微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件

醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室規(guī)則一.進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿白大衣,不必需的物品不要攜帶入室。二.保持實(shí)驗(yàn)室的安靜和秩序,實(shí)驗(yàn)要嚴(yán)肅認(rèn)真。三.如有傳染性材料的污染,及時(shí)報(bào)告老師。四.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中有儀器和器材的損壞要報(bào)告老師并登記。五.實(shí)驗(yàn)后的材料要放到指定的位置。六.離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室前,要用肥皂洗手,接觸過(guò)傳染性強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)材料要用0.1%的新潔爾滅泡手1-2分鐘七.值日生要作好值日工作,關(guān)好水,電,門(mén)窗,作好實(shí)驗(yàn)記錄本的登記方可離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室。目的要求:1、了解微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用消毒滅菌儀器設(shè)備2、了解空氣、皮膚細(xì)菌檢查方法3、掌握藥品的微生物學(xué)檢驗(yàn)程序和方法實(shí)驗(yàn)一藥品的微生物限度檢查（一）實(shí)驗(yàn)室常用消毒滅菌設(shè)備空氣和皮膚細(xì)菌檢查方法一.藥品的微生物限度檢查（一）1.口服藥物的微生物檢查:①大腸桿菌的檢查：②細(xì)菌總數(shù)的檢查2.外用藥物的微生物檢查:①綠膿桿菌的檢查：②金黃色葡萄球菌的檢查：

將剩余口服藥以10-110-210-310-4進(jìn)行稀釋(以生理鹽水稀釋)

3.細(xì)菌總數(shù)測(cè)定加溶化的瓊脂培養(yǎng)基中，混勻，冷卻后,置37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)

。取三個(gè)中試管各管加9ml生理鹽水從剩余10ml懸液中取1ml加入第一個(gè)稀釋管中1ml10-110-410-210-39ml生理鹽水從上述三個(gè)稀釋管中各取1ml1ml10-110-410-210-3二.空氣、皮膚細(xì)菌檢查方法(驗(yàn)證)三.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用消毒滅菌儀器設(shè)備：高壓蒸汽滅菌鍋消毒煮沸器G6玻璃濾菌器裝置潔凈工作臺(tái)移動(dòng)式紫外光燈鼓風(fēng)式干烤箱紫外線(xiàn)殺菌標(biāo)本。厭氧工作站催化劑（鈀粒）厭氧培養(yǎng)罐電熱恒溫培養(yǎng)箱二氧化碳培養(yǎng)箱取出前次實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)物觀察：1.口服藥物1)細(xì)菌鑒定：在膽鹽乳糖增菌液中有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)：增菌液變混濁―――――有-----接種在伊紅美蘭瓊脂平板培養(yǎng)基上面。方法：分區(qū)劃線(xiàn)接種。2)細(xì)菌總數(shù)測(cè)定：選擇30-300個(gè)菌落平板，細(xì)菌總數(shù)＝菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)藥物的微生物限度檢查方法（二）2.外用藥1)判定膽鹽乳糖增菌液培養(yǎng)物及亞碲酸鈉增菌液培養(yǎng)物有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)：增菌液變混濁―――有2)細(xì)菌鑒定：（1）將膽鹽乳糖增菌液培養(yǎng)物無(wú)菌接種在16烷三甲基溴化胺瓊脂斜面培養(yǎng)基上面。方法：斜面化線(xiàn)接種；（2）將亞碲酸鈉增菌液培養(yǎng)物，無(wú)菌接種在卵黃高鹽瓊脂平板培養(yǎng)基上面。方法：分區(qū)劃線(xiàn)接種。37℃恒溫孵育箱24小時(shí)培養(yǎng)后，觀察結(jié)果。分區(qū)劃線(xiàn)法斜面移種技術(shù)菌苔液體移種技術(shù)細(xì)菌基本形態(tài)球菌桿菌螺形菌葡萄球菌鏈球菌枯草桿菌霍亂弧菌細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)鞭毛莢膜芽孢一、目的要求:1、了解細(xì)菌的生長(zhǎng)現(xiàn)象及代謝產(chǎn)物的觀察2、掌握藥品的微生物學(xué)檢驗(yàn)程序和方法二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.藥物的微生物限度檢查（三）2.細(xì)菌的生長(zhǎng)現(xiàn)象及代謝產(chǎn)物的觀察 1）液體培養(yǎng)基---沉淀、渾濁、表面生長(zhǎng)現(xiàn)象。 2）三葡、三鏈、大腸與副傷乙培養(yǎng)基的菌落特征、溶血環(huán)觀察。3）雙糖含鐵培養(yǎng)基---動(dòng)力、氣體、硫化氫、分解乳糖觀察。 4）結(jié)核桿菌菌落的觀察。 3.中草藥、抗生素抑菌試驗(yàn)1）中草藥---大蒜汁、黃連、黃芩、黃柏。2）抗生素---青霉素、慶大、氨芐、新諾明、生理鹽水。實(shí)驗(yàn)三

藥品的微生物限度檢查（三）微生物的形態(tài)學(xué)檢查及藥物的敏感性試驗(yàn)

1）從伊紅美蘭瓊脂平板培養(yǎng)基上-----挑取黑色帶有金屬光澤的濕潤(rùn)菌落，接種在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上面，進(jìn)行細(xì)菌的純培養(yǎng)。2）觀察外用藥物在16烷三甲基溴化胺瓊脂斜面培養(yǎng)基上生長(zhǎng)狀況。記錄被檢菌色素的溶解性質(zhì)、液化明膠的狀況及菌苔粘稠度等。

革蘭氏染色鏡下觀察其菌落形態(tài)。根據(jù)上述被檢菌落的生物性質(zhì)和狀況及細(xì)菌形態(tài)，確定該被檢菌的名稱(chēng)。3）從卵黃高鹽瓊脂平板培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，挑取黃色的濕潤(rùn)菌落，接種在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上面，進(jìn)行細(xì)菌的純培養(yǎng)。藥物的微生物限度檢查（三）革蘭染色步驟

1.制片：取標(biāo)本（球桿混合物、牙垢）涂片、干燥、固定2.初染：結(jié)晶紫——1min——水洗3.媒染：碘液——1min——水洗4.脫色：95%酒精——30s——水洗5.復(fù)染：沙黃——1min—水洗、濾紙吸干6.油鏡觀察：1、制片

涂片、干燥、固定2.結(jié)晶紫初染1min——水洗3.碘液媒染1min——水洗4.95%酒精脫色30s——水洗5.沙黃復(fù)染1min——水洗、濾紙吸干6.油鏡觀察

結(jié)果革蘭陽(yáng)性菌：紫色革蘭陰性菌：紅色3.中草藥、抗生素抑菌試驗(yàn)紙片法實(shí)驗(yàn)四藥物的微生物限度檢查（四）病毒和細(xì)菌及其他病原微生物一、目的要求1、了解抗酸染色方法及各種病毒和細(xì)菌的菌落形態(tài)2、掌握藥品的微生物學(xué)檢驗(yàn)程序和方法二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、藥物的藥物的微生物限度檢查（四）1）將口服藥物中的細(xì)菌分別接種：①蛋白胨水培養(yǎng)基；②葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基；③枸櫞酸鹽（西蒙氏）培養(yǎng)基。同時(shí)接種產(chǎn)氣桿菌于上述培養(yǎng)管做對(duì)照，以備進(jìn)行IMViC試驗(yàn)。2）取接種在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上面的外用藥物中細(xì)菌進(jìn)行血漿凝固酶檢測(cè),依據(jù)其反應(yīng)結(jié)果,確定該菌的性質(zhì)及名稱(chēng)。2、抗酸染色 3、真菌培養(yǎng)物的觀察------黑曲霉、木霉、青霉菌菌落，白色念珠菌假菌絲，酵母菌菌落的觀察。4、記錄中草藥、抗生素抑菌試驗(yàn)結(jié)果5、流感病毒的血球凝集試驗(yàn) 6、觀察雞胚的結(jié)構(gòu) 7、抗“O”試驗(yàn) 生化反應(yīng)管待檢細(xì)菌對(duì)照菌(產(chǎn)氣桿菌)蛋白胨水培養(yǎng)基2支管接種1支管接種1支管葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基4支管接種2支管接種2支管枸櫞酸鹽培養(yǎng)基2支管接種1支管接種1支管接種細(xì)菌的對(duì)應(yīng)生化反應(yīng)管制片（涂片、干燥、固定）；石炭酸復(fù)紅初染（加熱、

蓋濾紙片）5min---水洗；3％鹽酸酒精脫色（15S,水洗）；美蘭復(fù)染（1min，水洗）-濾紙吸干鏡檢。抗酸染色步驟結(jié)核桿菌抗生素體外抑菌試驗(yàn)（二）

記錄紙片法結(jié)果測(cè)量抑菌環(huán)直徑

病毒的分離培養(yǎng)—雞胚接種動(dòng)物接種雞胚培養(yǎng)組織細(xì)胞培養(yǎng)病毒的培養(yǎng)方法：病毒的分離培養(yǎng)—雞胚接種病毒名稱(chēng)接種部位雞胚胚齡（天）痘類(lèi)病毒絨毛尿囊膜10～13流感、副流感、腮腺炎病毒尿囊9～11嗜神經(jīng)病毒卵黃囊5～8初次分離標(biāo)本羊膜腔10～12病毒的分離培養(yǎng)—雞胚培養(yǎng)菌絲大分生孢子小分生孢子白念珠菌

新型隱球菌青霉煙曲霉黃曲霉曲霉實(shí)驗(yàn)五藥物的微生物限度檢查（五）一、目的要求掌握藥品的微生物學(xué)檢驗(yàn)程序和方法二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容以生化反應(yīng)（IMViC）檢測(cè)口服藥中細(xì)菌的性質(zhì)。---------------------------------------------------試驗(yàn)培養(yǎng)基加試劑試驗(yàn)結(jié)果大腸埃希菌產(chǎn)氣桿菌吲哚(I)蛋白胨水2管苯甲醛試劑0.5ml(5滴)紅陽(yáng)性（+）無(wú)色變陰性（-）甲基紅(M