽的相互影響。注意保持儀器的清潔，不要遮擋儀器后方進(jìn)風(fēng)通道。嚴(yán)禁將電泳槽放在儀器頂部，避免緩沖液灑進(jìn)儀器內(nèi)部。本儀器輸出電壓較高，使用中應(yīng)避免接觸輸出回路及電泳槽內(nèi)部，以免發(fā)生危險(xiǎn)。長(zhǎng)期不用儀器，應(yīng)放置在干燥通風(fēng)的清潔環(huán)境中保存。常規(guī)電泳系統(tǒng)特別注意：溴化乙錠（EB）：為致癌劑，用含EB的溶液進(jìn)行浸泡時(shí)應(yīng)戴手套，浸泡后轉(zhuǎn)移至拍照過(guò)程中應(yīng)放在容器內(nèi)或者保鮮膜上，嚴(yán)禁在轉(zhuǎn)移過(guò)程中出現(xiàn)滴水現(xiàn)象，盡量減少地面與臺(tái)面污染。建議使用熒光染料

。瓊脂糖膠嚴(yán)禁倒入水池，以免產(chǎn)生堵塞。凝膠成像系統(tǒng)