GB坂崎腸桿菌檢驗

阪崎腸桿菌檢驗GB4789.40-2010目前一頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點本標準與GB/T4789.40-2008相比，主要變化如下：——修改了標準的中英文名稱；——刪除了附錄A中A.3。目前二頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點Enterobactersakazakii(ES)3目前三頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點內容第一部分：一般特征第二部分：流行病學特征第三部分：ES的檢驗4目前四頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點第一部分：一般特征命名培養(yǎng)特征生化反應抵抗力增殖能力致病性5目前五頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點1980年之前一直被稱為黃色陰溝腸桿菌。DNA-DNA雜交生化反應黃色素抗生素敏感性一、命名6目前六頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點二、培養(yǎng)特征G－無芽孢桿菌，兼性厭氧，在6℃-47℃范圍內均可生長，適溫35-37℃營養(yǎng)要求不高：

VRBGA、TSA、NA、MAC、EMB、其他與其他常見腸桿菌相似7目前七頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點三、生化反應

生化反應結果D-山梨醇-產生吐溫80脂酶+細胞外Dnase+氧化酶試驗-黃色菌落+α-葡萄糖苷酶+8目前八頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點ES及親緣關系較近的腸桿菌生化反應比較試驗生化反應1阪崎腸桿菌陰溝腸桿菌產氣腸桿菌成團腸桿菌日勾維腸桿菌賴氨酸脫羧酶－－＋－＋精氨酸雙水解酶＋＋－－－鳥氨酸脫羧酶＋＋＋－＋KCN生長＋＋＋v＋發(fā)酵:蔗糖＋＋＋(＋)＋衛(wèi)矛醇－(－)－(－)－核糖醇－(－)＋－－棉子糖＋＋＋v＋D-山梨醇－＋＋v－χ-甲基-葡萄糖甙＋(＋)－－－D-阿拉伯糖醇－(－)＋－＋黃色素＋－－(＋)－注：＋：90-100％；(＋)：75-89%；V：25-74％；(－)：10-24％；－：0-9％9目前九頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點第三部分

食品衛(wèi)生微生物學檢驗阪崎腸桿菌檢驗目前十頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點主要內容一、制訂的主要依據(jù)二、《食品衛(wèi)生微生物學檢驗阪崎腸桿菌檢驗》11目前十一頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點制訂的主要依據(jù)ISO2006年“乳和乳制品中阪崎腸桿菌的檢測”（Milkandmilkproducts—DetectionofEnterobactersakazakii）方法；美國FDA2002年頒布的“嬰兒配方粉中阪崎腸桿菌的分離和計數(shù)”（IsolationandEnumerationofEnterobactersakazakiifromDehydratedPowderedInfantFormula）方法；2004年荷蘭乳及乳制品控制中心對各種阪崎腸桿菌檢測方法的比較研究；雀巢研究中心2005年環(huán)境樣品中阪崎腸桿菌快速檢測方法；阪崎腸桿菌快速檢測培養(yǎng)基DFI研究資料。目前十二頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點SN第一部分：分離與計數(shù)方法第二部分：PCR方法第三部分：熒光PCR方法目前十三頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點常見選擇性培養(yǎng)基DFI(Oxoid,UK)ESIA(AES,France)R＆F（R&FLaboratories，Switzerland）OKmedium其他：國內阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基、CES(Merck,Germany)，NA+-MUG14目前十四頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點顯色培養(yǎng)基的特點-葡萄糖苷酶活性指示劑：5-溴-4-氯-3-吲哚-，D-吡喃葡糖甙（XGlc）4-甲基傘形酮--D-葡糖苷（-MUG）4-鄰硝基苯--D-吡喃葡糖甙15目前十五頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點16目前十六頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點選擇性培養(yǎng)基的選擇1.FDA方法使用VRBGA，ISO方法中使用ESIA，本方法中我們選用DFI。2.ESIA和DFI的基本原理相似，二者都是根據(jù)ES能產生α-葡萄糖苷酶，分解底物XaGlc產生有色菌落。3.VRBGA對ES的選擇性差，ES、陰溝腸桿菌和成團腸桿菌等多種腸道菌都可以在該平板上生長并產生粉紫色菌落，膽汁酸沉淀形成紫色暈圈。即：不能觀察到ES的特征性菌落。17目前十七頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點顯色培養(yǎng)基的選擇性較好DFI對ES的選擇性較好，ES形成的藍綠色特征性菌落易于辨認，而且：硫化氫指示劑可以區(qū)分ES和產生少量α-葡萄糖苷酶但H2S陽性菌株（如普通變形桿菌）。ES都可以在DFI平板上生長并產生藍綠色菌落其他常見菌在DFI平板的菌落顏色白色菌落：肺炎克雷伯氏菌、陰溝腸桿菌、大腸埃希氏菌、泛菌屬的多種菌等黃色菌落：赫氏埃希氏菌黑褐色、粉色或中心藍綠菌落：少量菌種ESIA:藍色，1-3mm182023/5/17目前十八頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點選擇性增菌肉湯的選擇FDA方法選擇EE肉湯，ISO方法選擇mLST-Vm，即在LST中加入Nacl和Vm。本標準使用mLST-Vm。EE肉湯適合所有腸道菌群的生長繁殖，這就可能對ES的生長產生競爭性抑制作用，降低檢出率。研究證明與其他腸桿菌科細菌（如沙門氏菌，大腸埃希氏菌等）相比，ES具有較高的耐滲透壓能力。加入0.5M的Nacl在保證ES良好生長的同時，可以有效地抑制上述其他細菌的生長。Vm可有效地抑制G+菌的生長。而較高的生長溫度可以進一步抑制其他細菌的生長。2023/5/17目前十九頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點二、食品衛(wèi)生微生物學檢驗

阪崎腸桿菌檢驗20目前二十頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點本標準修改采用ISO/TS22964（1stedition2006-02-01）Milkandmilkproducts—DetectionofEnterobactersakazakiiFDAJuly2002;RevisedAugust2002IsolationandEnumerationofEnterobactersakazakiifromDehydratedPowderedInfantFormula21目前二十一頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點第一法：阪崎腸桿菌的檢驗

第二法：阪崎腸桿菌的計數(shù)

22目前二十二頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點第一法

阪崎腸桿菌的檢驗23目前二十三頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點阪崎腸桿菌檢驗程序報告TSA25℃±1℃，48h±4h生化鑒定挑取黃色菌落DFI瓊脂36℃±1℃，24h±2h挑取藍綠色菌落1mL+mLST-Vm10mL44℃±0.5℃，24h±2h檢樣100g（mL）+BPW稀釋液900mL36℃±1℃，18h±2h前增菌選擇性增菌選擇性分離生化鑒定100g（mL）目前二十四頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點5.1前增菌和增菌左圖：未混合；右圖：混合后。加樣入已預熱到44℃的BP中25目前二十五頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點5.2分離DFI36℃±1℃24h±2h26目前二十六頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點TSA：25℃培養(yǎng)后典型ES：黃色陰性對照E.coliATCC25922：白色菌落黃色素27目前二十七頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點5.3鑒定（生化反應）生化試驗特征黃色素產生＋氧化酶－L-賴氨酸脫羧酶－L-鳥氨酸脫羧酶（＋）L-精氨酸雙水解酶＋檸檬酸水解(＋)發(fā)酵：D-山梨醇（－）L-鼠李糖＋D-蔗糖＋D-蜜二糖＋苦杏仁甙＋注：＋＞99%陽性；－＞99%陰性；（＋）90%－99%陽性；（－）90%-99%陰性。28目前二十八頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點商業(yè)生化鑒定系統(tǒng)的應用推薦使用的ES生化鑒定方法有很多，主要有API20E，ID32E，BiologGN2MicroPlate，VITEKGNI+等。上述方法都比較成熟，穩(wěn)定性較好，已被許多國家和組織的標準采用。在腸桿菌的生化鑒定中使用最廣泛的是API20E和VitekGNI+。29目前二十九頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點API20E生化鑒定板典型生化反應圖示

API20E反應編碼API20E結果評價3345373Excellentidentification3305173Excellentidentification3305363Verygoodidentification3305373Goodidentification30目前三十頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點VITEK-GNI+31目前三十一頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點質量控制選擇標