羅氏系統(tǒng)特點(diǎn)及應(yīng)用方向2

優(yōu)選羅氏系統(tǒng)特點(diǎn)及應(yīng)用方向ppt目前一頁(yè)\總數(shù)二十四頁(yè)\編于十七點(diǎn)實(shí)時(shí)定量PCR儀發(fā)展簡(jiǎn)史1985KaryMullis

發(fā)明了PCR技術(shù)1991Hoffmann-LaRoche公司獲得全球PCR專利權(quán)1993羅氏分子系統(tǒng)公司RussellHiguchi發(fā)明實(shí)時(shí)定量PCR儀1993KaryMullis因發(fā)明PCR技術(shù)而獲得諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)1995羅氏診斷公司推出后來成為PCR診斷行業(yè)金標(biāo)準(zhǔn)的COBASAmplicor?分析儀1999羅氏診斷公司應(yīng)用科學(xué)部推出LightCycler?全自動(dòng)實(shí)時(shí)定量PCR系統(tǒng)2005LightCycler?全自動(dòng)實(shí)時(shí)定量PCR系統(tǒng)全球銷量突破5000臺(tái)，成為全球銷量最大的單型號(hào)實(shí)時(shí)定量PCR系統(tǒng)2005LightCycler?480實(shí)時(shí)定量PCR儀器上市2007目前至今，羅氏診斷公司擁有PCR相關(guān)專利上千項(xiàng)，占全球PCR專利的90%以上。目前二頁(yè)\總數(shù)二十四頁(yè)\編于十七點(diǎn)

LightCycler?1.0

Instrument32320SamplenumberDetectionchannelsSamplevolume[μl]

LightCycler?1.5

Instrument32320

LightCycler?480Instruments(I,II)96/3845/6

10-100/5-2019982003

2005/20082004

LightCycler?2.0Instruments32620/100BreakthroughtohigherThroughputLightCycler?

系統(tǒng)發(fā)展回顧ADecadeofReal-TimePCRSpeedandPerformance目前三頁(yè)\總數(shù)二十四頁(yè)\編于十七點(diǎn)儀器試劑盒預(yù)制探針可更換溫控模塊多孔板模塊化軟件LightCycler?480熒光定量PCR系統(tǒng)：系統(tǒng)構(gòu)成目前四頁(yè)\總數(shù)二十四頁(yè)\編于十七點(diǎn)LightCycler?480熒光定量PCR系統(tǒng)獨(dú)有的Therma-BaseTM技術(shù)提升導(dǎo)熱效率，提高孔間溫度均一性銀質(zhì)散熱塊加快降溫速度加長(zhǎng)光路系統(tǒng)改進(jìn)光學(xué)檢測(cè)的邊緣效應(yīng)快速，高效，均一，無(wú)需內(nèi)參創(chuàng)新的技術(shù)改良以獲得業(yè)內(nèi)最好的性能目前五頁(yè)\總數(shù)二十四頁(yè)\編于十七點(diǎn)微孔板模塊（銀制）Peltier半導(dǎo)體加熱單位

冷卻裝置（銀制）熱蓋溫度高度均一性，孔間溫度的精確度±0.1℃快速冷卻和加熱速度

(Heating:(4.8)°C/s-Cooling:(2.5)°C/s)整個(gè)板的精確PCR結(jié)果

96孔模式<1hour384孔模式<40minTherma-BaseTM

溫控系統(tǒng)構(gòu)成目前六頁(yè)\總數(shù)二十四頁(yè)\編于十七點(diǎn)多孔板座Therma-Base層散熱鰭封閉的真空夾層，內(nèi)壁為燈芯式結(jié)構(gòu)，存貯工作液通過蒸發(fā)和凝結(jié)過程快速傳熱

→使得PCR循環(huán)快速而精確!Peltier元件LightCycler?480熒光定量PCR儀散熱元件：Therma-Base

目前七頁(yè)\總數(shù)二十四頁(yè)\編于十七點(diǎn)LightCycler?480普通實(shí)時(shí)定量PCR儀熱均一性不同儀器比較目前八頁(yè)\總數(shù)二十四頁(yè)\編于十七點(diǎn)LightCycler?480熒光定量PCR儀溫控系統(tǒng)無(wú)Therma-Base有Therma-Basemdr1-e26*cyp2C9-e3*cyp2C9-e7*熱均一性對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響溫控的均一性保證了各個(gè)反應(yīng)樣品擴(kuò)增的均一性，極大降低了檢測(cè)誤差率！目前九頁(yè)\總數(shù)二十四頁(yè)\編于十七點(diǎn)快速循環(huán)模式更快地升降溫，提高反應(yīng)速度，縮短反應(yīng)進(jìn)行的時(shí)間單位時(shí)間內(nèi)檢測(cè)的工作量增大，實(shí)現(xiàn)更加快速的結(jié)果檢測(cè)！目前十頁(yè)\總數(shù)二十四頁(yè)\編于十七點(diǎn)快速循環(huán)模式更快地升降溫，縮短了可能的非特異性結(jié)合，提高PCR的特異性Amplificationofa536bp-globinfragmentfromgenomicDNA

Time(hr)SampleTemperature(°C)GelAnalysisTimefor30Cycles(hr)TemperatureProfiles536bp利于PCR體系的優(yōu)化！目前十一頁(yè)\總數(shù)二十四頁(yè)\編于十七點(diǎn)典型的96孔板式的頂部光路系統(tǒng)CCD相機(jī)光源由于光程差,激發(fā)光從頂部發(fā)出到達(dá)每孔的強(qiáng)度不一樣，中心強(qiáng)度高于邊緣，需要加入內(nèi)參照來校正光密度不一樣光學(xué)系統(tǒng)–頂部照射產(chǎn)生的邊緣效應(yīng)目前十二頁(yè)\總數(shù)二十四頁(yè)\編于十七點(diǎn)濾鏡輪CCD相機(jī)多孔板物鏡利用優(yōu)化的光學(xué)檢測(cè)元件（液態(tài)光導(dǎo)元件，光通路元件,濾光片和冷CCD光通路元件）將激發(fā)光源通過液態(tài)光導(dǎo)元件后變成均一的適合微孔板形狀的光線

均一的激發(fā)和檢測(cè)，無(wú)光程差

無(wú)需內(nèi)參照熒光校正（ROX）采用折疊光路增加光程，降低激發(fā)高度LightCycler?

480

光路系統(tǒng)氙燈CCD相機(jī)5個(gè)激發(fā)通道6個(gè)檢測(cè)通道

優(yōu)化光學(xué)組件排列設(shè)計(jì)均一的激發(fā)及檢測(cè)過程目前十三頁(yè)\總數(shù)二十四頁(yè)\編于十七點(diǎn)LightCycler?

480一大特色就是：從來無(wú)需內(nèi)參染料數(shù)據(jù)生成(熱循環(huán)模塊)數(shù)據(jù)檢測(cè)(光學(xué)系統(tǒng))數(shù)據(jù)分析(軟件系統(tǒng))每一個(gè)步驟都足夠準(zhǔn)確！內(nèi)參染料目前十四頁(yè)\總數(shù)二十四頁(yè)\編于十七點(diǎn)UPLprobes1010–100copiesLightCycler?480與臨床檢測(cè)

定量：動(dòng)態(tài)范圍無(wú)論是強(qiáng)陽(yáng)性樣品還是弱陽(yáng)性樣品均能輕松同時(shí)檢測(cè)！目前十五頁(yè)\總數(shù)二十四頁(yè)\編于十七點(diǎn)LightCycler?480與基因表達(dá)調(diào)控

微量樣品的區(qū)分精確區(qū)分1000拷貝與2000拷貝置信度達(dá)到99.8%是同類儀器的5倍以上

（其他5000拷貝和10000拷貝）高分辨率有助于對(duì)于樣品的精細(xì)分析！目前十六頁(yè)\總數(shù)二十四頁(yè)\編于十七點(diǎn)LightCycler?480與基因表達(dá)調(diào)控

微量樣品的定量檢測(cè)性能微量樣品基因表達(dá)調(diào)控分析干細(xì)胞研究、激光顯微切割…以microRNA的qPCR檢測(cè)性能為例：在LightCycler?480上檢測(cè)1、5、10、50個(gè)細(xì)胞的microRNA表達(dá)差異，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與預(yù)期結(jié)果很好地吻合即使是微量樣品的檢測(cè)分析也是輕松自如！目前十七頁(yè)\總數(shù)二十四頁(yè)\編于十七點(diǎn)96SamplesR/R:wildtype

CGG/CGGR/W:wt/mut2

(CGG)/(TGG)R/Q:wt/mut1

(CGG)/(CAG)Q/Q:mutant1

(CAG)/(CAG)W/W:mutant2

(TGG)/(TGG)LightCycler?480性能

兩個(gè)鄰近

SNP的區(qū)分目前十八頁(yè)\總數(shù)二十四頁(yè)\編于十七點(diǎn)可互換的熱循環(huán)模塊自己動(dòng)手DIY，快速方便隨機(jī)附送裝載箱，便于更換模塊無(wú)需廠家工程師在場(chǎng)無(wú)需重新校準(zhǔn)更換完畢后儀器自動(dòng)檢測(cè)并確認(rèn)模塊型號(hào)LightCycler?480熒光定量PCR儀

96孔模塊與384孔模塊互換目前十九頁(yè)\總數(shù)二十四頁(yè)\編于十七點(diǎn)

結(jié)合MagNAPure2.0全自動(dòng)核酸提取系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)更短的實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)換時(shí)間優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)和數(shù)據(jù)處理流程2小時(shí)內(nèi)完成從核酸純化到PCR鑒定的所有工作，而傳統(tǒng)流程需要6小時(shí)甚至一個(gè)工作日LightCycler?480熒光定量PCR系統(tǒng)

和全自動(dòng)核酸提取系統(tǒng)聯(lián)用目前二十頁(yè)\總數(shù)二十四頁(yè)\編于十七點(diǎn)LightCycler?480熒光定量PCR系統(tǒng)

結(jié)合自動(dòng)機(jī)械臂實(shí)現(xiàn)自動(dòng)裝板E.g.,TwisterIIPlateHandler(CaliperLifeScience)目前二十一頁(yè)\總數(shù)二十四頁(yè)\編于十七點(diǎn)可配機(jī)械臂，自動(dòng)化分液裝置可配備讀碼器可配備LIMS可配備全自動(dòng)的PCRworkflow系統(tǒng)試劑選擇范圍廣LightCycler?480熒光定量PCR儀：與自動(dòng)化流程整合目前二十二頁(yè)\總數(shù)二十四頁(yè)\編于十七點(diǎn)LightCycler?480熒光定量PCR系統(tǒng)

全能

可更換熱循環(huán)模塊：96384可采用多種樣品數(shù)及體積：96（10-100μl）；384（5-20μl）用不同光學(xué)濾鏡組合可檢測(cè)多種熒光染料：6個(gè)檢測(cè)通道可選多種檢測(cè)模式：適用目前所有的檢測(cè)模式方便強(qiáng)大的軟件工具模塊化軟件高速快速熱循環(huán)：

Heating:(4.8)°C/s