實驗五小麥萌發(fā)前后淀粉酶活力的課件_第1頁
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文檔簡介

實驗五

小麥萌發(fā)前后淀粉酶活力的比較一、實驗目的1．學習測定淀粉酶活力的方法。2．了解小麥萌發(fā)前后淀粉酶活力的變化。二、實驗原理休眠種子中主要含有β-淀粉酶，而α-淀粉酶是在萌發(fā)過程中形成的。種子萌發(fā)時，淀粉酶活性隨萌發(fā)時間迅速增加，將淀粉分解成小分子糖類，供幼苗生長。β-淀粉酶水解非還原端的第二個α-1,4-糖苷鍵，水解產(chǎn)物為麥芽糖。三、試劑

1.

0.1％標準麥芽糖溶液20毫升：精確稱量100毫克麥芽糖，用少量水溶解后，移入100ml容量瓶中，加蒸餾水至刻度。2．pH6.9，0.02摩爾／L磷酸緩沖液100毫升3．1％淀粉溶液100毫升：1克可溶性淀粉溶于100毫升0.02摩爾／L磷酸緩沖液，其中含有0.006摩爾／L氯化鈉。4．1％3,5-二硝基水楊酸試劑:1g3,5-二硝基水楊酸溶于20毫升2摩爾／L的氫氧化鈉溶液和50毫升水中；再加人30克酒石酸鉀鈉，定容至100毫升。若溶液混濁，可過濾。5．1％氯化鈉溶液300毫升6．海砂5克四、操作步驟1．種子發(fā)芽：小麥種子浸泡2.5h后，放人25℃恒溫箱內(nèi)或在室溫下發(fā)芽。2．酶液提?。喝“l(fā)芽第三天或第四天的幼苗15株，放人乳缽內(nèi)，加適量石英砂，加1％氯化鈉溶液10毫升，用力磨碎。在室溫下放置20分鐘，攪拌幾次。將提取液離心（1500轉(zhuǎn)／min）6－7分鐘。將上清液倒人量筒，測定酶提取液的總體積。進行酶活力測定時，將酶提取液用Ph6.9的磷酸緩沖液稀釋10倍。取干燥種子15粒作為對照（提取步驟同上）。將各管混勻，放在25℃，水浴中保溫3分鐘后，立即向各管中加人1％3，5-二硝基水楊酸溶液2毫升。（？）（2）取出各試管，放人沸水浴中加熱5分鐘。冷至室溫，加水稀釋至25毫升。將各管充分混勻。（3）用空白管作對照；在500nm處測定各管的光吸收值，記錄結(jié)果。4．計算本實驗規(guī)定：25℃時3min內(nèi)水解淀粉釋放1mg麥芽糖所需的酶量為1個酶活力單位（U）。根據(jù)溶液的濃度與光吸收值成正比的關系，即：A標準／A未知＝C標準／C未知C（酶液管濃度）＝A酶×C標準／A標準則15

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