實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1課件

實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定

蛋白質(zhì)含量實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)微量凱氏定氮法的原理掌握微量凱氏定氮法的操作技術(shù)（未知樣品的消化、蒸餾、滴定及其含氮量的計(jì)算等）實(shí)驗(yàn)原理凱氏定氮法常用于測(cè)定天然有機(jī)物（如蛋白質(zhì)，核酸及氨基酸等）的含氮量。當(dāng)天然含氮有機(jī)物與濃硫酸共熱時(shí)，其中的碳、氫被氧化成二氧化碳和水，而氮?jiǎng)t變成氨并進(jìn)一步與硫酸作用生成硫酸銨。此過(guò)程稱(chēng)為“消化”。此過(guò)程進(jìn)行的相對(duì)較為緩慢，通常需要加入硫酸鉀或硫酸鈉以提高反應(yīng)的沸點(diǎn)，并加入硫酸銅作為催化劑，以促進(jìn)反應(yīng)的進(jìn)行。氧化劑過(guò)氧化氫也能加速反應(yīng)。蒸餾：在消化完全的樣品溶液中加入濃氫氧化鈉使呈堿性，加熱蒸餾，即可釋放出氨氣，反應(yīng)方程式如下：

吸收與滴定：蒸餾所放出的氨，可用硼酸溶液進(jìn)行吸收，待吸收完全后，再用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，直至恢復(fù)溶液中原來(lái)氫離子濃度為止（即滴定至藍(lán)紫色)，最后根據(jù)所用標(biāo)準(zhǔn)酸的當(dāng)量數(shù)（相當(dāng)于待測(cè)物中氨的當(dāng)量數(shù)）計(jì)算出待測(cè)物中的氮量。實(shí)驗(yàn)材料與試劑實(shí)驗(yàn)材料：食用面粉實(shí)驗(yàn)試劑：濃硫酸30%氫氧化鈉溶液克氏催化劑2%硼酸指示劑0.01MHCL實(shí)驗(yàn)器材凱氏燒瓶電爐凱氏定氮蒸餾裝置錐形瓶100ml容量瓶酸式滴定管蒸餾：儀器的洗滌：蒸餾器洗凈后，開(kāi)放水龍頭P3，使水進(jìn)入A室，水放至A室球部即可。取3個(gè)50ml的錐形瓶，各準(zhǔn)確加入10ml硼酸（內(nèi)加有混合指示劑）。用表面皿復(fù)蓋備用。A、加樣：用吸量管吸取2ml消化液，細(xì)心地由漏斗D傾入蒸餾室，再用蒸餾水1毫升清洗漏斗。取一個(gè)盛有硼酸—混合指示劑的錐形瓶，置于M管下，使管口恰好接觸硼酸溶液，用量筒從漏斗D加入30%氫氧化鈉5ml，隨即將P4夾緊，并往漏斗加入少量蒸餾水封閉。滴定：蒸餾完畢，用微量酸式滴定管，以0.01mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行滴定錐瓶?jī)?nèi)溶液，溶液由藍(lán)綠色變?yōu)榈仙蚧疑礊榻K點(diǎn)。記錄所用鹽酸的量。計(jì)算：若測(cè)定的樣品含氮量部分只是蛋白質(zhì)則：樣品的總蛋白含量（克蛋白%）=式中：A為滴定樣品用去的鹽酸平均毫升數(shù)；B為滴定空白用去的鹽酸平均毫升數(shù)；（使用空白對(duì)照，木的是考慮到被滴定液種種可能含有能與鹽酸反應(yīng)的雜質(zhì)而消耗了鹽酸）C為稱(chēng)量樣品的克數(shù)：0.0100為鹽酸的當(dāng)量濃度（實(shí)際上，此項(xiàng)應(yīng)按實(shí)驗(yàn)中使用鹽酸的實(shí)際濃度填寫(xiě)）；14為氮的原子量；6.25為常數(shù)（1毫升0.1N鹽酸相當(dāng)于0.14毫克氮）。注意事項(xiàng)本法適用于0.05-3.0mg氮，樣品中含氮量過(guò)高時(shí)，則應(yīng)減少取樣量或?qū)右合♂?。勿使樣品粘于燒瓶頸部。放置液體樣品時(shí)，需將吸管插至燒瓶底部再放樣：如固體樣品，可將樣品卷在紙內(nèi)，平插入燒瓶底部，然后再將燒瓶直起，紙卷內(nèi)的樣品即完全放在燒瓶底部。思考題：寫(xiě)出一下各步的化學(xué)反應(yīng)