臨床基因擴增檢驗實驗室的設(shè)置質(zhì)量管理優(yōu)秀課件

臨床基因擴增檢驗實驗室的設(shè)置質(zhì)量管理第一頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五題外話：不參加實習課……？參加實習課……？第二頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五對相關(guān)管理文件的理解：臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法臨床基因擴增檢驗實驗室基本設(shè)置標準（第六條）臨床基因擴增檢驗實驗室工作規(guī)范（第十條、第十三條、第十四條）臨床實驗室必須遵循的管理辦法及其它行業(yè)標準第三頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五強調(diào)：污染的控制：預防為主質(zhì)量保證第四頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五污染的途徑：實驗材料試劑每一成分設(shè)備的每一部位每一操作步驟第五頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五污染的判斷：經(jīng)驗：全陽性，CT值>35；標準品的CT值發(fā)生波動陰性質(zhì)控陽性陽性率異常增高輕微污染和非特異性擴增？第六頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五污染和非特異性擴增:目的基因過程控制反應(yīng)體系（引物、模版、酶、鎂離子、退火、循環(huán)）條件優(yōu)化第七頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五控制的手段：工作區(qū)的嚴格劃分SOP的制訂和嚴格執(zhí)行去污染措施的常規(guī)采用第八頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五污染的監(jiān)測：陰性質(zhì)控的設(shè)置：陰性血清樣本以水為模擬標本僅含擴增反應(yīng)液（加鑒別實驗室是否污染的空白管)第九頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五質(zhì)控品的位置標準品－空白－陽性質(zhì)控－陰性質(zhì)控－臨床樣本標準品－空白－陽性質(zhì)控－臨床樣本－陰性質(zhì)控第十頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五實驗室的設(shè)置管理要求：設(shè)置標準和工作規(guī)范具體落實：實事求是、因地制宜第十一頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五設(shè)置標準和工作規(guī)范

“原則上分為四個分隔的工作區(qū)；……各區(qū)必須有明確的標記……”“每一區(qū)域都須有專用的儀器……；不同的工作區(qū)應(yīng)使用不同顏色或有明顯區(qū)別標志的工作服……；離開工作區(qū)時，不得將各區(qū)特定的工作服帶出……”“……，可在開展臨床標本檢測前對提取方法進行評價”“……，本區(qū)如采用副壓條件或減壓情況下可減少擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至前區(qū)的可能性。第十二頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五理想的設(shè)置緩沖間緩沖間擴增區(qū)試劑準備區(qū)樣本制備區(qū)產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間專用走廊工作流向磁性連鎖裝置第十三頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五現(xiàn)實的問題是：建筑結(jié)構(gòu)通道、門水電供應(yīng)采光、通風第十四頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五基本的要求:四個區(qū)域必須是相互獨立的各區(qū)的儀器設(shè)備及各種物品必須是專用的各區(qū)間不能直通，應(yīng)有緩沖間，供換工作服及鞋子用產(chǎn)物分析區(qū)應(yīng)安裝排風扇或其它抽風裝置。第十五頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五擴增區(qū)試劑準備區(qū)樣本制備區(qū)產(chǎn)物檢測區(qū)其它實驗室走廊實例：第十六頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五其它實驗室樣本制備區(qū)擴增區(qū)試劑準備區(qū)產(chǎn)品檢測區(qū)走廊實例：第十七頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五實例：產(chǎn)物檢測區(qū)擴增區(qū)樣本制備區(qū)其它實驗室第十八頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五休息區(qū)試劑準備區(qū)擴增區(qū)產(chǎn)物檢測區(qū)走廊模板加樣區(qū)實例：樣本處理區(qū)第十九頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五實例：第二十頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五小結(jié)：處理原則的核心是通過合理的設(shè)置解決好臨床PCR檢測實際運作動態(tài)過程中可能發(fā)生的污染的預防問題因此，實驗室的設(shè)計必須充分考慮到對污染來源和污染途徑的預防和控制第二十一頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五實驗室各區(qū)的功能和配置：第二十二頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五試劑儲存和準備區(qū)儲存試劑的制備試劑的分裝主反應(yīng)混合液的制備冰箱混勻器微量加樣器可移動紫外燈專用工作服和工作鞋消耗品（帶濾心吸頭、離心管、一次性手套等）專用辦公用品等。第二十三頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五標本制備區(qū)：臨床標本的保存核酸提取、儲存及其加入至擴增反應(yīng)管測定RNA時cDNA的合成不得在本區(qū)對樣本進行PCR擴增冰箱(2~8℃和-20℃或-80℃)高速臺式冷凍離心機水浴箱和/或加熱模塊生物安全柜混勻器微量加樣器可移動紫外燈專用工作服和工作鞋專用消耗品專用辦公用品等第二十四頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五擴增區(qū)：DNA或cDNA擴增已制備的DNA模板和合成的cDNA的加入主反應(yīng)混合液制備成反應(yīng)混合液如果空間允許的話，模板的加入也可以在一個獨立的空間內(nèi)完成核酸擴增儀微量加樣器(視情況定)可移動紫外燈專用工作服和工作鞋專用消耗品專用辦公用品等第二十五頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五產(chǎn)物分析區(qū)：擴增片段的測定最主要的擴增產(chǎn)物污染來源有可能使用致突變和有毒物質(zhì)微量加樣器可移動紫外燈專用工作服和工作鞋專用消耗品專用辦公用品等第二十六頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五輔助用房：清潔區(qū)標本接受區(qū)：靈活設(shè)置不干擾四區(qū)規(guī)范的保存和傳遞第二十七頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五實驗室使用和管理：標本接受區(qū)樣本制備區(qū)擴增區(qū)產(chǎn)物分析區(qū)試劑準備區(qū)第二十八頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五區(qū)域的適當合并：

“由于測定技術(shù)總是在發(fā)展之中，區(qū)域的合并應(yīng)根據(jù)儀器的特點而定”第二十九頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五小結(jié)：從核心儀器特點、實驗室的現(xiàn)狀出發(fā)，綜合考慮管理要求盡可能在現(xiàn)有條件下滿足管理要求以管理措施彌補硬件的不足有條件，留有余地再好的分區(qū)設(shè)置，如果不輔之與認真執(zhí)行的相應(yīng)的管理制度，等同于無。第三十頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五實驗室質(zhì)量體系的建立：管理要求體系建立第三十一頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五管理要求：1實驗室設(shè)置和設(shè)備1.1實驗室原則上應(yīng)分為四個區(qū)，但如使用全自動擴增檢測儀，區(qū)域可適當合并。1.2各工作區(qū)的明確標記1.3實驗室設(shè)置應(yīng)能有效地防止PCR后區(qū)產(chǎn)物的污染。

……第三十二頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五管理要求：2設(shè)施和環(huán)境2.1實驗室的設(shè)施、工作區(qū)域、能源、照明、溫控、通風等。應(yīng)便于檢測工作的正常進行。2.2實驗室應(yīng)配備溫度濕度計、穩(wěn)壓電源等。2.3進入和使用實驗室各區(qū)域應(yīng)有明確的限制和控制。2.4應(yīng)有實驗室清潔、消毒制度及相應(yīng)用具；2.5實驗室應(yīng)有有關(guān)生物污染物處理、生物防護等措施及相應(yīng)用具；第三十三頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五管理要求：3人員3.1實驗室應(yīng)配備足夠數(shù)量的人員；這些人員必須經(jīng)過培訓，并取得上崗證；3.2實驗室應(yīng)有培訓計劃和措施，保證其技術(shù)人員得到及時培訓。3.3實驗室應(yīng)保存其技術(shù)人員有關(guān)資格證書（如上崗證）、培訓、技能和經(jīng)歷等技術(shù)檔案。第三十四頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五管理要求：4設(shè)備管理4.1主要設(shè)備應(yīng)有維護程序文件及維護記錄；4.2(a)有問題的設(shè)備應(yīng)立即停止使用，并加上明顯標識，如可能應(yīng)將其貯存在規(guī)定的地方直至修復；(b)修復的設(shè)備必須經(jīng)校準、檢定（驗證）或檢測滿足要求后方能再次投入使用；(c)實驗室應(yīng)檢查由于上述缺陷對以前所進行的檢測工作的影響。4.3加樣器、溫度計、擴增儀和酶標儀等應(yīng)有校準程序并進行校準，擴增儀和酶標儀應(yīng)有明顯的標識表明其校準狀態(tài)。4.4應(yīng)保存擴增儀、酶標儀、生物安全柜、加樣器等設(shè)備的檔案第三十五頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五管理要求：5檢測方法5.1實驗室應(yīng)制定：有關(guān)儀器設(shè)備操作程序；有關(guān)擴增檢測的工作程序。5.2所有上述標準操作程序都應(yīng)現(xiàn)行有效并便于工作人員使用。5.3實驗室應(yīng)有儀器、試劑、消耗品的選購、驗收、貯存和質(zhì)檢程序；必須使用經(jīng)國家有關(guān)部門批準的試劑和儀器。第三十六頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五管理要求：6標本管理6.1實驗室應(yīng)建立對擬檢測標本的唯一編號識別系統(tǒng)。6.2實驗室應(yīng)制定有關(guān)標本收集、處理、運送、貯存程序。6.3在接收標本時應(yīng)有其狀態(tài)的詳細記錄。6.4實驗室應(yīng)確定標本是否符合檢測要求,拒收標本原因要明確。6.5如果標本必須在特定的環(huán)境條件下（如2-8℃、

-20℃和-70℃低溫）貯存，則應(yīng)對這些條件加以維持、監(jiān)控和記錄；第三十七頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五管理要求：7記錄7.1實驗室應(yīng)有適合自身實際情況又符合現(xiàn)行規(guī)章制度的記錄管理制度；7.2記錄應(yīng)有參與標本收集、標本準備和處理、檢測的人員簽字。7.3所有記錄和報告都應(yīng)安全貯存、妥善保管并保密。第三十八頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五管理要求：8報告8.1檢測結(jié)果的報告應(yīng)準確、清晰和客觀。定性測定報告“陰性”或“陽性”；定量測定則以拷貝數(shù)/ml或IU/ml報告。8.2每份報告應(yīng)包括以下信息：（a）標題，例如“檢測報告”（b）報告的唯一性標識（如序號）；（c）檢測標本的特性和狀態(tài)；（d）檢測標本的接收時間和進行檢測的時間；（f）采用的檢測方法；（g）實驗操作及校核人員的簽字，以及簽發(fā)日期；（h）檢測報告中應(yīng)給出參考結(jié)果或范圍；8.3當報告的有效性發(fā)生疑問時，實驗室應(yīng)立即通知臨床相關(guān)科室予以改正。8.4當臨床科室或患者要求用電話、圖文傳真或其它電子和電磁設(shè)備傳送結(jié)果時，實驗室應(yīng)保證工作人員遵循文件化的程序，并為對方保密。第三十九頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五管理要求：9質(zhì)量控制9.1實驗室應(yīng)有室內(nèi)質(zhì)量控制標準操作程序文件：（a）質(zhì)控物的合理性；（b）質(zhì)控方法（圖）的有效性；（c）失控的判斷；（d）失控的措施。9.2實驗室應(yīng)參加室間質(zhì)量評價第四十頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五管理要求：10抱怨10.1實驗室應(yīng)制定抱怨及其處理的標準操作程序；應(yīng)將抱怨資料及處理抱怨所采取的措施及結(jié)果記錄歸檔保存。10.2當抱怨或其它任何事項是對實驗室是否符合其現(xiàn)行程序、或者是否符合《臨床基因擴增實驗室管理暫行辦法》和《臨床基因擴增實驗室工作規(guī)范》、或是對其它有關(guān)實驗室校準或檢測質(zhì)量提出疑問時，則實驗室應(yīng)立即對這些范圍的工作和有關(guān)職責進行審核。第四十一頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五管理要求（現(xiàn)場考核）：送審的文件描述與實驗室實際情況的一致性實際運行與文件規(guī)定的一致性人員素質(zhì)：對文件的認知、熟悉、靈活運用程度第四十二頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五現(xiàn)場考核的實際內(nèi)涵：認識到不到位落實到不到位符合性檢查加指導性檢查有重點的全面檢查第四十三頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五建立質(zhì)量管理體系首先要解決的問題：第一個問題：質(zhì)量體系建立的核心問題是什么？第二個問題：質(zhì)量體系模式要達到的管理目的是什么？第三個問題：達到目的的方法（途徑、手段）是什么？第四十四頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五質(zhì)量體系的定義

為實施質(zhì)量管理所需的組織結(jié)構(gòu)、程序、過程和資源。要點：定義涵蓋了實驗室管理的每一個方面。

第四十五頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五組織結(jié)構(gòu)：一個組織為行使其職能，按某種方式建立的職責、權(quán)限及其相互關(guān)系。程序：為進行某項活動所規(guī)定的途徑。過程：將輸入轉(zhuǎn)化為輸出的一組彼此相關(guān)的資源和活動。第四十六頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五四個組成部分的關(guān)系：關(guān)鍵：核心——過程（活動）紐帶——程序

組織結(jié)構(gòu)程序

資源過程第四十七頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五理解“過程”的重要性

1、工作是通過過程來完成的。

2、質(zhì)量管理是通過對各種過程的控制來實現(xiàn)的。

3、質(zhì)量管理本身也是一系列的過程過程的分解、控制過程的有機組合過程第四十八頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五前處理檢測樣本采集和接受編制報告審核報告發(fā)放記錄保存登記編號質(zhì)控咨詢第四十九頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五質(zhì)量體系運行的目的方針目標質(zhì)量環(huán)及要素QS結(jié)構(gòu)QS文件QS運行QS審核QS評審質(zhì)量改進報告證書第五十頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五主要手段：質(zhì)量體系文件質(zhì)量方針：質(zhì)量手冊：闡明實驗室的質(zhì)量方針，各方面質(zhì)量管理的一般性描述程序性文件：對通用于整個實驗室的某些方面工作的文件化描述標準操作程序（SOP文件）：是實驗室最為具體、最具有可操作性、也是使用頻率最高的文件第五十一頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五PCR實驗室技術(shù)驗收對文件的要求：儀器設(shè)備的維護保養(yǎng)程序；儀器設(shè)備的校準程序；儀器設(shè)備的操作程序；臨床標本的收集程序；臨床標本的處理（核酸純化）程序；臨床標本的保存程序；核酸擴增及產(chǎn)物分析檢測的操作程序；試劑的質(zhì)檢操作程序；實驗室消耗品購買、驗收和貯存程序；實驗室廢棄物的處理程序；實驗室的清潔程序；室內(nèi)質(zhì)量控制程序；抱怨處理程序。第五十二頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五申請表的附錄5“需準備的標準操作程序（最低要求）”對實驗室的質(zhì)量手冊和程序文件沒作要求對必須具備的SOP文件的編撰格式?jīng)]作具體要求第五十三頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五SOP：實驗室最具個性的文件不夠嚴謹準確不夠連貫不夠嚴密第五十四頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五例：用加樣槍取100μl樣品加入提取液用加樣器（移液器）以前進式移液法吸取100μl樣品加入提取液第五十五頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五例：

向一新的經(jīng)高壓滅菌處理過的0.5ml離心管中加入10μl充分混勻的RNA提取液A（RNA提取液A易沉淀，取樣前需用移液器反復吸打混勻后吸?。?。加人50μl血清標本或陰陽性標準品，再加人200μl的RNA提取液B充分混勻。室溫放置5分鐘。6000rpm離心1分鐘，小心吸去上清，用75％的預冷乙醇（DEPC水配制）洗沉淀兩次。（取75％乙醇450μl洗沉淀，充分震蕩混勻，6000rpm，離心1分鐘，然后去上清，再用75％的乙醇450μl洗一次），65℃干燥沉淀10分鐘。（注：75%乙醇配制時須用試劑盒中提供的DEPCH2O）。第五十六頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五

機械地抄書、說明書、其它實驗室的文件。第五十七頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五撰寫SOP文件要做到：具有專業(yè)知識的人，按文件就能順利完成實驗忠實而且連貫地反映實驗過程對文件表述的理解無歧義嚴謹、嚴密準確和簡練第五十八頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五文件的文字組織：簡練明確向一新的經(jīng)高壓滅菌處理過的0.5ml離心管中加入10μl充分混勻的RNA提取液A（RNA提取液A易沉淀，取樣前需用移液器反復吸打混勻后吸?。＜尤?0μl血清標本或陰陽性標準品，再加人200μl的RNA提取液B充分混勻。室溫放置5分鐘。6000rpm離心1分鐘，小心吸去上清，用75％的預冷乙醇（DEPC水配制）洗沉淀兩次。（取75％乙醇450μl洗沉淀，充分震蕩混勻，6000rpm，離心1分鐘，然后去上清，再用75％的乙醇450μl洗一次），65℃干燥沉淀10分鐘。（注：75%乙醇配制時須用試劑盒中提供的DEPCH2O）。第五十九頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五質(zhì)量體系文件的構(gòu)成：

質(zhì)量手冊程序性文件質(zhì)量文件

質(zhì)量文件（作業(yè)指導書、表格、報告等）第六十頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五程序文件和SOP的關(guān)系對通用于整個實驗室的某些方面工作的文件化描述具體操作的標準化文件程序文件等同于以往的管理制度SOP等同于以往的操作卡或操作說明書第六十一頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五WhatWhoWhereWhenWhyHow寫合乎管理要求的，寫你做得到的第六十二頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五難點：寫你所做的做你所寫的記錄你所做的關(guān)鍵：SOP和記錄的必要性和重要性第六十三頁，共六十九頁，編輯于2023年，星期五儀器設(shè)備的校準程序目的：保證檢驗的有效性，準確性。范圍：本程序適用于滿足PCR實驗室檢測需要并可能對檢驗結(jié)果造成誤差的儀器設(shè)備。主要有：……職責：校準由PCR實驗室主任負責組織執(zhí)行。工作流程：4.1校準方法：……Finpipette可調(diào)式移液器校準采用廠家推薦方法。校準主要使用設(shè)備為BS110S電子天平（Max110g,d=0.1mg）?！?.2校準計劃：4.2.1啟用校準：設(shè)備在投入使用時實施啟用校準。4.2.2周期校準：設(shè)備在投入使用后，每半年實施一次校準。4.2.3維修后校準：設(shè)備在維修后須經(jīng)校準方可重新投入使用。4.2.4校準計劃外的校準：如在檢測及EQA，IQC活動中發(fā)現(xiàn)存在結(jié)果漂移或偏差及其它可疑情況時，通過分析對可疑設(shè)備實施校準。4.2.5Finpipette可調(diào)式移液器的校準順序：按照單一流向規(guī)定，對Finpipette可調(diào)式移液器的校準首先校準試劑準備區(qū)，然后依次為樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)。每校準完一個區(qū)的移液器，將其放回原處后，再取下一個區(qū)的移液器進行校準。4.2.6校準安排在不進行樣本檢測的日期完成。4.3校準的有效標識：經(jīng)校準的設(shè)備加貼綠色標簽，標簽上應(yīng)標明本次校準的日期和結(jié)果及下次校準的計劃預定日期。4.4校準結(jié)果的審批及記錄保存：每次校準的結(jié)果須及時送交科質(zhì)量負責人審閱簽字予以核準。校準記錄須妥善保存直至設(shè)備報廢。校準涉及的文件：5.1校準方法文件：Cal-SOP-1Cal-SOP-25