藥物敏感試驗

抗菌藥物敏感試驗

細菌室李巍2021/10/101抗菌藥物敏感試驗定義、目的、方法培養(yǎng)基、接種菌量、培養(yǎng)條件結(jié)果閱讀判斷標準2021/10/102

什么是抗菌藥物的敏感性試驗測定抗菌藥物在體外抑制病原微生物生長的效力，稱為抗菌藥物對細菌的抑制試驗，或稱為細菌對藥物的敏感性試驗。2021/10/103為什么要做藥敏試驗？供醫(yī)師選用抗菌藥物時的參考細菌耐藥性檢測和耐藥性變遷評價新抗菌藥物的藥效學特征對細菌耐藥譜分析和分型有助于某些菌種的鑒定作為醫(yī)院內(nèi)感染流行病學調(diào)查的手段之一2021/10/104如何進行藥敏試驗方法學

1.稀釋法--試管稀釋法--平板稀釋法

2.擴散法（紙片法）

3.E-TEST4.自動化儀器2021/10/105

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2021/10/107幾個重要的指標MIC（最低抑菌濃度）在體外能夠抑制細菌生長的最低藥物濃度

MBC(最低殺菌濃度)

在體外能夠使細菌的總數(shù)減少或殺滅99.9%以上的最低藥物濃度臨界濃度根據(jù)MIC，結(jié)合常用劑量時該藥所能達到的血藥濃度，劃定細菌對各種抗菌藥物敏感或耐藥的界限2021/10/108

2021/10/109如何制備菌懸液？如何取菌落？為什么至少取3個菌落？可能丟失耐藥細菌（攜帶有耐藥質(zhì)粒的耐藥菌株）2021/10/1010擴散法：K-B操作：-制備0.5麥氏度菌液-無菌棉簽蘸取菌液，在管壁將多余菌液旋轉(zhuǎn)擠去，在瓊脂表面均勻涂布3次，最后沿著平板內(nèi)緣涂抹一周-室溫或35度干燥5—10分鐘-將紙片緊貼于表面-紙片間距20厘米，離平板內(nèi)緣15厘米2021/10/1011如何閱讀結(jié)果（紙片法）工具：游標卡尺、尺子光源：反射光、透射光閱讀：背襯不反光的黑色背景用肉眼觀察，也可用BIOMIC機器閱讀2021/10/1012紙片法結(jié)果的正確閱讀反射光不反光的黑色背景完全抑制的抑菌圈直徑，包括紙片的直徑抑菌圈的界限應(yīng)該是以肉眼觀察沒有明顯的可見細菌生長區(qū)域在抑菌圈邊緣微弱生長的、僅能在放大鏡下才能觀察到的細小菌落應(yīng)忽略2021/10/1013

2021/10/1014應(yīng)注意葡萄球菌、腸球菌的閱讀苯唑西林、利奈唑胺和萬古對葡萄球菌的抑制圈萬古霉素對腸球菌的抑制圈任何有可見的菌落生長均視作對上述抗菌藥物耐藥需在透視光下閱讀，遇不敏感的結(jié)果需用稀釋法測MIC確證2021/10/1015應(yīng)注意磺胺類藥物的結(jié)果閱讀培養(yǎng)基可能含有拮抗物如胸腺嘧啶、核苷類物質(zhì)，允許有輕微生長的薄菌苔忽略20%或更低生長的薄菌苔，測量抑菌圈直徑較為明顯的細菌生長界限下列細菌均注意：腸桿科、不動、伯克、葡萄、嗜血、肺鏈、弧菌屬、腦膜炎奈瑟菌2021/10/1016應(yīng)注意變形桿菌屬的閱讀生長呈遷移性在一些抗菌藥物抑菌環(huán)可見霧霾樣遷徙生長的菌苔霧霾樣生長忽略不計忽略遷移性2021/10/1017應(yīng)注意溶血性細菌的結(jié)果閱讀鏈球菌--β-溶血鏈球菌--草綠色鏈球菌--肺鏈應(yīng)忽略溶血區(qū)，讀取生長完全被抑制處2021/10/1018注意產(chǎn)色素細菌的結(jié)果閱讀有些細菌在生長的過程中產(chǎn)生色素

--銅綠

--黃桿菌

--沙雷菌應(yīng)忽略色素分泌圈，讀取生長完全被抑制處2021/10/1019

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解讀注意事項1、藥敏試驗是參照美國的CLSI推薦的標準制定的。2、細菌全自動分析儀的藥敏組合是固定的。3、某些細菌對某類抗生素天然耐藥，則不需要做藥敏試驗。4、試驗的藥物代表一類藥，而不是一種藥。2021/10/1021

解讀注意事項5、對葡萄球菌一代比三代頭孢治療效果好。6、有些藥物不適用于單獨使用，僅用于聯(lián)合用藥，如利福平。7、因為是體外藥敏試驗，有些藥體外試驗敏感，可能臨床治療無效。8、同一菌株可能出現(xiàn)亞種，導(dǎo)致連續(xù)藥敏結(jié)果不吻合。2021/10/1022

細菌耐藥概念多重耐藥（MDR）:指細菌同時對三種以上結(jié)構(gòu)不同（作用機制不同）抗菌藥物耐藥，如頭孢菌素、喹諾酮類、氨基糖苷類；泛耐藥（PDR）:細菌對本身敏感的所有藥物耐藥；超級細菌:并非科學概念，一般指PDR與部分MDR，沒有確切定義，以下細菌屬于此列：MRSA/VRSA;VRE;MDR-PA,PDR-AB;ESBL(+)+AmpC(+)腸桿菌產(chǎn)碳青霉烯酶腸桿菌（產(chǎn)KPC酶、包括產(chǎn)NDM-1細菌）2021/10/1023MRSA：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌VRSA：耐萬古霉素金黃色葡萄球菌VRE：耐萬古霉素腸球菌ESBLs：超廣譜β-內(nèi)酰胺酶KPC酶：產(chǎn)碳青霉稀酶的一種KPC型NDM-1：Ⅰ型新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶

下面就以上幾種情況分別解讀2021/10/1024

與臨床溝通中常見問題

1、我們想用的藥物在藥敏試驗中沒有做？可能是天然耐藥可能是藥物的敏感性被其他藥物所預(yù)報2021/10/1025

與臨床溝通中常見問題

2.為什么有的菌報告很多種藥物，有的僅報告幾種藥物？報告的藥物種類根據(jù)細菌種類的不同而有所不同，如銅綠假單胞菌報告的藥物較多，而嗜麥芽窄食單胞菌報告的藥敏較少2021/10/1026CLSI藥敏建議2021/10/1027

與臨床溝通中常見問題

3、是否能將所用的藥都做藥敏試驗?沒有必要：通過耐藥機制和標志性藥物可以預(yù)測其他抗菌藥物的敏感性沒有可能：不是所用藥物都可以做藥敏試驗（需要藥物在體外穩(wěn)定，需要有操作標準和解釋標準）2021/10/1028

與臨床溝通中常見問題

4、在藥敏試驗報告中MIC越小的抗菌藥物效果越好嗎？如何根據(jù)MIC聯(lián)合用藥？感染菌對同一種藥物的MIC越小，效果越好不同種抗菌藥物之間MIC無可比性目前很多儀器報告的是檢測折點，而不是真正的MIC2021/10/1029

與臨床溝通中常見問題

5、培養(yǎng)陽性的細菌都需要用抗菌藥物治療嗎？不是的培養(yǎng)陽性感染，可能為污染（血培養(yǎng)），可能為定植（痰培養(yǎng)）任何結(jié)果必須結(jié)合臨床情況進行評價（很重要）感染部位的清創(chuàng)、引流、換藥比使用抗菌藥物更加重要改善患者全身情況：器官功能支持，糾正酸堿平衡，電解質(zhì)紊亂，低蛋白血癥，高血糖等2021/10/1030

與臨床溝通中常見問題

6、選擇藥敏報告敏感的藥物，為什么臨床治療無效？

體外藥敏試驗只能預(yù)測體內(nèi)治療效果，并不等同；一般來說，耐藥＝治療無效；敏感≠治療有效?？赡懿皇钦嬲闹虏【ㄎ廴净蚨ㄖ簿┘毦旧硪蛩兀ㄈ缯T導(dǎo)耐藥，生物被膜）感染部位與藥代動力學因素細菌的MIC，給藥劑量和用藥方式藥敏試驗藥物中有些藥物單獨使用無效，但可以與其他藥物聯(lián)合用藥藥物劑型及生物利用度（純品、商品）2021/10/1031

與臨床溝通中常見問題7、涂片鏡檢結(jié)果與培養(yǎng)結(jié)果不吻合？涂片鏡檢是報告所有檢見的細菌，而培養(yǎng)的目的是檢出致病菌。一些苛氧菌需在特殊的環(huán)境或培養(yǎng)基上才能生長。2021/10/1032

與臨床溝通中常見問題

8、取的明顯就是膿液標本，為何鑒定報告為無菌生長？我們做的是有氧培養(yǎng)，膿液可能為厭氧菌感染?？赡芗毦淮罅康闹行粤＜毎淌?。2021/10/1033

與臨床溝通中常見問題

9、鑒定結(jié)果明明寫著四聯(lián)球菌、革蘭氏陽性桿菌，為何沒有藥敏結(jié)果？四聯(lián)球菌為微球菌，一般不引起人體致病，為非致病菌，故考慮污染可能。藥敏結(jié)果參照CLSI標準，目前革蘭氏陽性菌沒有參照標準，故暫不能做藥敏試驗，若需治療可參照陽性球菌用藥。2021/10/1034

與臨床溝通中常見問題

10、一般培養(yǎng)不是三天出結(jié)果嗎，今天第四天了怎么還沒出來？一般培養(yǎng)經(jīng)48小時后，即第三天出報告，若需分離致病菌的則第四天出報告。2021/10/1035

與臨床溝通中常見問題11、今天的培養(yǎng)結(jié)果怎么與前天的不一樣？取材是否規(guī)范。痰標本，有時選優(yōu)勢菌做，就可能導(dǎo)致兩次不一樣。2021/10/1036

與臨床溝通中常見問題12.明顯稀便，培養(yǎng)結(jié)果為何正常？大便普通培養(yǎng)，通常只能鑒定志賀菌、沙門菌感染，致病性大腸桿菌我們沒有鑒定血清。懷疑霍亂時，需開霍亂弧菌培養(yǎng)?？赡懿《靖腥?輪狀病毒)。2021/10/1037

小結(jié)耐藥菌，尤其是多重耐藥菌的出現(xiàn)，使臨床抗感染治療面臨著困難的用藥決策細菌藥敏試驗在