血液常用檢查一

血液常用檢查一第1頁/共72頁紅細胞計數(shù)一血紅蛋白測定二紅細胞形態(tài)檢查三第二節(jié)血液常用檢查（一）第2頁/共72頁教學(xué)目標掌握紅細胞計數(shù)、血紅蛋白方法熟悉紅細胞形態(tài)特點了解紅細胞計數(shù)、血紅蛋白測定臨床意義第3頁/共72頁紅細胞的發(fā)育過程

造血干細胞→早幼紅細胞→中幼紅細胞→晚幼紅細胞脫核→網(wǎng)織紅細胞→成熟紅細胞EPO紅系祖細胞→原始紅細胞（有絲分裂）48h第4頁/共72頁成熟紅細胞

鐵→鐵代謝原卟啉

→膽色素代謝珠蛋白→蛋白質(zhì)代謝衰老紅細胞紅細胞的發(fā)育過程120天第5頁/共72頁6

檢測方法1.手工顯微鏡法2.血液分析儀法一、紅細胞計數(shù)第6頁/共72頁71.手工顯微鏡法（1）血液分析儀的校正（2）適用基層醫(yī)療單位和分散就診患者（3）費時、重復(fù)性差，準確性取決操作者技術(shù)水平

2．血液分析儀法

操作簡便、重復(fù)性好，適用大批量集中檢測準確性取決于儀器性能及工作狀態(tài)，定期校準、質(zhì)控方法學(xué)評價第7頁/共72頁手工顯微鏡法8定義：用等滲稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)后，滴入改良Neubauer計數(shù)板，在顯微鏡下計數(shù)一定范圍內(nèi)的紅細胞數(shù)，經(jīng)換算即可求得每升血液中的紅細胞數(shù)。

第8頁/共72頁9改良牛鮑計數(shù)板計數(shù)板第9頁/共72頁第10頁/共72頁壓線細胞的計數(shù)原則：數(shù)左不數(shù)右，數(shù)上不數(shù)下第11頁/共72頁12血細胞計數(shù)室各計數(shù)區(qū)的計數(shù)對象、范圍和單位換算計數(shù)區(qū)域計數(shù)細胞種類換算方式（以細胞個數(shù)/L計）四角4個大方格

白細胞

N/4×10×稀釋倍數(shù)×106四角及中央5個中方格

紅細胞、血小板

N×5×10×稀釋倍數(shù)×106兩側(cè)計數(shù)室四角及中央

嗜酸性粒細胞、體

N×稀釋倍數(shù)×1065個大方格共10個大方格

腔液細胞、精子第12頁/共72頁13紅細胞稀釋液組成與作用稀釋液組成作用備注Hayem液

NaCl、Na2SO4、HgCl2

調(diào)節(jié)滲透壓、增加紅細胞懸浮性和防腐作用

高球蛋白血癥時，蛋白質(zhì)沉淀致紅細胞凝集枸櫞酸鈉稀釋液NaCl、枸櫞酸鈉、甲醛NaCl和枸櫞酸鈉調(diào)節(jié)滲透壓

，枸櫞酸鈉具抗凝，甲醛防腐生理鹽水生理鹽水急診時用1%甲醛生理鹽水甲醛、生理鹽水急診時用第13頁/共72頁141.準備計數(shù)板2.加稀釋液：2ml3.加血：10μl混勻4.充池5.計數(shù)6.計算：紅細胞數(shù)=N/5*25*10*200*106/L結(jié)果報告方式：X.X×1012/L紅細胞計數(shù)操作第14頁/共72頁15成年：男性（4～5.5）×1012/L

女性（3.5～5.0）×1012/L新生兒：（6.0～7.0）×1012/L參考值第15頁/共72頁161.分析前質(zhì)量控制患者準備、標本采集、存儲溫度和時間2.分析中質(zhì)量控制

計數(shù)誤差（技術(shù)誤差和固有誤差）、白細胞影響3.分析后質(zhì)量控制結(jié)合臨床資料質(zhì)量控制第16頁/共72頁血紅蛋白(血色素，Hb或HGB)組成二、血紅蛋白測定珠蛋白：4條，種屬特異性亞鐵血紅素：4個，無種屬特異性第17頁/共72頁

珠PrNNFeNN

亞鐵血紅素結(jié)構(gòu)示意圖O2第18頁/共72頁HbA：

α2β2

成人占95%以上HbA2：α2δ2

成人約占2～3%HbF(胎兒Hb)：α2γ2

成人1%以下每個Hb分子由2條α類肽鏈和2條非α

類肽鏈組成，每條珠蛋白肽鏈含有1個亞鐵血紅素第19頁/共72頁HbO2(氧合血紅蛋白)各種血紅蛋白衍生物(據(jù)鐵原子第六配位鍵的結(jié)合情況)Hbred(還原血紅蛋白)HbCO(碳氧血紅蛋白)Hi(高鐵血紅蛋白)SHb(硫化血紅蛋白)主要成分少量與氧結(jié)合未結(jié)合與CO結(jié)合Fe2＋→Fe3＋與S結(jié)合第20頁/共72頁21氰化高鐵血紅蛋白(HiCN)測定法十二烷基硫酸鈉血紅蛋白（SDS-Hb）法疊氮高鐵血紅蛋白(HiN3)法堿羥血紅蛋白法疊氮高鐵血紅蛋白測定法溴代十六烷基三甲胺血紅蛋白測定法（CTAB）檢測方法第21頁/共72頁一.原理Hb＋CN－氧化HiCN為棕紅色，最大吸收峰540nm。根據(jù)標本的吸光度可知Hb濃度。HiCNHi氰化高鐵血紅蛋白測定法(HiCN法)注：硫化血紅蛋白(SHb)不能被轉(zhuǎn)化第22頁/共72頁氰化鉀0.05g高鐵氰化鉀0.2g磷酸二氫鉀0.14g非離子表面活性劑1.0

ml蒸餾水加至1000

ml二.試劑HiCN轉(zhuǎn)化液(文齊液)調(diào)pH7.0～7.4，置棕色玻璃瓶中密封保存。氧化調(diào)節(jié)pH促溶,防混濁提供CN-氰化高鐵血紅蛋白測定法(HiCN法)第23頁/共72頁三.方法4.實際工作中，可用HiCN參考液，按生化方法繪制標準曲線，或求出K值后計算。

K＝∑Hb（g）/∑A

1.

5.0

ml

Hb轉(zhuǎn)化液＋血20ul,混勻,靜置5min。2.分光光度計比色，波長540nm，以空白轉(zhuǎn)化液調(diào)零，測定吸光度“A”。3.如用符合WHO標準的光度計，則可據(jù)“A”直接計算Hb濃度。氰化高鐵血紅蛋白測定法第24頁/共72頁25血紅蛋白濃度計算公式：Hb(g/L)=A?540HiCN/44×64458/1000×251

=A×367.7A?540HiCN：測定管吸光度44：毫摩爾消光系數(shù)64458/1000：1mmol/LHb溶液中所含Hb克數(shù)251為稀釋倍數(shù)第25頁/共72頁三.方法4.實際工作中，可用HiCN參考液，按生化方法繪制標準曲線，或求出K值后計算。

K＝∑Hb（g）/∑A

1.

5.0

ml

Hb轉(zhuǎn)化液＋血20ul,混勻,靜置5min。2.分光光度計比色，波長540nm，以空白轉(zhuǎn)化液調(diào)零，測定吸光度“A”。3.如用符合WHO標準的光度計，則可據(jù)“A”直接計算Hb濃度。氰化高鐵血紅蛋白測定法第26頁/共72頁Hb(g/L)A500.1281000.2651500.3852000.523K=∑Hb/∑A=500/1.301=384.32Hb=KA氰化高鐵血紅蛋白測定法第27頁/共72頁1.KCN為劇毒藥品，防污染。2.HiCN轉(zhuǎn)化液不能存于塑料瓶中。否則CN-下降，結(jié)果偏低。3.分光光度計應(yīng)定期校正并使用配套的比色杯。4.標準曲線或K值應(yīng)定期校正。四.注意事項氰化高鐵血紅蛋白測定法第28頁/共72頁29血紅蛋白SDS-HbSDS540nm血紅蛋白濃度吸光度十二烷基硫酸鈉血紅蛋白（SDS-Hb）法第29頁/共72頁方法學(xué)評價HiCN法SDS-Hb法優(yōu)點：操作簡便；顯色快，結(jié)果穩(wěn)定。缺點：氰化鉀有劇毒；高白細胞或高球蛋白血癥等可致渾濁；

HbCO轉(zhuǎn)化慢。參考方法優(yōu)點：操作簡單；結(jié)果穩(wěn)定；無公害。缺點：摩爾消光系數(shù)未確定；破壞白細胞；質(zhì)量差異大

。次選方法第30頁/共72頁如何采用SDS-Hb法進行血紅蛋白測定？1.HiCN法繪制標準曲線2.SDS-Hb法標準工作曲線繪制1)取4份不同濃度抗凝血或溶血液用HiCN法測定吸光度，并求出其Hb濃度。2)再用SDS-Hb法測定4份標本的吸光度。3)以4份標本Hb濃度為橫坐標，SDS-Hb法測得的吸光度為縱坐標，繪制標準工作曲線。第31頁/共72頁32

分析前質(zhì)量控制：同紅細胞計數(shù)分析中質(zhì)量控制技術(shù)誤差：稀釋倍數(shù)、分光光度計波長、光縫、比色杯光徑需校正HiCN轉(zhuǎn)化液：棕色玻璃瓶HiCN參考液：關(guān)鍵質(zhì)控物：室內(nèi)質(zhì)控分析后質(zhì)量控制：同紅細胞計數(shù)質(zhì)量控制第32頁/共72頁33①成年：男性：120～160g／L；女性：llO～150g／L。②新生兒：170～200g／L。③老年(70歲以上)：男性：94～122g／L；女性87～112g／L。

參考值第33頁/共72頁34①輕度貧血，成年男性Hb＜120g/L，成年女性＜110g/L；②中度貧血＜90g/L；③重度貧血＜60g/L；④極度貧血＜30g/L。臨床意義第34頁/共72頁35三、紅細胞形態(tài)檢查紅細胞大小、形態(tài)、染色和內(nèi)涵物的是否異常第35頁/共72頁

1．顯微鏡分析法采用人工顯微鏡法血涂片染色觀察，是儀器法校準的參考方法和檢測的復(fù)核方法。

2．計算機圖像分析建立統(tǒng)計模型，以正常紅細胞形態(tài)為參比、作出分析，可用于與紅細胞形態(tài)變化疾病的輔助診斷。3.血液分析儀法提供紅細胞數(shù)量及其他相關(guān)參數(shù)，對異常結(jié)果報警，但不能提供確切信息，需用鏡檢血涂片核實。

檢測原理和方法學(xué)評價第36頁/共72頁1.有合格的血液細胞形態(tài)檢驗人員2.選擇細胞分布均勻區(qū)域進行鏡檢3.注意完整規(guī)范的檢查順序低倍鏡細胞分布和染色油鏡細胞形態(tài),是否存在其他異常細胞4．減少人為影響因素全片瀏覽質(zhì)量保證第37頁/共72頁38第38頁/共72頁39正常紅細胞雙凹圓盤形大小均一，平均7.2μm(6.7-7.7μm)；淡粉紅色，Hb充盈良好，中央部位為生理性淡染區(qū)，大小約為直徑的1／3；胞質(zhì)內(nèi)無異常結(jié)。第39頁/共72頁40第40頁/共72頁外周血紅細胞形態(tài)變化紅細胞大小異常小、大、巨、大小不均紅細胞性狀異常球、橢圓、靶、口、鐮、棘、鈍鋸齒、淚滴、裂片、形態(tài)不整血紅蛋白充盈度與著色異常低色素、高色素、嗜多色、著色不一紅細胞內(nèi)異常結(jié)構(gòu)嗜堿性點彩、豪焦小體、卡波環(huán)、寄生蟲、瘧色素紅細胞排列異常緡錢狀形成、自凝現(xiàn)象有核紅細胞第41頁/共72頁1.紅細胞大小異常(1)小紅細胞：指直徑小于6μm的紅細胞。提示血紅蛋白合成障礙，見于缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血。(2)大紅細胞：指直徑大于l0μm的紅細胞，常見于巨幼細胞性貧血，也可見于溶血性貧血、惡性貧血等。第42頁/共72頁第43頁/共72頁(3)巨紅細胞：指直徑大于15μm的紅細胞。最常見于巨幼細胞性貧血。(4)紅細胞大小不均：指同一患者的紅細胞之間直徑相差一倍以上。大者紅細胞直徑可達12μm，小者直徑僅2.5μm。常見于嚴重的增生性貧血，巨幼細胞性貧血時尤為明顯第44頁/共72頁第45頁/共72頁第46頁/共72頁2．紅細胞形態(tài)異常

(1)球形細胞：該紅細胞在血液中為球形，而在涂片上則顯示細胞中心著色深濃，體積較小，有球形之立體感。(2)橢圓形細胞：紅細胞呈橢圓形、桿形，兩端鈍圓，長軸增大，短軸縮短。見于遺傳性橢圓形細胞增多癥、大細胞性貧血；偶見于缺鐵性貧血、骨髓纖維化、巨幼細胞貧血、鐮形細胞性貧血。正常人血液中約占l％，但不超過15％。第47頁/共72頁第48頁/共72頁(3)靶形細胞：紅細胞中心部位和細胞周緣染色較深，其間為不染色的蒼白區(qū)環(huán)，形如射擊之靶。常見于各種低色素性貧血，尤見于珠蛋白生成障礙性貧血、HbC病，也見于阻塞性黃疽、脾切除后狀態(tài)。

(4)口形細胞：紅細胞中央有裂縫，中心蒼白區(qū)呈扁平狀，頗似張開的口形或魚口。常見于口形紅細胞增多癥，小兒消化系統(tǒng)疾患引起的貧血，也可見于乙醇中毒、某些溶血性貧血及肝病患者等。正常人偶見(<4％)。第49頁/共72頁第50頁/共72頁第51頁/共72頁(5)鐮形細胞：紅細胞外形呈鐮刀狀、線條狀。鐮狀細胞貧血(HbS-S，HbS-C)和鐮狀細胞特性(HbA-S)的血標本，在缺氧的條件下，有大量鐮細胞。(6)棘形細胞：紅細胞表面有針尖狀突起，其間距不規(guī)則，突起的長度和寬度可不一。多見于遺傳性或獲得性β-脂白缺乏癥，可高達70％～80%；也可見于脾切除后、酒精中毒性肝臟疾病、尿毒癥。第52頁/共72頁第53頁/共72頁第54頁/共72頁(7)新月形紅細胞：紅細胞殘缺不全，體積大，狀如新月形，直徑約20μm。見于陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿。(8)淚滴形細胞：成熟紅細胞形如淚滴或梨狀。多見于貧血、骨髓纖維化癥時，偶見于正常人。第55頁/共72頁第56頁/共72頁

(9)緡錢狀形成：紅細胞表面電荷發(fā)生改變，而使其互相連接如緡錢狀。(10)裂紅細胞：為紅細胞碎片或不完整的紅細胞。見于彌散性血管內(nèi)凝血、微血管病性溶血性貧血、重型珠蛋白生成障礙性貧血、巨幼細胞性貧血、嚴重?zé)齻?。正常人血涂片中裂片細胞小?%。第57頁/共72頁第58頁/共72頁(11)紅細胞形態(tài)不整指紅細胞形態(tài)發(fā)生各種明顯改變，出現(xiàn)不規(guī)則的奇異形狀，如豆狀、梨形、蝌蚪狀、麥粒狀和棍棒形等。此種細胞在某些感染或嚴重貧血時多見，最常見于巨幼細胞性貧血。第59頁/共72頁3．染色異常(1)正常色素性：見于正常人外