質(zhì)粒是基因工程中最常用的運(yùn)載體新人教課件

基因工程簡介基因工程概念別名：操作環(huán)境：水平：對象：過程：結(jié)果：基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)生物體外(對DNA剪切和拼接)DNA分子水平基因剪切——拼接——導(dǎo)入——表達(dá)產(chǎn)生出人類所需要的基因產(chǎn)物關(guān)鍵步驟一：目的基因從細(xì)胞內(nèi)提取關(guān)鍵步驟二：目的基因與運(yùn)載體DNA拼接關(guān)鍵步驟三：目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞工具：基因的剪刀——限制性內(nèi)切酶工具：基因的針線——DNA連接酶工具：基因的運(yùn)輸工具——運(yùn)載體DNA連接酶的作用過程返回運(yùn)載體條件：能在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并穩(wěn)定地保存。具有多個限制酶切點(diǎn)。具有某些標(biāo)記基因常用的運(yùn)載體種類：質(zhì)粒、噬菌體、動植物病毒質(zhì)粒的特點(diǎn)細(xì)胞染色體外能自主復(fù)制的小型環(huán)狀DNA分子；質(zhì)粒是基因工程中最常用的運(yùn)載體；存在于許多細(xì)菌及酵母菌等生物中；最常用的質(zhì)粒是大腸桿菌的質(zhì)粒；質(zhì)粒的復(fù)制只能在宿主細(xì)胞內(nèi)完成。質(zhì)粒的存在對宿主細(xì)胞無影響；基因操作的基本步驟提取目的基因目的基因與運(yùn)載體結(jié)合將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞主頁目的基因的檢測和表達(dá)提取目的基因?qū)⑿枰幕驈墓w生物的細(xì)胞內(nèi)提取出來。取出DNA用限制酶切斷DNA

目前被較廣泛提取使用的目的基因有：蘇云金桿菌抗蟲基因、人胰島素基因、人干擾素基因、種子貯藏蛋白基因、植物抗病基因等。方法1

方法2提取目的基因的方法（二）人工基因合成法逆轉(zhuǎn)錄法：以信使RNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下將脫氧核苷酸合成合成DNA(基因)。直接合成法：根據(jù)蛋白質(zhì)的氨基酸順序推算出信使RNA核苷酸順序，再據(jù)此推算出基因DNA的脫氧核苷酸順序。用游離脫氧核苷酸直接合成相應(yīng)的基因。DNA合成儀PCR擴(kuò)增儀返回目的基因與運(yùn)載體結(jié)合用與提取目的基因相同的限制酶切割質(zhì)粒使之出現(xiàn)一個切口，將目的基因插入切口處，讓目的基因的黏性末端與切口上的黏性末端互補(bǔ)配對后，在連接酶的作用下連接形成重組DNA分子。提取質(zhì)粒并用限制酶切割用連接酶將目的基因和質(zhì)粒連接返回將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞并擴(kuò)增基因工程中常用的受體細(xì)胞有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌和動植物細(xì)胞等。導(dǎo)入受體細(xì)胞常用的方法是借鑒細(xì)菌或者病毒侵染細(xì)胞的途徑。通常還要對一些受體細(xì)胞進(jìn)行增大通透性的處理(用氯化鈣處理細(xì)菌使細(xì)胞壁透性增大)。目的基因可以隨著受體細(xì)胞進(jìn)行快速的繁殖，在很短的時間內(nèi)獲得大量的基因。將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將受體細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增返回小結(jié)基因工程的基本內(nèi)容基因操作的基本步驟主頁基因操作的