微生物學(xué)實驗普通光學(xué)顯微鏡的使用及細菌形態(tài)的觀察

實驗一

普通光學(xué)顯微鏡的使用及細菌形態(tài)的觀察主講:文晴生命科學(xué)學(xué)院目前一頁\總數(shù)十八頁\編于十八點實驗課要求作圖要求：實驗報告要求用藍色或黑色鋼筆、圓珠筆或簽字筆撰寫，要求用鉛筆作圖（包括視野、觀察結(jié)果、放大倍數(shù)等；值日要求：每四人一組，包括物品歸位、黑板、地面、臺面等，值日結(jié)束后經(jīng)老師同意方可離開。4/27/2023目前二頁\總數(shù)十八頁\編于十八點一、實驗?zāi)康牧私怙@微鏡的構(gòu)造和各部分的作用，掌握顯微鏡的使用方法學(xué)習(xí)并掌握油鏡的原理和使用方法了解并觀察細菌的三種基本形態(tài)目前三頁\總數(shù)十八頁\編于十八點目鏡鏡筒轉(zhuǎn)換器物鏡通光孔聚光器壓片夾反光鏡鏡座粗準(zhǔn)焦螺旋細準(zhǔn)焦螺旋鏡臂鏡柱載物臺機械部分和光學(xué)部分普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造可分為兩部分：一、普通光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)目前四頁\總數(shù)十八頁\編于十八點二、實驗原理：顯微鏡的工作原理◆物鏡上的標(biāo)識

顯微鏡的總放大倍數(shù)=物鏡放大倍數(shù)X目鏡放大倍數(shù)目前五頁\總數(shù)十八頁\編于十八點油鏡的放大倍數(shù)可達100×，放大倍數(shù)這樣大的鏡頭，焦距很短，直徑很小，但所需要的光照強度卻最大。由低倍鏡轉(zhuǎn)為高倍鏡時，通過增加照明強度和開大虹彩光圈，以增大高倍鏡及油鏡下視野的亮度。目前六頁\總數(shù)十八頁\編于十八點

從標(biāo)本玻片透過來的光線，因介質(zhì)密度不同（從玻片進入空氣，再進入鏡頭），有些光線會因折射或全反射，不能進入鏡頭，致使在使用油鏡時會因射入的光線較少，物像顯現(xiàn)不清。為了不使通過的光線有所損失，在使用油鏡時需在油鏡和玻片之間加入與玻璃的折射率相仿的鏡油（通常使用香柏油，其折射率n=1.52）。增加了視野的進光量，從而使物象更加清晰。目前七頁\總數(shù)十八頁\編于十八點顯微鏡的分辨率或分辨力（resolutionorresolvingpower）是指顯微鏡能辨別兩點之間最小距離的能力。從物理學(xué)角度看，光學(xué)顯微鏡的分辨率受光的干涉現(xiàn)象及所用物鏡性能的限制，可表示為：式中：D=顯微鏡分辨兩點間的最短距離λ=光波波長（平均0.55m)

NA=物鏡的數(shù)值孔徑值?！麸@微鏡的性能目前八頁\總數(shù)十八頁\編于十八點

數(shù)值孔徑則取決于物鏡的鏡口角和玻片與鏡頭間介質(zhì)的折射率，可表示為：NA=n·sin(α/2）

n:物鏡和被檢標(biāo)本間介質(zhì)的折射率：鏡口角。物質(zhì)折射率物質(zhì)折射率空氣1亞麻油1.47水1.33石蠟油1.487甘油1.487香柏油1.515玻璃1.52丁香油1.535冬青油1.536濃松節(jié)油1.542以香柏油為介質(zhì)的油鏡所能達到的數(shù)值孔徑（NA一般在1.2～1.4）要高于低倍鏡、高倍鏡等物鏡（NA都低于1.0）。數(shù)值孔徑通常在0.65左右的高倍鏡只能分辨距離不小于0.4μm的物體，而油鏡的分辨率卻可達到0.2μm左右。目前九頁\總數(shù)十八頁\編于十八點三、實驗器材1、標(biāo)本片：四聯(lián)球菌、枯草芽孢桿菌2、試劑：香柏油、二甲苯3、儀器及其它用具：顯微鏡、擦鏡紙等目前十頁\總數(shù)十八頁\編于十八點四、實驗步驟

1、顯微觀察步驟

1）低倍鏡觀察（10×）：

2）高倍鏡觀察（40×）：

3）油鏡觀察（100×）：2、顯微鏡用畢后的處理目前十一頁\總數(shù)十八頁\編于十八點低倍鏡的操作右手握住鏡臂，左手拖住鏡座，將顯微鏡放在自己身體的前方，離實驗臺邊緣10cm左右處；接通電源，打開顯微鏡電源開關(guān)；3.旋動轉(zhuǎn)換器，將低倍鏡移到鏡筒正下方；4.調(diào)節(jié)光源強度，同時用眼對準(zhǔn)目鏡，仔細觀察，視野亮度均勻；5.將標(biāo)本放在載物臺上，旋轉(zhuǎn)推動器，使觀察的目的物置于圓孔的正中央；6.轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋，上升載物臺至距離物鏡約0.5cm（注意：眼睛注視物鏡，以防物鏡和載玻片相碰）；7.左眼觀察目鏡，調(diào)節(jié)粗、細準(zhǔn)焦螺旋直至目的物清晰為止。目前十二頁\總數(shù)十八頁\編于十八點高倍鏡的操作轉(zhuǎn)換物鏡。旋動轉(zhuǎn)換器將低倍鏡換成高倍鏡（注意：在轉(zhuǎn)換物鏡時要從側(cè)面觀察，以防鏡頭與標(biāo)本片相撞，如果高倍鏡觸及標(biāo)本片，應(yīng)立即停止旋轉(zhuǎn)，并重新用低倍鏡調(diào)焦）；調(diào)焦。調(diào)節(jié)光圈，使光線亮度合適，再調(diào)節(jié)細準(zhǔn)焦螺旋直至目的物清晰；觀察。移動推動器，找到合適的目的物，并移至視野的中心進行觀察。（如果用高倍鏡未能看清目的物，則可換用油鏡觀察）目前十三頁\總數(shù)十八頁\編于十八點油鏡的操作1.轉(zhuǎn)換油鏡。調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋，下降載物臺約2cm，轉(zhuǎn)換油鏡鏡頭；2.加香柏油。在標(biāo)本片的鏡檢部位滴一滴香柏油；從側(cè)面注視，用粗準(zhǔn)焦螺旋緩慢上升載物臺，使油鏡頭浸沒在油中，剛好貼近載玻片；3.調(diào)焦。上升聚光器，將虹彩光圈開大，使光線充分照明；緩慢調(diào)節(jié)細準(zhǔn)焦螺旋，直至物像清晰。4.觀察。多觀察幾個視野，選取菌體分布均勻的視野進行菌體形態(tài)和排列方式觀察。目前十四頁\總數(shù)十八頁\編于十八點2、顯微鏡用畢后的處理將光強調(diào)節(jié)至最弱關(guān)閉電源開關(guān)拔掉電源插頭下降載物臺

取干凈擦鏡紙拭去鏡頭上的香柏油

取干凈擦鏡紙蘸少許二甲苯擦去鏡頭上的殘留油跡

取干凈擦鏡紙擦去殘留的二甲苯

將顯微鏡的各部位還原，物鏡轉(zhuǎn)成“八”字形，擦干凈鏡體，罩上防塵罩。目前十五頁\總數(shù)十八頁\編于十八點五、實驗數(shù)據(jù)及處理結(jié)果

繪出你在油鏡下觀察到的兩種細菌的形態(tài)及其不同細菌細胞的排列方式。四聯(lián)球菌（10×100）

桿菌120（10×100）目前十六頁\總數(shù)十八頁\編于十八點六、思考與討論

用油鏡觀察時應(yīng)注意哪些問題？在載玻片和鏡頭之間