《分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)》期末樣卷標(biāo)準(zhǔn)答案1doc

《分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)》期末樣卷標(biāo)準(zhǔn)答案[1]doc溫州醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)《分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)》期末考試卷樣卷一標(biāo)準(zhǔn)答案（卷面100分，占總成績70%）考試日期：2022年6月1日考試時間：13：30-15：00考試方式：閉卷一．_名詞解釋__（本大題共_10_題，每題_4__分，共__40__分。）.基因組單倍體細(xì)胞中的全套染色體為一個基因組.蛋白質(zhì)組指由一個基因組，或一個細(xì)胞、組織表達(dá)的所有蛋白質(zhì).回文結(jié)構(gòu)一種旋轉(zhuǎn)對稱結(jié)構(gòu)，在軸的兩側(cè)序列相同而反向。短的回文結(jié)構(gòu)可能是一種特別的信號，如限制性內(nèi)切酶的識別位點(diǎn)。較長的回文結(jié)構(gòu)容易轉(zhuǎn)化成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。.肽質(zhì)量指紋圖譜蛋白質(zhì)被識別特異酶切位點(diǎn)的蛋白酶水解后得到的肽片段的質(zhì)量圖譜。由于每種蛋白的氨基酸序列（一級結(jié)構(gòu)）都不同，當(dāng)?shù)鞍妆凰夂螅a(chǎn)生的肽片段序列也各不相同，因此其肽質(zhì)量指紋圖也具有特征性.生物芯片指將大量探針分子固定于支持物上后與標(biāo)記的樣品分子進(jìn)行雜交，通過檢測每個探針分子的雜交信號強(qiáng)度進(jìn)而獲取樣品分子的數(shù)量和序列信息。.分子生物學(xué)從分子水平研究生物大分子的結(jié)構(gòu)與功能從而闡明生命現(xiàn)象本質(zhì)的科學(xué)。其主要研究領(lǐng)域包括蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-核酸和蛋白質(zhì)-脂質(zhì)（即生物膜）。.PCR聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraeChainReaction），簡稱PCR,是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的DNA片段?？煽醋魃矬w外的特殊DNA復(fù)制?？?.BLAST是一個用來比對生物序列的一級結(jié)構(gòu)的算法。.ddNTP雙脫氧核苷三磷酸，與dNTP的區(qū)別在于脫氧核糖的C3位置缺少-OH，ddNTP可以在聚合酶的作用下可與多核苷酸鏈的3'一OH之間形成磷酸二酯鍵，但不能與下一個核苷酸縮合，使多核苷酸鏈的延伸終止。.基因病遺傳物質(zhì)（基因）發(fā)生改變導(dǎo)致的疾病二．___簡答題__（本大題共_6_題，每題_8_分，共__48__分。）.試述真核生物基因組特點(diǎn)；答：（1）真核生物基因組DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合形成染色體，儲存于細(xì)胞核內(nèi)，除配子細(xì)胞外，體細(xì)胞內(nèi)的基因的基因組是雙份的，即有兩份同源的基因組。（2）真核細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子。一個結(jié)構(gòu)基因經(jīng)過轉(zhuǎn)錄和翻譯生成一個mRNA分子和一條多肽鏈。（3）存在重復(fù)序列，重復(fù)次數(shù)可達(dá)百萬次以上。（4）基因組中不編碼的區(qū)域多于編碼區(qū)域。（5）大部分基因含有內(nèi)含子，因此，基因是不連續(xù)的。9（6）基因組遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于原核生物的基因組，3某10。（錯一點(diǎn)扣1.5分）.試述重組子結(jié)構(gòu)特征的篩選的方法；答：（1）重組子大小鑒別篩選：獲得外源DNA后，分子量較原來載體大得多，可利用限制性核酸內(nèi)切酶法鑒別。（2）直接酶切鑒定：結(jié)合瓊脂糖凝膠電泳（3）PCR篩選法：提取重組子DNA，以外源基因兩端的互補(bǔ)序列為引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增外源口DNA.（4）核酸雜交技術(shù)篩選：將DNA的克隆片段轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素薄膜上，應(yīng)用特異的核酸探針進(jìn)行原位雜交檢測。（每點(diǎn)2分）.試述酵母雙雜交技術(shù)原理；答、酵母的細(xì)胞內(nèi)檢測蛋白間相互作用的遺傳系統(tǒng)將兩個待測蛋白分別與這兩個結(jié)構(gòu)域建成融合蛋白，并共表達(dá)于同一個酵母細(xì)胞內(nèi)。如果兩個待測蛋白間能發(fā)生相互作用，就會通過待測蛋白的橋梁作用使AD與BD形成一個完整的轉(zhuǎn)錄激活因子并激活相應(yīng)的報告基因表達(dá)。通過對報告基因表型的測定可以很容易地知道待測蛋白分子間是否發(fā)生了相互作用。（4分）4.試述TaqMan技術(shù)原理；口答、（1）Taqman技術(shù)主要用于熒光定量PCR法，TaqMan探針是一種寡核苷酸探針，它的熒光與目的序列的擴(kuò)增相關(guān)。（2分）（2）探針設(shè)計(jì)為與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對，帶有一個熒光發(fā)光分子和一個熒光淬滅分子。熒光基團(tuán)連接在探針的5’端，而淬滅劑則在3’末端。（2分）（3）當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對時，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時，聚合酶的5'3'得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離，從而在激光下產(chǎn)生特定波長的熒光，這種熒光隨著PCR擴(kuò)增過程呈動態(tài)增強(qiáng)。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系。（4分）.簡述自動核酸序列分析和DHPLC分析在臨床檢測的不同應(yīng)用價值；口答、基于Sanger雙脫氧鏈終止法的原理（1分），采用4種帶有不同琥珀酰熒光素標(biāo)記的終止物ddNTP，可以在同一個反應(yīng)管中進(jìn)行末端終止測序反應(yīng)，并于變性聚丙烯酰胺凝膠的同一泳道中進(jìn)行電泳檢測，從而降低了測序泳道間遷移率差異對精確性的影響。（4分）對DNA序列的識讀也在電泳過程中完成，即當(dāng)帶有某種熒光素標(biāo)記的單鏈DNA片段電泳到激光探頭的檢測范圍時，激光所激發(fā)的熒光信號被探測器接收，經(jīng)計(jì)算機(jī)分析數(shù)據(jù)，于記錄紙上以紅、黑、藍(lán)和綠四種顏色打印出帶有不同熒光素染料標(biāo)記終止物ddNTP標(biāo)示的DNA片段峰譜，繼而自動排出DNA序列。（3分）口.試述三大核酸序列數(shù)據(jù)庫；答：國際核苷酸序列數(shù)據(jù)庫：（1）EMBLBank（英國）：歐洲分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室（EuropeanMolecularBiologyLaboratory）核酸序列數(shù)據(jù)庫，為歐洲最主要的核酸序列數(shù)據(jù)庫，世界兩大核酸數(shù)據(jù)庫之一。目前此數(shù)據(jù)庫由其分支機(jī)構(gòu)一EBI（theEuropeanBioinformaticIntitute，歐洲生物情報研究所）維護(hù)。（2）GenBank（美國）：美國國家生物技術(shù)情報中心（NCBI，NationalCenterforBiotechnologyInformation）基因序列數(shù)據(jù)庫。美國最主要的核酸序列數(shù)據(jù)庫，世界兩大核酸數(shù)據(jù)庫之一。DNADataBankofJapan（日本）：DNAdatabaeofJapan（Mihima）,位于日本的核酸序列數(shù)據(jù)庫，為亞洲主要的核酸序列數(shù)據(jù)庫國家遺傳研究所。（錯一點(diǎn)扣3分）三．___問答題__（本大題共__1__題，共__12__分。）兩個片段，它們與人類皰疹病毒（HHV）高度同源，卻不同于已知的七類HHV病毒中的任何一類，被命名為HHV-8。請據(jù)此設(shè)計(jì)分離HHV-8的實(shí)驗(yàn)方法，并對其進(jìn)行鑒定或診斷。答：從AIDS患者的Kapoi肉瘤細(xì)胞中分離出總DNA分