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實驗二改良牛鮑計數(shù)板使用、紅細(xì)胞計數(shù)目的要求:1.掌握改良牛鮑計數(shù)板的結(jié)構(gòu)和使用方法2.掌握手工顯微鏡紅細(xì)胞計數(shù)的方法。(一)改良牛鮑氏計數(shù)板的結(jié)構(gòu)和使用方法
臨指導(dǎo)P71.改良牛鮑氏計數(shù)板的結(jié)構(gòu)(見圖)2.改良牛鮑氏計數(shù)板的使用方法1)準(zhǔn)備計數(shù)板:用綢布擦拭,“推壓”法加蓋玻片2)稀釋的血液:準(zhǔn)確吸取稀釋液和血液,立即混勻。3)充池:充池前充分混勻稀釋液,充池要一次性完成,充液不能過多、過少、有氣泡、斷續(xù)充液、充池后移動蓋玻片。4)靜置2-3min,待細(xì)胞下沉。
5)顯微鏡計數(shù):小心移動;手和顯微鏡鏡頭不能碰到蓋玻片。6)計數(shù)原則:逐格計數(shù);
按一定方向進(jìn)行計數(shù);對壓線細(xì)胞遵循“數(shù)上不數(shù)下,數(shù)左不數(shù)右”的原則。(一)改良牛鮑氏計數(shù)板的結(jié)構(gòu)和使用方法
1.保證所用器材清潔,勿用手觸膜。2.)充池:充池前充分混勻稀釋液,一次性完成,充液不能過多、過少、有氣泡、斷續(xù)充液。3.充池后移動蓋玻片。4.計數(shù)池使用后用蒸餾水沖,紗布輕試,切不可用粗糙織物擦試,以免磨損刻度。3.改良牛鮑氏計數(shù)板使用注意事項2.紅細(xì)胞稀釋液(1)Hayem(赫姆氏液)即傳統(tǒng)的紅細(xì)胞稀釋液▲成分及作用:氯化鈉:調(diào)節(jié)滲透壓至等滲硫酸鈉:提高比密,防止細(xì)胞粘連氯化高汞:防腐劑▲缺點:遇高球蛋白血癥患者,球蛋白沉淀使紅細(xì)胞容易凝結(jié)。(二)紅細(xì)胞計數(shù)(二)紅細(xì)胞計數(shù)--2.紅細(xì)胞稀釋液(2)甲醛枸櫞酸鹽▲成分及作用:枸櫞酸鈉:抗凝、保持等滲甲醛:防腐、固定紅細(xì)胞▲優(yōu)點:配制簡單、紅細(xì)胞不凝集,可保持紅細(xì)胞正常的圓盤狀數(shù)小時,目前應(yīng)用廣泛。3.操作步驟(1)準(zhǔn)備稀釋液:加紅細(xì)胞稀釋液(赫姆氏液)2.0ml于試管中。(2)采血:10μl至稀釋液中,立即混勻。(3)準(zhǔn)備計數(shù)板、混勻稀釋液、充池、靜置2-3min。(4)顯微鏡計數(shù):高倍鏡下計數(shù)中間大方格內(nèi)四角及中央的5個中方格內(nèi)的紅細(xì)胞總數(shù)。(二)紅細(xì)胞計數(shù)4.計算紅細(xì)胞數(shù)/L=N×25/5×10×106×200=N×1010=N/100×1012參考值:
成年男性:4.0—5.5*1012/L;成年女性:3.5—5.0*1012/L;
初生兒:6.0—7.0*1012/L(二)紅細(xì)胞計數(shù)5.注意事項:(1)同白細(xì)胞計數(shù)(2)紅細(xì)胞在計數(shù)池中
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