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文檔簡介

種子生產(chǎn)與經(jīng)營專業(yè)聚丙烯酰胺凝膠垂直板型電泳操作方法

聚丙烯酰胺凝膠垂直板型電泳是在兩塊垂直放置的、間隔數(shù)毫米的平行玻璃板中進行，所得的是垂直的平板狀的凝膠。

一、垂直板型凝膠模子及電泳槽垂直板電泳槽中，有一種操作比較簡便，比較有效的夾芯式電泳槽。將玻璃片嵌入凹槽時，長玻璃片下部與膠帶保持2~3mm的距離，以使此端的凝膠與一側(cè)的電極槽相通。為避免膠液由此狹縫漏掉，灌膠時，可先向凝膠模底部灌入用電極緩沖液配制的分離膠液，待分離膠凝固后即封住凝膠模下面的窄縫，而在通電時又可做為鹽橋。聚丙烯酰胺凝膠液灌在它的上面，形成分離膠。另一較短的玻璃片，其三邊嵌入膠帶中。因這一玻璃片稍低于前者，將來可使另一側(cè)電極的緩沖液沒過玻璃片頂部，使凝膠頂部與電極槽相通，以便樣品在電場中泳動。一、垂直板型凝膠模子及電泳槽一、垂直板型凝膠模子及電泳槽凝膠模樣品槽模板硅橡膠帶玻璃片二、制膠制作凝膠時，將膠液加到距玻璃板頂端約1cm處，然后將樣品梳插入膠液頂部。插入樣品梳的目的是使凝膠聚合后，在凝膠頂部形成數(shù)個相互隔開的凹槽（樣品槽），電泳時將樣品液加在這些凹槽中。凝膠系統(tǒng)全部成分混合后開始計算時間，聚合作用在15min時開始，0.5~1h后完成。聚合作用是放熱的，所以聚合時要加以冷卻，控制聚合時的溫度相同于電泳時的溫度。

小心地取出樣品梳，在兩個電極槽中充滿電極緩沖液。

二、制膠三、加樣品液

樣品的用量與凝膠板厚度有關(guān)。對2mm厚和10mm寬的樣品槽，用約20μl樣品液。在樣品液中常加入指示染料如甲基綠或溴酚藍。四、染色

垂直板型電泳是在兩塊垂直放置的、間隔數(shù)毫米的平行玻璃板中進行，所得的是垂直的平

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