組織胚胎學(xué)2014緒論人衛(wèi)7版

組織胚胎學(xué)2014緒論人衛(wèi)7版第1頁/共32頁一、組織學(xué)的研究內(nèi)容

組織學(xué)（histology）：研究機(jī)體微細(xì)結(jié)構(gòu)及其

相關(guān)功能的科學(xué)。組織上皮組織結(jié)締組織肌肉組織神經(jīng)組織細(xì)胞細(xì)胞間質(zhì)器官和系統(tǒng)（細(xì)胞外基質(zhì)）第2頁/共32頁細(xì)胞：是機(jī)體形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能的基本單位。組織：由細(xì)胞和細(xì)胞間質(zhì)(又稱細(xì)胞外基質(zhì))

組成的群體結(jié)構(gòu)，是構(gòu)成機(jī)體器官的基本成分。器官：具有一定的形態(tài)結(jié)構(gòu)，并執(zhí)行特定的生理功能。系統(tǒng)：由一些結(jié)構(gòu)連續(xù)、功能相關(guān)的器官組合而成，完成連續(xù)的生理活動(dòng)。細(xì)胞-組織-器官-系統(tǒng)第3頁/共32頁人體器官分類－組織學(xué)特征實(shí)質(zhì)性器官中空性中央：大空腔表面：被模如：消化腺、淋巴器官、內(nèi)分泌腺、腎臟等。如：心血管、消化管、呼吸道等內(nèi)部：實(shí)質(zhì)－行使功能管壁：分3?4層第4頁/共32頁組織學(xué)結(jié)構(gòu)觀察組織學(xué)結(jié)構(gòu)光鏡結(jié)構(gòu)－用光學(xué)顯微鏡觀察的結(jié)構(gòu)（LM）(lightmicroscope,LM簡稱光鏡)電鏡結(jié)構(gòu)－電子顯微鏡下觀察的結(jié)構(gòu)（EM）(electronmicroscope,EM簡稱電鏡）又稱超微結(jié)構(gòu)(ultrastructure)

第5頁/共32頁二、組織學(xué)的研究方法和常用技術(shù)

(一)光學(xué)顯微鏡技術(shù)

1、常用組織切片標(biāo)本制備技術(shù)

石蠟切片術(shù)①取材和固定;②脫水和包埋;③切片和染色;④封片。其他；火棉膠包埋,冰凍切片,

涂片,鋪片,磨片等

第6頁/共32頁

蘇木精

伊紅

堿性染料酸性染料

染成紅色

（嗜酸性）細(xì)胞核中的染色質(zhì)、細(xì)胞質(zhì)中的核糖體

細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞間質(zhì)成份

染成藍(lán)色（嗜堿性）常用染色方法：HE染色（Hematoxylin）（Eosin）HE染色第7頁/共32頁嗜堿性：可使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的核糖體等結(jié)構(gòu)染成藍(lán)紫色。嗜酸性：可使多數(shù)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)染成粉紅色。中性：與兩種染液親合力都不強(qiáng)。組織結(jié)構(gòu)的嗜色性嗜堿性嗜酸性第8頁/共32頁

A嗜銀性B嗜鉻性C異染性其它染色方法第9頁/共32頁普通光學(xué)顯微鏡是觀察組織細(xì)胞微細(xì)結(jié)構(gòu)最常用的工具，分為光學(xué)部分機(jī)械部分起放大作用光鏡的分辨率約為0.2μm可放大1500倍左右（lightmicroscope，LM）第10頁/共32頁幾種特殊顯微鏡術(shù)

（1）相差顯微鏡

(phasecontrastmicroscope)用于觀察生活細(xì)胞和末經(jīng)染色細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。

神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)第11頁/共32頁(2)

熒光顯微鏡(fluorescencemicrscope)

是用以觀察細(xì)胞、組織內(nèi)熒光物質(zhì)的分布。

神經(jīng)球第12頁/共32頁

(二)

共焦激光掃描顯微鏡

共焦激光掃描顯微鏡(confocallaserscanningmicroscope，CLSM)

由激光光源、共焦成像掃描系統(tǒng)、電子光學(xué)系統(tǒng)和微機(jī)圖象分析系統(tǒng)四部份構(gòu)成?？蓪?duì)樣品進(jìn)行斷層掃描重建三維圖像，進(jìn)行體視學(xué)分析；測定細(xì)胞內(nèi)pH、鈣濃度等；更精確地檢測、識(shí)別，組織細(xì)胞的微細(xì)結(jié)構(gòu)及其變化。CLSM又稱細(xì)胞CT。CLSM第13頁/共32頁CLSM圖像HumanneuronalprecursorcellsCLSM海馬MR、GR共存第14頁/共32頁

(三)電子顯微鏡技術(shù)

（electronmicroscope,EM）

透射電鏡(transmissionelectronmicroscope,TEM)

觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)分辨率為0.1-0.2nm,可放大幾萬－幾十萬倍掃描電鏡（scanningelectronmicroscope,SEM)

觀察組織或細(xì)胞表面的立體結(jié)構(gòu)冰凍蝕刻（freezeetchingmethod）觀察細(xì)胞斷裂表面形態(tài)結(jié)構(gòu)分析電鏡X–射線顯微分析術(shù)（X–raymicroanalysis）研究細(xì)胞、組織內(nèi)元素種類分布和含量第15頁/共32頁透射電鏡與照片TEM淋巴細(xì)胞第16頁/共32頁掃描電鏡與照片SEMSEM1.纖毛2.微絨毛第17頁/共32頁冰凍蝕刻細(xì)胞

冷凍斷裂腎小球右下線粒體

冰凍蝕刻照片第18頁/共32頁分析電鏡－X線微區(qū)分析圖片分析電鏡X線微區(qū)分析第19頁/共32頁糖類顯示法－PAS反應(yīng)：過碘酸—希夫反應(yīng)(periodicacidSchiffreaction，PAS)：檢測組織或細(xì)胞中有無多糖存在。

原理：多糖PA氧化醛Schiff試劑紫紅色沉淀(四)組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)技術(shù)

PAS反應(yīng)陽性部位即表示多糖和蛋白多糖的存在

PAS陽性小腸上皮第20頁/共32頁組織細(xì)胞化學(xué)染色圖片酶細(xì)胞化學(xué)神經(jīng)元ACP酶陽性

脂類顯示法

蘇丹Ⅲ

脂類顯示法

蘇丹Ⅲ

鋨酸

髓鞘染色

核酸顯示法第21頁/共32頁

利用抗原（antigen,Ag），抗體（antibody）特異結(jié)合的原理，用已知抗體檢測未知抗原的一種方法。免疫細(xì)胞化學(xué)原理第22頁/共32頁免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)記物第23頁/共32頁免疫細(xì)胞化學(xué)－PAP法第24頁/共32頁免疫細(xì)胞化學(xué)－ABC法第25頁/共32頁(五)免疫組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)免疫組織化學(xué)術(shù)(immunohistochemistry)是將免疫學(xué)原理與組織化學(xué)技術(shù)相結(jié)合建立的新技術(shù)，根據(jù)抗原與抗體特異性結(jié)合的特點(diǎn)，檢測組織細(xì)胞內(nèi)某種多肽、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)的存在與分布。

人鼻粘膜上皮棘細(xì)胞細(xì)胞間橋TM陽性第26頁/共32頁(六)原位雜交術(shù)原位雜交(insituhybridization)是一種敏感性高、特異性強(qiáng)的，能在組織細(xì)胞原位進(jìn)行的核酸分子雜交技術(shù)。常用的標(biāo)記物有兩種：1、放射性同位素，如3H、14C、

32P、35S、125I，2、為非放射性物質(zhì)，如地高辛等。

非放射性原位雜交海馬GAP－43mRNA第27頁/共32頁(七)放射自顯影術(shù)放射自顯影術(shù)(autoradiograph)旨在追蹤某些物質(zhì)在體內(nèi)、組織或細(xì)胞中的分布與代謝徑路。放射自顯影

甲狀腺125I同位素注入取材制標(biāo)本涂核乳膠暗室曝光顯影、定影染色LM觀察第28頁/共32頁(八)組織培養(yǎng)和組織工程組織工程基本方法示意圖A獲取組織B分離、培養(yǎng)種子細(xì)胞C制備三維支架D將種子細(xì)胞種植于支架E將細(xì)胞-支架復(fù)合物植入組織缺損處細(xì)胞培養(yǎng)－神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)第29頁/共32頁

(九)組織細(xì)胞定量術(shù)1．顯微分光光度術(shù)應(yīng)用顯微分光光度計(jì)(microspectrophotometer)對(duì)組織和細(xì)胞內(nèi)化學(xué)成分進(jìn)行定量分析。

2．形態(tài)計(jì)量術(shù)運(yùn)用