農(nóng)藥生物測定田間試驗(yàn)-2023修改整理

千里之行，始于足下讓知識帶有溫度。第第2頁/共2頁精品文檔推薦農(nóng)藥生物測定田間試驗(yàn)一個新藥物的發(fā)覺,必需兩個系統(tǒng)的同時運(yùn)轉(zhuǎn)

一個系統(tǒng)是化學(xué)系統(tǒng),一個系統(tǒng)是生物學(xué)系統(tǒng)農(nóng)藥生物測定與田間藥效實(shí)驗(yàn)

西南高校植保學(xué)院

丁偉教授

聯(lián)系電話:68250218

一、農(nóng)藥室內(nèi)生物測定

1．生物測定（bioassay）

是由biological和assay組合而成，通常是指具有生理活性的物質(zhì)對某種生物產(chǎn)生效應(yīng)的一項(xiàng)測定技術(shù)。但是，從更廣的范圍來理解生物測定，則可概括為：“對生物的任何刺激所產(chǎn)生的效應(yīng)的測定,包括來自物理、化學(xué)、生物、生理及心理等方面的刺激對生物活體產(chǎn)生的反應(yīng)。”總之，生物測定是討論作用物、靶標(biāo)生物和反應(yīng)強(qiáng)度三者關(guān)系的一項(xiàng)特地技術(shù)。

2．生物測定的普通模式

3．農(nóng)藥生物測定（pesticidebioassay）

指在一定條件下利用靶標(biāo)生物測定其對某些化合物的反應(yīng)的量度，進(jìn)而鑒別某種化合物生物活性的基本技術(shù)與辦法。

靶標(biāo)生物：通常指有害生物，包括昆蟲、螨類、病菌、雜草、鼠類等。包括這些生物的整體或離體的組織、細(xì)胞等。

待測化合物：可以是已經(jīng)成為農(nóng)藥的化合物，包括殺蟲（殺螨）劑、除草劑、殺菌劑、殺鼠劑、殺線蟲劑乃至衛(wèi)生殺蟲劑等；也可以是待篩選的化合物（已知物和未知物）。

生物反應(yīng)：指靶標(biāo)生物對殺蟲、殺菌、除草等作用的反應(yīng)，可以延長為凡是干擾破壞有機(jī)體正常生長、發(fā)育、行為、代謝等效應(yīng)的反應(yīng)，如植物生長調(diào)整、昆蟲生長調(diào)整、信息傳遞物質(zhì)等。

生物反應(yīng)用死亡率、抑制率、反應(yīng)率等指標(biāo)來表示。

量度：指反應(yīng)的強(qiáng)度或者大小的指標(biāo)。要運(yùn)用特定的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以生物統(tǒng)計(jì)為工具，借助于數(shù)學(xué)的辦法，來給生物反應(yīng)以量化表達(dá)。

生物活性：指藥物或某一個化合物對生物體產(chǎn)生的效應(yīng)。假如有，則這個藥物或化合物有生物活性，假如不產(chǎn)生效應(yīng)，則這個藥物或化合物就沒有生物活性。

4．農(nóng)藥生物測定的學(xué)問體系

（1）供試對象的預(yù)備（包括靶標(biāo)生物的飼養(yǎng)技術(shù)和待測化合物的挑選）；

也包括組織培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)、藥劑配制、劑量計(jì)算等內(nèi)容

（2）生物測定的操作技術(shù)與辦法（包括室內(nèi)生測、小區(qū)試驗(yàn)和田間藥效試驗(yàn)三個方面）；（3）影響農(nóng)藥生物測定的因素分析；（藥劑、生物體、環(huán)境、操作辦法）

（4）農(nóng)藥生物測定結(jié)果的評價與表達(dá)。（數(shù)理統(tǒng)計(jì)的辦法得到一個恰當(dāng)?shù)慕Y(jié)果來描述一個效果。

5．室內(nèi)生物測定實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本原則

(1)要控制影響因素

上面我們已經(jīng)大致分析了影響農(nóng)藥生物測定的因素，因?yàn)檫@些因素?zé)o數(shù)，在不同的因素條件下會產(chǎn)生不同的效果。

設(shè)效果為y=a+b1x1+b2x2+b3x3+……．bnxn。這樣是一個復(fù)雜的偏回歸關(guān)系。這不是我們生物測定的目的，我們的目的是為了尋求生測效果與藥劑劑量之間的關(guān)系，即y=a+bx其中，y是死亡率的幾率值，而x則為劑量對數(shù)。這樣很清晰明白。假如不控制其它因素，便無法得到這一回歸式。

不過目前,已經(jīng)有人嘗試尋求多元的回歸關(guān)系,這樣可能更切合實(shí)際一些。如死亡率與溫度、時光等的關(guān)系。

（2）必需設(shè)立對比

設(shè)立對比的目的是為了消退自然因素而導(dǎo)致的試蟲死亡。對比組有幾種狀況：

空白對比：即徹低不處理或僅以清水處理

溶劑對比：即用不同有效成分的溶劑或乳化劑等作對比

標(biāo)準(zhǔn)藥劑對比：標(biāo)準(zhǔn)藥劑是指在生產(chǎn)中對某種目標(biāo)昆蟲常用的有效藥劑可用之同待測農(nóng)藥相比。

實(shí)驗(yàn)時，要按照測定的需要，挑選采納的對比。但普通狀況下，假如挑選標(biāo)準(zhǔn)藥劑對比，則還需要挑選溶劑對比和空白對比補(bǔ)充。

(3)必需設(shè)立重復(fù)

一個緣由是生物測定本身不是針對某一個昆蟲，而是對昆蟲的群體而言，是指某一個待測群體的綜合反應(yīng)，單個處理不足以反映實(shí)際狀況。

另一個緣由：從生物統(tǒng)計(jì)理論上講，增強(qiáng)重復(fù)次數(shù)，削減每個重復(fù)的生物個體是削減實(shí)驗(yàn)誤差的一個辦法。

第三：有一定的重復(fù)便于作精確的統(tǒng)計(jì)分析。

普通重復(fù)3次，每個處理20—50頭試蟲，田間實(shí)驗(yàn)的重復(fù)次數(shù)以3—5次為宜。

(4)供試的目標(biāo)生物要統(tǒng)一全都：

盡量選用農(nóng)作物病原、害蟲和雜草。應(yīng)在同一條件下飼養(yǎng)，或采自田間同一環(huán)境條件下，在生理、發(fā)育上應(yīng)盡量全都。

普通有三個條件：一是易于采集、生產(chǎn)上常見；二是易于飼養(yǎng)，便于獲得同一群體；三是繁殖力比較強(qiáng)，可提供大量供試對象。

（5）運(yùn)用生物統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果

6．毒力的表達(dá)

(1)毒力的概念：毒力是指藥劑本身對不同生物發(fā)生直接作用的性質(zhì)和程度。普通是在相對嚴(yán)格條件下，室內(nèi)用標(biāo)準(zhǔn)生物測定的藥劑對供試生物反應(yīng)的量度。

(2)藥效：是在田偶爾臨近田間的條件下所測定的藥劑對生物的作用效果。不同劑型、不同寄主植物、不同有害生物、不同的施藥辦法以及各種田間環(huán)境因素都會影響到藥效的大小。

(3)反應(yīng)率：包括全部浮現(xiàn)癥狀的反應(yīng)狀況（前面介紹的幾種狀況）

普通都是用死亡率表示；

普通死亡率。

死亡率%=死蟲數(shù)/試蟲數(shù)×100%

死亡率從廣義上應(yīng)理解為蟲口減退率。死亡率可以是正的，也可以是負(fù)的，比如處理后的蟲口可以是增強(qiáng)的。

(4)校正死亡率

為了消退自然死亡因素的影響，精確的討論和正規(guī)的試驗(yàn)結(jié)果報告要采納校正死亡率來表示。校正死亡率的計(jì)算可采納生存率，也可采納死亡率，分離如下：

校正死亡率=×100%；（1）

X=對比組生存率；Y=處理組生存率；X-Y=蟲口因藥劑處理而導(dǎo)致的死亡率。

校正死亡率={（處理組死亡率—對比組死亡率）/（1-對比組死亡率）}×100%（2）

對于公式2來說，其適用范圍是對比的自然死亡率在5%-20%之間；

5%以下時，可將處理組死亡率減去自然死亡率即可校正；

20%以上時；則表示該目標(biāo)昆蟲種群不宜供實(shí)驗(yàn)用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果不行靠。

校正死亡率表示結(jié)果很明白，但是，不相宜室內(nèi)毒力測定結(jié)果的分析，主要是不能表示在藥劑處理下，目標(biāo)昆蟲個體間的差異而引起生理效應(yīng)的變異性；也不能表示藥劑毒力相差的程度，所以單純用校正死亡率來比較毒力是很不夠的。

(5)致死中量LD50或致死中濃度LC50等

致死中量（medianlethaldose）

殺死供試?yán)ハx群體內(nèi)50%的個體所需要的劑量，單位是μg/g：微克（藥劑分量）/克（昆蟲體重），記作LD50

致死中濃度（medianlethalconcentration）

殺死供試?yán)ハx群體內(nèi)50%的個體所需要的濃度；單位常用ppm；mg/L,mg/kg(現(xiàn)在普通發(fā)表用這個)，記作LC50

致死中時（LT50）或擊倒中時（KT50）：在某種劑量或濃度下，殺死或擊倒供試?yán)ハx群體50%個體所需要的時光，單位是分鐘(min)、或小時(h)、天（d）等。

(6)求LD50和LC50的辦法

國內(nèi)外目前大多采納機(jī)率值分析法求致死中量，按照求得的LD-P線（log劑量與校正死亡率的機(jī)率值所畫出直線的簡稱）回歸式的辦法，可分為作圖法和最小二乘法，但現(xiàn)在普通采納計(jì)算器和計(jì)算機(jī)編程的辦法直接求得。

在毒力測定中需要表達(dá)的結(jié)果：

(1)求各劑量的對數(shù)值;

(2)求各劑量的死亡率所對應(yīng)的機(jī)率值

(3)按一定辦法求出回歸方程Y=a+bx

(4)求LD50，坡度b值，相關(guān)系數(shù)r

(5)對回歸方程舉行卡方檢驗(yàn)

(6)求LD50的標(biāo)準(zhǔn)誤和95%的置信限。

7．殺蟲劑生物測定

按照殺蟲劑進(jìn)入蟲體的部位及途徑的不同,殺蟲劑毒殺作用的方式可分為：胃毒、觸殺、熏蒸、內(nèi)吸、忌避、拒食、抑制生長發(fā)育、不育等方式。

內(nèi)吸殺蟲作用：凡是可以通過植物根莖葉以及種子等部位滲入植物內(nèi)部組織，隨著植物體液在植株內(nèi)傳導(dǎo)，不阻礙植物的生長發(fā)育，而對害蟲具有很高毒效的化學(xué)物質(zhì)，稱為內(nèi)吸殺蟲劑。昆蟲因?yàn)槭軆?nèi)吸殺蟲劑的毒殺作用而致死亡的過程，稱之為內(nèi)吸殺蟲作用。

8．殺菌劑的生物測定

第一個測定系統(tǒng)直接毒力測定

測定系統(tǒng)僅包括病原菌和藥劑，主要包括：對孢子萌發(fā)、菌絲生長的抑制，這種辦法又叫殺菌劑的離體生物測定。

簡單漏選一些化合物，因此，不能推斷出一種殺菌藥劑的實(shí)際應(yīng)用價值。

其次個測定系統(tǒng)病原菌-藥劑-植物

9．除草劑除草活性篩選的辦法

（1）篩選的主要程序?yàn)椋涸囼?yàn)室初篩→盆栽試驗(yàn)→田間試驗(yàn)三個步驟。

（2）初篩的模子。以高粱法+蘿卜子葉法+小球藻法（種子發(fā)芽+植株生長量+葉綠素合成量）三種方法連用可檢測全部有除草活性的化合物。

標(biāo)準(zhǔn)濃度下的施藥濃度為活性實(shí)驗(yàn)100ppm，3~4天后檢查藥效。盆栽試驗(yàn)中用藥150g/畝，2~3周后檢查藥效。其指標(biāo)有三種：株數(shù)防除率、鮮重削減率、株高抑制率。

生測試材包括單子葉植物-稗、小麥、高粱；

雙子葉植物-油菜、黃瓜、亞麻、蘿卜等。

二、田間藥效實(shí)驗(yàn)

1．田間藥效內(nèi)容

（1）以藥劑為主體的系統(tǒng)田間實(shí)驗(yàn)

田間藥效篩選；田間藥效評價；特定因子實(shí)驗(yàn)

（2）以防治對象為主體的實(shí)驗(yàn)

針對某種防治對象篩選最有效的農(nóng)藥品種，確定最佳劑量、最佳施藥次數(shù)和最佳施藥辦法。田間藥效實(shí)驗(yàn)：包括小區(qū)實(shí)驗(yàn)、大區(qū)實(shí)驗(yàn)和示范實(shí)驗(yàn)

田間藥2、田間實(shí)驗(yàn)的基本要求

（1）實(shí)驗(yàn)地的挑選

（2）實(shí)驗(yàn)小區(qū)設(shè)計(jì)（隨機(jī)區(qū)組羅列）

（3）注重影響因素

劑型、劑量、噴霧技術(shù)

防治對象

環(huán)境條件（要記錄環(huán)境條件）效試

3．調(diào)查辦法：

對角線法、大五點(diǎn)法、棋盤式法、平行線法、分行法、Z字形法等。

驗(yàn)

4．結(jié)果處理

蟲：蟲口減退率（校正）

病常以病情指數(shù)表達(dá)。

調(diào)查結(jié)果要統(tǒng)計(jì)分析

特殊是要做方差分析

普通設(shè)4個重復(fù)，統(tǒng)計(jì)分析常采納鄧肯氏多重比較檢驗(yàn)法（DMRT法）

三、農(nóng)藥的使用技術(shù)要點(diǎn)

1．使用藥物防治的前提

（1）惟獨(dú)在栽培管理措施無法有效控制病蟲草害的時候才使用農(nóng)藥（包括生長調(diào)整劑）。（2）正確診斷，對癥用藥。為了最大的獲益，最基本的是要清晰病害及其嚴(yán)峻性，特殊要明確病害的種類。

（3）使用經(jīng)過記下、批準(zhǔn)和推舉的農(nóng)藥來控制病蟲草害，沒有經(jīng)過在庇護(hù)作物上記下或者國家沒有推舉使用的農(nóng)藥要禁止在該作物上使用。

（4）要嚴(yán)格遵守使用規(guī)章和指南，根據(jù)每一種農(nóng)藥的應(yīng)用技術(shù)和使用說明舉行操作。（5）對使用的農(nóng)藥要精確記錄其有效成分、產(chǎn)品特性、施用量及施用日期。

（6）恰當(dāng)運(yùn)用農(nóng)藥的輪換和混配技術(shù)，以避開病蟲對農(nóng)藥產(chǎn)生抗藥性。

（7）明確每種藥物的毒性特點(diǎn)，嚴(yán)格根據(jù)平安間隔期和推舉劑量、次數(shù)施藥，時刻注重殘留動態(tài)，必需將農(nóng)藥殘留控制在規(guī)定的范圍內(nèi)。

2．正確把握施藥時期

害蟲，應(yīng)挑選最易殺損害蟲，并能有效控制為害的階段舉行施藥。對食葉害蟲和刺吸式口器害蟲普通應(yīng)在低齡幼蟲、若蟲盛發(fā)期防治為好，如煙青蟲的施藥一定在卵孵化后到幼蟲3齡之前施藥；對鉆蛀性害蟲普通應(yīng)在卵孵化盛期防治為好。

病害，對于病害來說，易感病的生育期都是防治相宜時期。但流行性病害的防治要注重在病害還沒有大規(guī)模流行之前施藥舉行預(yù)防。病害控制一定要樹立預(yù)防為主的思想，預(yù)防要結(jié)合

實(shí)際狀況，并不是普防。

雜草，以種子繁殖的雜草，在幼芽或幼苗期對除草劑比較敏感。因此，這一時期就作為防除雜草的適期。

煙草，藥劑對作物的平安性是確定施藥適期的先決條件，一旦發(fā)生病蟲害，使用藥劑要在確保作物本身平安的前提下舉行控制，不能造成藥害。

按照病蟲草種類和農(nóng)藥的性能選用適當(dāng)?shù)钠贩N，做到對癥下藥，農(nóng)藥惟獨(dú)被正確使用時才干有助于控制病蟲害。

病、蟲、草害的種類無數(shù)，各地差異很大。在舉行防治之前，要明確防治對象的特點(diǎn)，恰當(dāng)用藥。例如，煙草細(xì)菌性病害的防治，在北方一些煙區(qū)有效的藥劑在南方不一定有效。

如黑脛病和青枯病都是煙草的根莖病害，假如沒有分清是細(xì)菌性病害還是真菌性病害就來施藥，結(jié)果絕對是不抱負(fù)的。

4．濃度和用量要適當(dāng)

嚴(yán)格根據(jù)推舉劑量。

因此要防止盲目加大藥劑濃度和藥量，防止定期普遍施藥，避開配藥時不稱不量，順手倒藥的不合理做法。如采納移栽靈預(yù)防黑脛病，每畝15ml就可以了，但一些農(nóng)夫覺得用藥少了，效果就可能不好，于是每畝用了25ml，最后導(dǎo)致一些煙苗浮現(xiàn)嚴(yán)峻的藥害。

5．充分利用防治閾值挑選合適防治時期

防治閾值有時又叫經(jīng)濟(jì)閾值，是指防治成本與危害造成的損失相等的程度。

假如危害比防治成本高，就要舉行防治，假如危害損失不及防治成本，就可以考慮不舉行防治。

對病害來說，大多數(shù)狀況下施藥時期偏晚，往往在病害流行期后才被引起重視，此時開頭施藥大多數(shù)防病保產(chǎn)效果不抱負(fù)。

6．均衡施藥

藥劑惟獨(dú)勻稱周到的分布在植物或病蟲表面，才干取得良好的防治效果，假如不勻稱施藥，一方面可能導(dǎo)致局部地方藥量太多，簡單造成藥害；另一方面一些地方由于沒有藥劑而導(dǎo)致不能有效控制病蟲草害。因此，施