羅氏系統(tǒng)特點(diǎn)及應(yīng)用方向

LightCycler?480實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)及其應(yīng)用

——精準(zhǔn)源于設(shè)計(jì)，極速出自創(chuàng)新

羅氏應(yīng)用科學(xué)部現(xiàn)在是1頁\一共有25頁\編輯于星期日實(shí)時(shí)定量PCR儀發(fā)展簡史1985KaryMullis

發(fā)明了PCR技術(shù)1991Hoffmann-LaRoche公司獲得全球PCR專利權(quán)1993羅氏分子系統(tǒng)公司RussellHiguchi發(fā)明實(shí)時(shí)定量PCR儀1993KaryMullis因發(fā)明PCR技術(shù)而獲得諾貝爾化學(xué)獎1995羅氏診斷公司推出后來成為PCR診斷行業(yè)金標(biāo)準(zhǔn)的COBASAmplicor?分析儀1999羅氏診斷公司應(yīng)用科學(xué)部推出LightCycler?全自動實(shí)時(shí)定量PCR系統(tǒng)2005LightCycler?全自動實(shí)時(shí)定量PCR系統(tǒng)全球銷量突破5000臺，成為全球銷量最大的單型號實(shí)時(shí)定量PCR系統(tǒng)2005LightCycler?480實(shí)時(shí)定量PCR儀器上市2007目前至今，羅氏診斷公司擁有PCR相關(guān)專利上千項(xiàng)，占全球PCR專利的90%以上?，F(xiàn)在是2頁\一共有25頁\編輯于星期日

LightCycler?1.0

Instrument32320SamplenumberDetectionchannelsSamplevolume[μl]

LightCycler?1.5

Instrument32320

LightCycler?480Instruments(I,II)96/3845/6

10-100/5-2019982003

2005/20082004

LightCycler?2.0Instruments32620/100BreakthroughtohigherThroughputLightCycler?

系統(tǒng)發(fā)展回顧ADecadeofReal-TimePCRSpeedandPerformance現(xiàn)在是3頁\一共有25頁\編輯于星期日儀器試劑盒預(yù)制探針可更換溫控模塊多孔板模塊化軟件LightCycler?480熒光定量PCR系統(tǒng)：系統(tǒng)構(gòu)成現(xiàn)在是4頁\一共有25頁\編輯于星期日LightCycler?480熒光定量PCR系統(tǒng)獨(dú)有的Therma-BaseTM技術(shù)提升導(dǎo)熱效率，提高孔間溫度均一性銀質(zhì)散熱塊加快降溫速度加長光路系統(tǒng)改進(jìn)光學(xué)檢測的邊緣效應(yīng)快速，高效，均一，無需內(nèi)參創(chuàng)新的技術(shù)改良以獲得業(yè)內(nèi)最好的性能現(xiàn)在是5頁\一共有25頁\編輯于星期日微孔板模塊（銀制）Peltier半導(dǎo)體加熱單位

冷卻裝置（銀制）熱蓋溫度高度均一性，孔間溫度的精確度±0.1℃快速冷卻和加熱速度

(Heating:(4.8)°C/s-Cooling:(2.5)°C/s)整個板的精確PCR結(jié)果

96孔模式<1hour384孔模式<40minTherma-BaseTM

溫控系統(tǒng)構(gòu)成現(xiàn)在是6頁\一共有25頁\編輯于星期日多孔板座Therma-Base層散熱鰭封閉的真空夾層，內(nèi)壁為燈芯式結(jié)構(gòu)，存貯工作液通過蒸發(fā)和凝結(jié)過程快速傳熱

→使得PCR循環(huán)快速而精確!Peltier元件LightCycler?480熒光定量PCR儀散熱元件：Therma-Base

現(xiàn)在是7頁\一共有25頁\編輯于星期日LightCycler?480普通實(shí)時(shí)定量PCR儀熱均一性不同儀器比較現(xiàn)在是8頁\一共有25頁\編輯于星期日LightCycler?480熒光定量PCR儀溫控系統(tǒng)無Therma-Base有Therma-Basemdr1-e26*cyp2C9-e3*cyp2C9-e7*熱均一性對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響溫控的均一性保證了各個反應(yīng)樣品擴(kuò)增的均一性，極大降低了檢測誤差率！現(xiàn)在是9頁\一共有25頁\編輯于星期日快速循環(huán)模式更快地升降溫，提高反應(yīng)速度，縮短反應(yīng)進(jìn)行的時(shí)間單位時(shí)間內(nèi)檢測的工作量增大，實(shí)現(xiàn)更加快速的結(jié)果檢測！現(xiàn)在是10頁\一共有25頁\編輯于星期日快速循環(huán)模式更快地升降溫，縮短了可能的非特異性結(jié)合，提高PCR的特異性Amplificationofa536bp-globinfragmentfromgenomicDNA

Time(hr)SampleTemperature(°C)GelAnalysisTimefor30Cycles(hr)TemperatureProfiles536bp利于PCR體系的優(yōu)化！現(xiàn)在是11頁\一共有25頁\編輯于星期日典型的96孔板式的頂部光路系統(tǒng)CCD相機(jī)光源由于光程差,激發(fā)光從頂部發(fā)出到達(dá)每孔的強(qiáng)度不一樣，中心強(qiáng)度高于邊緣，需要加入內(nèi)參照來校正光密度不一樣光學(xué)系統(tǒng)–頂部照射產(chǎn)生的邊緣效應(yīng)現(xiàn)在是12頁\一共有25頁\編輯于星期日濾鏡輪CCD相機(jī)多孔板物鏡利用優(yōu)化的光學(xué)檢測元件（液態(tài)光導(dǎo)元件，光通路元件,濾光片和冷CCD光通路元件）將激發(fā)光源通過液態(tài)光導(dǎo)元件后變成均一的適合微孔板形狀的光線

均一的激發(fā)和檢測，無光程差

無需內(nèi)參照熒光校正（ROX）采用折疊光路增加光程，降低激發(fā)高度LightCycler?

480

光路系統(tǒng)氙燈CCD相機(jī)5個激發(fā)通道6個檢測通道

優(yōu)化光學(xué)組件排列設(shè)計(jì)均一的激發(fā)及檢測過程現(xiàn)在是13頁\一共有25頁\編輯于星期日LightCycler?

480一大特色就是：從來無需內(nèi)參染料數(shù)據(jù)生成(熱循環(huán)模塊)數(shù)據(jù)檢測(光學(xué)系統(tǒng))數(shù)據(jù)分析(軟件系統(tǒng))每一個步驟都足夠準(zhǔn)確！內(nèi)參染料現(xiàn)在是14頁\一共有25頁\編輯于星期日UPLprobes1010–100copiesLightCycler?480與臨床檢測

定量：動態(tài)范圍無論是強(qiáng)陽性樣品還是弱陽性樣品均能輕松同時(shí)檢測！現(xiàn)在是15頁\一共有25頁\編輯于星期日LightCycler?480與基因表達(dá)調(diào)控

微量樣品的區(qū)分精確區(qū)分1000拷貝與2000拷貝置信度達(dá)到99.8%是同類儀器的5倍以上

（其他5000拷貝和10000拷貝）高分辨率有助于對于樣品的精細(xì)分析！現(xiàn)在是16頁\一共有25頁\編輯于星期日LightCycler?480與基因表達(dá)調(diào)控

微量樣品的定量檢測性能微量樣品基因表達(dá)調(diào)控分析干細(xì)胞研究、激光顯微切割…以microRNA的qPCR檢測性能為例：在LightCycler?480上檢測1、5、10、50個細(xì)胞的microRNA表達(dá)差異，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與預(yù)期結(jié)果很好地吻合即使是微量樣品的檢測分析也是輕松自如！現(xiàn)在是17頁\一共有25頁\編輯于星期日96SamplesR/R:wildtype

CGG/CGGR/W:wt/mut2

(CGG)/(TGG)R/Q:wt/mut1

(CGG)/(CAG)Q/Q:mutant1

(CAG)/(CAG)W/W:mutant2

(TGG)/(TGG)LightCycler?480性能

兩個鄰近

SNP的區(qū)分現(xiàn)在是18頁\一共有25頁\編輯于星期日可互換的熱循環(huán)模塊自己動手DIY，快速方便隨機(jī)附送裝載箱，便于更換模塊無需廠家工程師在場無需重新校準(zhǔn)更換完畢后儀器自動檢測并確認(rèn)模塊型號LightCycler?480熒光定量PCR儀

96孔模塊與384孔模塊互換現(xiàn)在是19頁\一共有25頁\編輯于星期日

結(jié)合MagNAPure2.0全自動核酸提取系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)更短的實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)換時(shí)間優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)和數(shù)據(jù)處理流程2小時(shí)內(nèi)完成從核酸純化到PCR鑒定的所有工作，而傳統(tǒng)流程需要6小時(shí)甚至一個工作日LightCycler?480熒光定量PCR系統(tǒng)

和全自動核酸提取系統(tǒng)聯(lián)用現(xiàn)在是20頁\一共有25頁\編輯于星期日LightCycler?480熒光定量PCR系統(tǒng)

結(jié)合自動機(jī)械臂實(shí)現(xiàn)自動裝板E.g.,TwisterIIPlateHandler(CaliperLifeScience)現(xiàn)在是21頁\一共有25頁\編輯于星期日可配機(jī)械臂，自動化分液裝置可配備讀碼器可配備LIMS可配備全自動的PCRworkflow系統(tǒng)試劑選擇范圍廣LightCycler?480熒光定量PCR儀：與自動化流程整合現(xiàn)在是22頁\一共有25頁\編輯于星期日LightCycler?480熒光定量PCR系統(tǒng)

全能

可更換熱循環(huán)模塊：96384可采用多種樣品數(shù)及體積：96（10-100μl）；384（5-20μl）用不同光學(xué)濾鏡組合可檢測多種熒光染料：6個檢測通道可選多種檢測模式：適用目前所有的檢測模式方便強(qiáng)大的軟件工具模塊化軟件高速快速熱循環(huán)：

Heating:(4.8)°C/s-Cooling:(2.5)°C/s高性能試劑定制耗材現(xiàn)在是