高中生物微生物的培養(yǎng)

高中生物微生物的培養(yǎng)第1頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二1.了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)，掌握無菌操作技術(shù)的有關(guān)內(nèi)容。2.了解消毒和滅菌常用的方法及二者的區(qū)別。3.學(xué)會(huì)以大腸桿菌為材料進(jìn)行微生物培養(yǎng)與分離純化的方法。一目標(biāo)導(dǎo)航一、培養(yǎng)基與無菌技術(shù)1．培養(yǎng)基(1)概念：人們按照微生物對________________的不同需求，配制出供其________________的________________。(2)成分：一般含有______、________、________、________，此外還要滿足微生物對__________________(即生長因子)、________以及氧氣的需求。營養(yǎng)物質(zhì)生長繁殖營養(yǎng)基質(zhì)水無機(jī)鹽碳源氮源特殊營養(yǎng)物質(zhì)

pH第2頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二營養(yǎng)物質(zhì)定義作用主要來源碳源能提供所需______的物質(zhì)構(gòu)成生物體的________和一些________，有些是異養(yǎng)生物的________無機(jī)化合物：CO2、NaHCO3等；有機(jī)化合物：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等氮源能提供所需______的物質(zhì)合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物無機(jī)化合物：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽等；有機(jī)化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生長因子生長必不可少的__________酶和核酸的組成成分維生素、氨基酸、堿基等水在生物體內(nèi)含量很高，在低等生物體內(nèi)含量更高不僅是優(yōu)良的溶劑，而且可維持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定無機(jī)鹽為微生物提供除碳、氮以外的各種重要元素細(xì)胞內(nèi)的組成成分，生理調(diào)節(jié)物質(zhì)，某些化能自養(yǎng)菌的能源，酶的激活劑微量有機(jī)物碳元素細(xì)胞物質(zhì)代謝產(chǎn)物能源物質(zhì)氮元素第3頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二(1)不同種類的微生物，對碳源的需要差別較大。(2)微生物最常利用的碳源是糖類，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是銨鹽、硝酸鹽。(3)對異養(yǎng)微生物來說，含C、H、O、N的化合物既是碳源又是氮源和能量來源。(4)微生物之所以需要補(bǔ)充生長因子，往往是由于缺乏合成這些物質(zhì)所需要的酶或合成能力有限。備注：拓展深化①.葡萄糖、氨基酸、氨氣、牛肉膏、玉米粉等物質(zhì)在微生物營養(yǎng)中的作用？葡萄糖提供C源和能源,構(gòu)成生物體的細(xì)胞物質(zhì)和代謝產(chǎn)物.氨基酸提供生長因子,N源,C源和能源氨氣提供N源和能源（硝化細(xì)菌的化能合成作用）第4頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二④．微生物培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)的營養(yǎng)成分區(qū)別？②．大腸桿菌、硝化細(xì)菌、乳酸菌等微生物營養(yǎng)類型。牛肉膏天然培養(yǎng)基，主要提供C源、磷酸鹽和維生素、N源。玉米粉主要提供C源與能量植物組織培養(yǎng)微生物培養(yǎng)培養(yǎng)基成分水、礦質(zhì)元素、蔗糖、維生素、有機(jī)添加物和植物激素等水、無機(jī)鹽、碳源、氮源等大腸桿菌：異養(yǎng)兼性厭氧型硝化細(xì)菌：自養(yǎng)需氧型乳酸菌：異養(yǎng)厭氧型根據(jù)不同的微生物營養(yǎng)類型不同，選擇配制不同的培養(yǎng)基。③由①②可以得到什么結(jié)論？第5頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二1．不同的微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需要各不相同。下列有關(guān)一種以CO2為唯一碳源的自養(yǎng)微生物營養(yǎng)的描述中，不正確的是(

)A．氮源物質(zhì)為該微生物提供必要的氮素B．碳源物質(zhì)也是該微生物的能源物質(zhì)C．無機(jī)鹽是該微生物不可缺少的營養(yǎng)物質(zhì)

D．水是該微生物的營養(yǎng)要素之一營養(yǎng)型碳源氮源生長因子舉例自養(yǎng)型微生物CO2、NaHCO3N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽等一般不需要硝化細(xì)菌異養(yǎng)型微生物糖類、脂肪酸等銨鹽、硝酸鹽、蛋白胨等有些種類需要乳酸菌B自養(yǎng)微生物與異養(yǎng)微生物的營養(yǎng)什么區(qū)別呢？第6頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二(3)培養(yǎng)基的種類劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途物理性質(zhì)______培養(yǎng)基加凝固劑，如________半固體培養(yǎng)基觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類、鑒定______培養(yǎng)基微生物____、____、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種化學(xué)成分______培養(yǎng)基含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)______培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分明確(用化學(xué)成分已知的化學(xué)物質(zhì)配成)分類、鑒定用途______培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以___

_不需要的微生物的生長，____所需要的微生物的生長培養(yǎng)、____出特定微生物(如培養(yǎng)酵母菌和霉菌，可在培養(yǎng)基中加入青霉素或鏈霉素；培養(yǎng)固氮菌可用無氮培養(yǎng)基)______培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品____不同種類的微生物，如可用伊紅—美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌(若有，菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤)

液體固體工業(yè)生產(chǎn)分離鑒定瓊脂天然合成選擇抑制促進(jìn)分離鑒別鑒別第7頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二②．純化大腸桿菌、分離分解尿素微生物、分離細(xì)菌與真菌混合菌的培養(yǎng)基類型是什么？拓展深化①．病毒目前的利用人工培養(yǎng)基來培養(yǎng)方法？需接種在動(dòng)、植物組織細(xì)胞中才能繁殖。常用于培養(yǎng)病毒的是活雞胚。2．下列說法正確的是(

)A．培養(yǎng)基是為微生物的生長繁殖提供營養(yǎng)的基質(zhì)B．培養(yǎng)基只有兩類：液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基C．除水以外的無機(jī)物只能提供無機(jī)鹽D．無機(jī)氮源不可能提供能量選擇培養(yǎng)基A第8頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二植物組織培養(yǎng)技術(shù)、微生物培養(yǎng)技術(shù)和無土栽培技術(shù)的比較植物組織培養(yǎng)微生物培養(yǎng)無土栽培含義培養(yǎng)基成分特殊操作要求在無菌條件下，將離體的植物體器官或組織接種在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，最終發(fā)育成完整植物體在無菌條件下，在適宜的營養(yǎng)和環(huán)境條件下對微生物的培養(yǎng)將植物生長發(fā)育過程中所需各種礦質(zhì)元素按一定比例配成營養(yǎng)液，并利用這種營養(yǎng)液栽培植物水、礦質(zhì)元素、蔗糖、維生素、有機(jī)添加物和植物激素等水、無機(jī)鹽、碳源、氮源（異養(yǎng)微生物還加生長因子）等水、必需礦質(zhì)元素嚴(yán)格控制無菌操作，在培養(yǎng)過程中要更換培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂素和生長素的比例和添加順序。嚴(yán)格控制無菌操作，整個(gè)培養(yǎng)過程無需更換培養(yǎng)基適宜的環(huán)境條件，基質(zhì)墊底并固定幼苗，不需要保證無菌條件，注意溶氧和礦質(zhì)元素的濃度。第9頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二3.下列關(guān)于植物組織培養(yǎng)、微生物培養(yǎng)和無土栽培技術(shù)的比較的有關(guān)說法中，不正確的是（）A微生物培養(yǎng)和無土栽培技無需更換培養(yǎng)基，植物組織培養(yǎng)需更換培養(yǎng)基B植物組織培養(yǎng)、微生物培養(yǎng)需要嚴(yán)格控制無菌操作，植物組織培養(yǎng)不需要C三者都需要加入水、礦質(zhì)元素和一些必要的有機(jī)物D三者培養(yǎng)的目的和原理各不相同C第10頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二知識(shí)總結(jié)歸納1.加入青霉素的培養(yǎng)基:分離酵母菌、霉菌等真菌

2.加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基:

分離金黃色葡萄球菌3.不加氮源的無氮培養(yǎng)基:分離固氮菌4.不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基:分離自養(yǎng)型微生物5.如何鑒定飲用水和奶制品中含有大腸桿菌？加入伊紅----美藍(lán)試劑，如果菌落出現(xiàn)深紫色并伴有金屬光澤，就證明有大腸桿菌。第11頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二【配對練習(xí)2】關(guān)于配制培養(yǎng)基的敘述中，正確的是()

A．制作固體培養(yǎng)基必須加入瓊脂

B．加入青霉素可得到放線菌

C．培養(yǎng)自生固氮菌不需氮源

D．發(fā)酵工程一般用半固體培養(yǎng)基

解析：固體培養(yǎng)基需加入凝固劑，瓊脂是常用的，但不是唯一的；青霉素可抑制細(xì)菌和放線菌的生長；發(fā)酵工程一般用液體培養(yǎng)基；自生固氮菌能夠?qū)⒖諝庵械牡€原成氨，故培養(yǎng)基配制時(shí)不需加氮源。

答案：C第12頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二(1)概念：防止一切外來雜菌的侵入，并保持滅菌物品及無菌區(qū)域不再被污染的方法，稱為無菌技術(shù)。注意在微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)中，無菌技術(shù)的核心是______________，________________。(2)無菌技術(shù)的具體內(nèi)容①對實(shí)驗(yàn)操作的________、操作者的________________進(jìn)行清潔和消毒。②將用于微生物培養(yǎng)的__________、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行________。③為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在________________進(jìn)行。④實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已________處理的材料用具與周圍的物品相接觸。(3)消毒和滅菌的概念①消毒：消毒是指使用________的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的________________(不包括芽孢和孢子)。②滅菌：滅菌是指使用__________的理化因素殺死物體內(nèi)外________________，包括____________。③消毒與滅菌的區(qū)別：兩者最大的區(qū)別是________________________。2．無菌技術(shù)防止雜菌污染保證培養(yǎng)的純度空間衣著和手器皿滅菌酒精燈火焰附近滅菌較溫和部分微生物強(qiáng)烈所有的微生物芽孢和孢子芽孢和孢子是否存活第13頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二拓展深化某些細(xì)菌在其生長發(fā)育后期，可在細(xì)胞內(nèi)形成一個(gè)圓形的抗逆性休眠體，稱為芽孢。每個(gè)細(xì)菌細(xì)胞僅形成一個(gè)芽孢，故它無繁殖功能。芽孢有極強(qiáng)的抗熱、抗輻射、抗化學(xué)藥物和抗靜水壓的能力。芽孢的休眠能力十分驚人，可保持幾年到幾十年的生活力。孢子是微生物產(chǎn)生的一種有繁殖或休眠作用的細(xì)胞。一般是單細(xì)胞，個(gè)體微小，通常是適應(yīng)于從不利環(huán)境條件中存活下來，并在條件改變時(shí)產(chǎn)生新的營養(yǎng)體，能直接發(fā)育成新個(gè)體。(4)消毒與滅菌的常用方法方法條件作用對象消毒100℃，煮沸5～6min殺死微生物的營養(yǎng)細(xì)胞和一部分芽孢70～75℃煮30min或80℃煮15min不耐高溫的液體（如牛奶）70%的酒精對雙手消毒50%的石炭酸、來蘇水對空氣消毒一定濃度的乳酸、食醋通過熏蒸對空氣進(jìn)行消毒紫外線法紫外線照射30min物體表面或空氣中的微生物煮沸法巴氏消毒法化學(xué)藥劑法第14頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二滅菌在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒對接種環(huán)、接種針或其他金屬工具滅菌，也可以對試管口、瓶口滅菌在干熱滅菌箱內(nèi)，160～170℃條件下，加熱1～2h耐高溫且需保持干燥的物品，如玻璃器皿和金屬用具等在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，121℃，100kPa，滅菌15～30min30W照射30min小型接種室、接種箱等紫外線滅菌灼燒滅菌干熱滅菌高壓蒸汽滅菌(一)配制培養(yǎng)基1．配制原則(1)____________(根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等)，如培養(yǎng)基可由簡單的無機(jī)物組成；生產(chǎn)用培養(yǎng)基內(nèi)可加入化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)，而分類鑒定用培養(yǎng)基內(nèi)必須加入已知化學(xué)成分的物質(zhì)。(2)____________，注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。(3)____________，各種微生物適宜生長的pH范圍不同，細(xì)菌6.5～7.5、放線菌7.5～8.5、真菌5.0～6.0。二、實(shí)驗(yàn)操作目的要明確營養(yǎng)要協(xié)調(diào)pH要適宜第15頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二判斷下列各項(xiàng)是否需要消毒或滅菌。如需要，選擇合適方法。（1）豆?jié){（2）游泳池（3）超凈工作臺(tái)（4）玻棒、試管、吸管、錐形瓶（5）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)皿（6）無菌水（7）牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（8）接種針和接種環(huán)（9）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手滅菌（灼燒）消毒（巴氏）消毒（化學(xué)）消毒（先化學(xué)后紫外線）消毒（化學(xué)）消毒（化學(xué)）滅菌（干熱）滅菌（高壓蒸汽）滅菌（高壓蒸汽）第16頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二)【例3】下列操作與滅菌無關(guān)的是(A．接種前用火焰灼燒接種環(huán)B．接種前用酒精擦拭雙手C．接種在酒精燈火焰旁完成D．將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

無菌操作是微生物培養(yǎng)的必要前提，學(xué)生必須樹立“無菌概念”。前三項(xiàng)都是無菌操作的規(guī)范要求，第四項(xiàng)將平板倒置(為了防止皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基中，造成污染)，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)與滅菌無關(guān)。【答案】：D第17頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二注意①不同微生物對營養(yǎng)需求不同，因此，首先根據(jù)不同微生物的營養(yǎng)需求配制針對性強(qiáng)的培養(yǎng)基。②營養(yǎng)物質(zhì)濃度過低不能滿足微生物營養(yǎng)需要，過高對微生物的生長有抑制作用，另外，培養(yǎng)基中各營養(yǎng)物質(zhì)濃度比直接影響微生物的生長繁殖和代謝產(chǎn)物的形成和積累，其中碳氮比(C/N)的影響較大。例如，在谷氨酸生產(chǎn)中，當(dāng)培養(yǎng)基中的碳源與氮源的比為4∶1時(shí)，菌體大量繁殖，而產(chǎn)生的谷氨酸少；當(dāng)碳源與氮源的比為3∶1時(shí)，菌體繁殖受抑制，但谷氨酸合成量大增。2．配制方法(以制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基為例)培養(yǎng)基組分提供的主要營養(yǎng)物質(zhì)牛肉膏5.0g碳源、磷酸鹽和維生素蛋白胨10.0g氮源和維生素NaCl5.0g無機(jī)鹽H2O定容至1000mL氫元素、氧元素瓊脂(1)培養(yǎng)異養(yǎng)菌的牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成第18頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二(2)實(shí)驗(yàn)流程倒平板計(jì)算稱量溶化調(diào)節(jié)pH分裝滅菌先加牛肉膏少量水，加熱，溶化取出稱量紙；再加蛋白胨和氯化鈉，玻棒攪拌溶解；加瓊脂，玻棒攪拌，完全熔化，補(bǔ)加蒸餾水至100毫升。第19頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二合格的培養(yǎng)基必須滅菌效果好。培養(yǎng)基配制好后，要放在恒溫箱中保溫1～2d，若無菌落生長則說明制備的培養(yǎng)基是合格的。提醒4．下列為某同學(xué)在培養(yǎng)金黃色葡萄球菌實(shí)驗(yàn)中的部分操作步驟，其中正確的是(

)A．培養(yǎng)基中蛋白胨、牛肉膏溶化后，直接補(bǔ)充蒸餾水至100mLB．培養(yǎng)基配制完畢可直接使用C．加壓至100kPa之前，要徹底排出鍋內(nèi)的冷空氣D．將接種環(huán)放在酒精燈火焰上灼燒，滅菌后立即伸入菌液試管內(nèi)挑取少量菌種純化大腸桿菌就是為了獲得大腸桿菌的純種菌落，這需在培養(yǎng)時(shí)，盡量使菌落中的菌體來自于一個(gè)大腸桿菌的分裂，即這個(gè)菌落的細(xì)菌群體由一個(gè)大腸桿菌繁殖而來，這就需接種時(shí)盡量接種單個(gè)的大腸桿菌。(二)純化大腸桿菌C第20頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二1．微生物接種的方法微生物接種的方法最常用的是__________和______________兩種。(1)____________通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。①將________放在酒精燈火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。②在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開盛有菌液的試管的______。③將試管口通過酒精燈的________。④將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，________一環(huán)菌液。⑤將試管口通過酒精燈的火焰，并迅速塞上棉塞。⑥________將培養(yǎng)皿皿蓋打開一條縫隙，________將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入________，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基。⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將____________的劃線與________相連。⑧將____________，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。平板劃線法稀釋涂布平板法平板劃線法接種環(huán)棉塞火焰沾取左手右手平板內(nèi)最后一區(qū)第一區(qū)平板倒置第21頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二(2)________________則是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。①系列稀釋操作a．取盛有9mL水的6支試管滅菌，并按101～106的順序編號。b．用________吸取1mL培養(yǎng)的菌液，注入101倍稀釋的試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，使菌液與水充分混勻。c．從101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液，注入102倍稀釋的試管內(nèi)吹吸均勻，獲得102倍液。依此類推。②涂布平板操作a．將________浸在盛有酒精的燒杯中。b．取不超過0.1mL的________，滴加到培養(yǎng)基表面。c．將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8～10s。d．用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使菌液分布均勻。稀釋涂布平板法移液管涂布器菌液第22頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二2．注意事項(xiàng)(1)平板劃線法①操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前都需要進(jìn)行________________，劃線操作結(jié)束時(shí)，仍需灼燒________。②從第二次以后的劃線操作總是從________________開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加逐漸減少，最終得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落(2)稀釋涂布平板法稀釋涂布平板的操作比較復(fù)雜，且各個(gè)細(xì)節(jié)均需保證“________”，應(yīng)特別注意：①酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適。②吸管頭不要接觸任何其他物體。③吸管要在酒精燈火焰周圍使用。3．微生物分離純化培養(yǎng)的結(jié)果作出分析與評價(jià)(1)培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是對照，若有菌落形成，說明培養(yǎng)基滅菌不徹底。(2)在肉湯培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落呈白色，為圓形，光滑有光澤，邊緣整齊。(3)培養(yǎng)12h和24h后的菌落大小不同，菌落分布位置相同。原因是時(shí)間越長，菌落中細(xì)菌繁殖越多，菌落體積越大，而菌落的位置不動(dòng)，只是菌落數(shù)增多。(4)頻繁使用的菌種利用臨時(shí)保藏法保存，長期保存菌種的方法是甘油管藏法。前者利用固體斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)后，保存在4℃冰箱中，第3～6個(gè)月轉(zhuǎn)種培養(yǎng)一次，缺點(diǎn)是保存時(shí)間較短，菌種容易被污染或產(chǎn)生變異；后者將菌種與無菌甘油等量混合后保存在－20℃的冷凍箱中?；鹧孀茻郎缇臃N環(huán)上一次劃線末端無菌第23頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二4．菌種的保存為了保持菌種的純凈，需對菌種進(jìn)行保藏。對于頻繁使用的菌種，我們可以采用________________法；對于需要長期保存的菌種，可以采用________________法。將菌種放在低溫環(huán)境中保藏的目的是________________________，但時(shí)間長了菌種還是要老化的，因此對臨時(shí)保存的菌種________個(gè)月后需重新接種。4．有關(guān)平板劃線操作的敘述，不正確的是(

)A．第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物B．每次劃線前，灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上的菌種C．在第二區(qū)域內(nèi)劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于菌液D．劃線結(jié)束后，灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者

臨時(shí)保藏甘油管藏降低微生物的新陳代謝速率

3～6C第24頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二一、選擇題1．關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，敘述錯(cuò)誤的是(

)A．操作順序?yàn)橛?jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌B．將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯C．待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時(shí)進(jìn)行倒平板D．待平板冷卻凝固約5～10min后，將平板倒過來放置2．金黃色葡萄球菌有很強(qiáng)的致病力，常引起骨髓炎等，還可能引起食物中毒，下述實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的做法錯(cuò)誤的是(

)A．對接種環(huán)進(jìn)行灼燒處理B．帶菌培養(yǎng)基必須經(jīng)高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后才能倒掉C．帶菌培養(yǎng)基必須經(jīng)加熱后才能倒掉D．接種后雙手必須經(jīng)肥皂洗凈，再用75%的酒精棉球擦拭3．防止雜菌入侵，獲得純凈的培養(yǎng)物，是研究和應(yīng)用微生物的前提。下列敘述錯(cuò)誤的是(

)A．實(shí)驗(yàn)室里可以用紫外線或化學(xué)藥物進(jìn)行消毒B．接種環(huán)、接種針等金屬用具，直接在酒精燈火焰的內(nèi)焰部位灼燒滅菌ACB第25頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二C．在實(shí)驗(yàn)室中，切不可吃東西、喝水，離開實(shí)驗(yàn)室時(shí)一定要洗手，以防止被微生物感染D．使用后的培養(yǎng)基丟棄前一定要進(jìn)行滅菌處理，以免污染環(huán)境4．下列敘述錯(cuò)誤的是(

)A．右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞，為避免污染需放在酒精燈火焰附近B．倒平板整個(gè)過程應(yīng)在火焰旁進(jìn)行C．打開培養(yǎng)皿蓋，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋D．為避免水滴滴入培養(yǎng)基，平板應(yīng)倒過來放置5．有關(guān)稀釋涂布平板法的說法中，錯(cuò)誤的是(

)A．用移液管把菌液從一支試管轉(zhuǎn)移到下一支試管后，要用手指輕壓移液管的橡皮頭，吹吸三次，目的是使菌液與水充分混勻B．移液管需經(jīng)過滅菌C．試管口與移液管應(yīng)在離火焰1～2cm處D．涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)涂布器，使菌液涂布均勻CD第26頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二6．以下關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的操作順序正確的是A．計(jì)算→稱量→倒平板→溶化→滅菌B．計(jì)算→稱量→溶化→倒平板→滅菌C．計(jì)算→稱量→溶化→滅菌→倒平板D．計(jì)算→稱量→滅菌→溶化→倒平板7．為了保持菌種的純凈，需要進(jìn)行菌種的保藏，下列有關(guān)敘述不正確的是(

)A．對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時(shí)保藏的方法B．臨時(shí)保藏的菌種一般是接種到試管的斜面培養(yǎng)基上C．臨時(shí)保藏的菌種容易被污染或產(chǎn)生變異D．對于需要長期保存的菌種，可以采用低溫－4℃保藏的方法8．有關(guān)平板劃線操作的敘述，正確的是(

)A．使用已滅菌的接種環(huán)、培養(yǎng)皿，操作過程中不再滅菌B．打開含菌種的試管需通過火焰滅菌，取出菌種后需馬上塞上棉塞C．把皿蓋打開，將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線即可CDD第27頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二D．最后將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)二、簡答題9．某學(xué)校打算開辟一塊食用菌栽培基地，以豐富學(xué)生的勞動(dòng)技術(shù)課內(nèi)容。首先對食用菌實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行清掃和消毒處理，準(zhǔn)備食用菌栽培所需的各種原料和用具，然后從菌種站購來各種食用菌菌種。請回答下列問題：(1)對買回來的菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，首先制備試管培養(yǎng)基，寫出制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基所需的原料：________、________、________、________、________。其中提供氮源的是______________；提供碳源的主要物質(zhì)是________。(2)微生物在生長過程中對各種成分所需量不同，故配制培養(yǎng)基時(shí)各成分要有合適的________。在燒杯中加入瓊脂后要不停地________，防止________________________。(3)將配制好的培養(yǎng)基分裝到試管中，加棉塞后若干個(gè)試管一捆，包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入____________中滅菌，壓力________kPa，溫度______，時(shí)間______________。滅菌完畢拔掉電源，待鍋內(nèi)壓力自然降到0時(shí)，將試管取出。如果棉塞上沾有培養(yǎng)基，此試管______________。(4)使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí)注意，先向鍋內(nèi)倒入________，把鍋內(nèi)水加熱煮沸并將其中原有冷空氣徹底排出后將鍋密閉。(5)從一支試管向另一支試管接種時(shí)注意，接種環(huán)要在酒精燈________(“內(nèi)”或“外”)焰滅菌，并且待接種環(huán)______后蘸取菌種，試管口不能離開酒精燈火焰附近，將接種的試管放入______℃冰箱中保藏。牛肉膏牛肉膏蛋白胨水無機(jī)鹽瓊脂蛋白胨瓊脂糊底引起燒杯破裂比例攪拌廢棄高壓蒸汽滅菌鍋100

121℃15～30min

適量水外冷卻4第28頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二10．下表是用于從土壤中分離純化土壤細(xì)菌的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方。請回答：試劑用量牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂20.0g水1000mL(1)培養(yǎng)基的類型很多，但培養(yǎng)基中一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽。上述培養(yǎng)基配方中能充當(dāng)碳源的成分是________和________。培養(yǎng)基配制完成以后，一般還要調(diào)節(jié)pH并對培養(yǎng)基進(jìn)行__________處理。(2)分離純化微生物最常使用的接種方法是____________和______________兩種。在接種過程中，接種針或涂布器的滅菌方法是______________。(3)假設(shè)某同學(xué)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上細(xì)菌數(shù)目過多地連成一片，可能的原因是什么？。菌液濃度過高；培養(yǎng)過程中被雜菌污染；利用接種針劃線時(shí)，劃下一個(gè)區(qū)域前沒有對接種針進(jìn)行滅菌處理牛肉膏蛋白胨滅菌平板劃線法稀釋涂布平板法蘸取酒精；引燃滅菌第29頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二目標(biāo)導(dǎo)航1.研究培養(yǎng)基對微生物的選擇作用。

2.進(jìn)行微生物數(shù)量的測定。第2課時(shí)土壤中分解尿素細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)一、研究思路1．篩選菌株(1)實(shí)驗(yàn)室中微生物篩選的原理人為提供有利于________________生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)________或________其他微生物生長。(2)選擇培養(yǎng)基在微生物學(xué)中，將允許__________種類的微生物生長，同時(shí)________或________其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱做選擇培養(yǎng)基。目的菌株抑制阻止特定抑制阻止第30頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二(3)分離分解尿素的細(xì)菌的選擇培養(yǎng)基①在該培養(yǎng)基配方中，為微生物的生長提供碳源的是____________，提供氮源的是________，瓊脂的作用是凝固劑。②該培養(yǎng)基對微生物具有選擇作用。其選擇機(jī)制是________________________________才能在該培養(yǎng)基上生長。③土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈凅w內(nèi)能合成________，將尿素分解的反應(yīng)式是____________________________________________________。Taq細(xì)菌能忍受93℃左右的高溫，是在美國黃石國家公園的一個(gè)熱泉中發(fā)現(xiàn)的，這說明，在尋找目的菌株時(shí)，要根據(jù)____________________________________________。2．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法(1)稀釋涂布平板法(也叫活菌計(jì)數(shù)法)①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的____________，通過統(tǒng)計(jì)平板上的________，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。②操作葡萄糖尿素只有能夠以尿素作為氮源的微生物脲酶CO(NH2)2＋H2OCO2＋2NH3脲酶它對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找一個(gè)活菌菌落數(shù)第31頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二第一，設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。將待測樣品經(jīng)一系列10倍稀釋，然后選擇________稀釋度的菌液，分別取0.1mL接種到已制備好的平板上，然后用無菌涂布器將菌液涂布整個(gè)平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)并計(jì)算菌落數(shù)。為使結(jié)果接近真實(shí)值，可將同一稀釋度涂布到三個(gè)或三個(gè)以上的平板上，培養(yǎng)并計(jì)算出__________。第二，為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在________的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，若設(shè)置的重復(fù)組中結(jié)果相差太遠(yuǎn)，意味著操作有誤，需重新實(shí)驗(yàn)。③計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝C/V×M，其中C代表_______，V代表___________________(mL)，M代表____________。(2)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法①原理：此法利用特定的____________或______________，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量，但不能區(qū)分細(xì)菌的死活。計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，上面有一個(gè)特定的面積1mm2和高0.1mm的計(jì)數(shù)室，在1mm2的面積里又被劃分成25個(gè)(或16個(gè))中格，每個(gè)中格進(jìn)一步劃分成16個(gè)(或25個(gè))小格，計(jì)數(shù)室由_____個(gè)小格組成。三個(gè)菌落平均數(shù)30～300某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積稀釋倍數(shù)細(xì)菌計(jì)數(shù)板血細(xì)胞計(jì)數(shù)板400第32頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二②操作：將稀釋的樣品滴在計(jì)數(shù)板上，蓋上蓋玻片，然后在顯微鏡下計(jì)數(shù)4～5個(gè)中格中的細(xì)菌數(shù)，并求出每個(gè)小格所含細(xì)菌的平均數(shù)，再按公式求出每毫升樣品中所含的細(xì)菌數(shù)。③計(jì)數(shù)公式：每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)＝每小格平均細(xì)菌數(shù)×400×10000×稀釋倍數(shù)。(3)設(shè)置重復(fù)和對照①設(shè)置重復(fù)：培養(yǎng)過程中應(yīng)設(shè)置重復(fù)組，同一稀釋度下應(yīng)涂布________個(gè)平板，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。②設(shè)置對照：實(shí)驗(yàn)中應(yīng)設(shè)置對照，主要目的是________________________對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。如__________對照組，觀察培養(yǎng)物中是否有雜菌污染；設(shè)置________培養(yǎng)基，觀察選擇培養(yǎng)基是否具有________作用。二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)步驟1．土壤取樣：從肥沃、濕潤的土壤中，用無菌小鐵鏟鏟去表層土3cm左右，迅速取土壤并裝入____________密封或事先準(zhǔn)備好的________中。至少3排除實(shí)驗(yàn)組中非測試因素空白完全篩選無菌信封燒杯第33頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二2．制備培養(yǎng)基：①制備________________培養(yǎng)基作為對照組，尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基作為________，用來判斷選擇培養(yǎng)基是否具有____________。②放寬稀釋范圍，如稀釋倍數(shù)為103～107范圍內(nèi)的要分別涂布，而每個(gè)稀釋度下需要______個(gè)選擇培養(yǎng)基、________個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，因此需要15個(gè)選擇培養(yǎng)基和5個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。③兩種培養(yǎng)基應(yīng)各有一個(gè)作為________對照，此外還需準(zhǔn)備8個(gè)滅菌的試管和1個(gè)滅菌的移液管。3．樣品的稀釋與涂布平板：參考下面的實(shí)驗(yàn)流程示意圖，將10g土樣加入盛有90mL無菌生理鹽水的錐形瓶中(錐形瓶體積為250mL)，充分搖勻，吸取上清液1mL，轉(zhuǎn)移至盛有________mL生理鹽水的無菌大試管依次等比稀釋至107稀釋度，并按照由107～103稀釋度的順序分別吸取______mL進(jìn)行平板涂布操作。按照濃度從低到高的順序涂布平板，不必更換移液管。牛肉膏蛋白胨實(shí)驗(yàn)組選擇作用31空白90.1第34頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二說明：圖中的1、2、3平板是____________，4為____________________作對照，判斷選擇培養(yǎng)基是否具篩選作用，還有兩個(gè)空白對照，即不涂布稀釋后菌液的選擇培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，驗(yàn)證培養(yǎng)基中是否____________。4．將涂布好的培養(yǎng)皿放在30℃溫度下培養(yǎng)，及時(shí)觀察和記錄。5．挑選選擇培養(yǎng)基上不同形態(tài)的菌落接入含____________培養(yǎng)基的斜面中，觀察能否產(chǎn)生顏色反應(yīng)。選擇培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基含有雜菌酚紅指示劑第35頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二6．細(xì)菌的計(jì)數(shù)當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在________的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。在同一稀釋度下，至少對3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出____________，并根據(jù)平板所對應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。同時(shí)仔細(xì)觀察所分離到的菌落，并記錄菌落特征。7．統(tǒng)計(jì)表格表一平板上的菌落數(shù)記錄表稀釋倍數(shù)10310410510610712341234123412341234123?30～300平均值第36頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二表二菌落特征記錄表

菌落種類形狀大小隆起程度顏色……123?注：一般來說，在一定的培養(yǎng)條件下(相同的培養(yǎng)基、溫度及培養(yǎng)時(shí)間)，____________表現(xiàn)出________的菌落特征。三、操作提示1．取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的信封在使用前都要________。2．應(yīng)在________旁稱取土壤。在火焰附近將稱好的土樣倒入________中，塞好棉塞。3．在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在________旁操作。4．實(shí)驗(yàn)時(shí)要對________做好標(biāo)記。注明________________________________________等。5．為了提高效率，在操作時(shí)更加有條不紊，應(yīng)當(dāng)________________。同種微生物穩(wěn)定.滅菌火焰錐形瓶火焰培養(yǎng)皿培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時(shí)間、稀釋度、培養(yǎng)物事先規(guī)劃時(shí)間第37頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)容結(jié)論分析有無雜菌污染的判斷對照的培養(yǎng)皿中________菌落生長→未被雜菌;污染培養(yǎng)物中菌落數(shù)________→被雜菌污染菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高→培養(yǎng)物中混入____________

選擇培養(yǎng)基的篩選作用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的菌落數(shù)目________選擇培養(yǎng)基的數(shù)目→選擇培養(yǎng)基具篩選作用，已篩選出一些菌落

樣品的稀釋操作得到2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在________的平板→操作成功，能進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)

重復(fù)組的結(jié)果若選取同一種土樣，統(tǒng)計(jì)結(jié)果應(yīng)________；如果結(jié)果相差太遠(yuǎn)，說明實(shí)驗(yàn)操作過程中出現(xiàn)操作失誤，需要找出產(chǎn)生差異的原因

四、結(jié)果分析與評價(jià)無偏高其他氮源大于30～300接近第38頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二菌落計(jì)數(shù)規(guī)則：選擇平均菌落數(shù)在30~300間的平板1、只有一個(gè)稀釋度符合，以該稀釋度的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告；2、有兩個(gè)稀釋度符合，取決于二者比值（高稀釋度的菌落數(shù)除以低稀釋度的菌落數(shù)的值）

1）若0.5≤比值≤2，以兩稀釋度的菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)所得的值的均值報(bào)告。

2）若2≤比值或比值≤0.5，則取其中較少的菌落總數(shù)進(jìn)行報(bào)告。3、若所有稀釋度的菌落平均數(shù)均大于300，則按稀釋倍數(shù)最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告；4、若所有稀釋度的菌落平均數(shù)均小于30，則按稀釋倍數(shù)最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告；所有菌落數(shù)均不在30~300間，以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)。第39頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二例次不同稀釋度的平均菌落數(shù)

兩個(gè)稀釋度菌落數(shù)之比菌落總數(shù)（個(gè)/ml）備注10-110-210-31136516420—16400或1.6×104兩位以后的數(shù)字采取四舍五入的方法去掉22760295461.637750或3.8×10432890271602.227100或2.7×1044無法計(jì)數(shù)1650513—513000或5.1×105527115—270或2.7×1026無法計(jì)數(shù)30512—30500或3.1×104第40頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二特別注意:測定真菌放線菌與細(xì)菌數(shù)量時(shí),稀釋度的選擇2.放線菌一般選擇10-3,10-4,10-51.真菌一般選擇10-2,10-3,10-43.細(xì)菌一般選擇10-4,10-5,10-6第41頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二五、課題延伸在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的________將尿素分解成了________。氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，________升高。因此，我們可以通過檢測培養(yǎng)基____________來判斷該化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入________指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果pH升高，指示劑將________，這樣，我們就可以準(zhǔn)確地鑒定該種細(xì)菌能夠分解尿素。脲酶氨pHpH的變化酚紅變紅知識(shí)點(diǎn)一研究思路1．下表為本課題使用的培養(yǎng)基，分析培養(yǎng)基配方，回答下面的問題。第42頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g瓊脂15.0g用蒸餾水定容到1000mL(1)在該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是____________________。(2)按物理性質(zhì)劃分該培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基，理由是培養(yǎng)基中含有________________；該類培養(yǎng)基常用于微生物的______________________等。葡萄糖和尿素固體瓊脂純化、分離、計(jì)數(shù)第43頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二(3)由于_______________________________________，所以該培養(yǎng)基只能用于能夠合成________的微生物的培養(yǎng)。用此培養(yǎng)基培養(yǎng)土壤浸出液能夠從土壤中篩選出________的細(xì)菌。(4)在微生物學(xué)中，將__________________________________________________的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。2．廣東省是我國甘蔗生產(chǎn)區(qū)之一。甘蔗是一種高光效的C4植物，單位面積產(chǎn)量很高，種植面積日益擴(kuò)大，目前已成為南方地區(qū)燃料酒精生產(chǎn)的重要原料。利用甘蔗生產(chǎn)燃料酒精的一般工藝流程為：甘蔗→榨汁(蔗糖)→酵母發(fā)酵→蒸餾→成品(燃料酒精)。(1)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精發(fā)酵菌種，對野生酵母菌進(jìn)行誘變后通過篩選可以得到具有這些特性的突變菌，誘變及篩選過程如下：步驟1：野生菌液體培養(yǎng)一段時(shí)間后接受紫外線照射誘變處理。步驟2：制備選擇培養(yǎng)基。在基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，注意和____________，加瓊脂后滅菌，制成固體平板。步驟3：將紫外線照射后的菌液稀釋涂布平板。培養(yǎng)基中只有尿素一種氮源脲酶分解尿素允許特定種類的微生物生長，并能抑制或阻止其他種類微生物生長添加高濃度蔗糖(葡萄糖)調(diào)低pH第44頁，共49頁，2023年，2月20日，星期二步驟4：根__________________________________________，篩選出突變菌。(2)上述步驟2、3和4的依據(jù)分別是______________________________________________________________________________