第一章菌種與種子擴大培養(yǎng)

第一章菌種與種子擴大培養(yǎng)決定發(fā)酵工業(yè)生產水平三要素：生產菌種性能；發(fā)酵過程的工藝及設備；產物提取過程的工藝及設備菌種來源誘變育種：誘變是工業(yè)發(fā)酵穩(wěn)產高產的重要保證；從自然界分離：目前土壤中已分離的微生物約為自然界總數(shù)的1-5%，微生物的多樣性仍然是以后若干年的研究重點；

基因重組：基因定向改造技術大大加快了生物產品開發(fā)的進程。一、工業(yè)微生物分離思路新菌種的分離是要從混雜的各類微生物中依照生產的要求、菌種的特性，采用各種篩選方法，快速、準確地把所需要的菌種挑選出來。實驗室或生產用菌種若不慎污染了雜菌，也必須重新進行分離純化。從自然界中分離菌種的一般過程新種分離與篩選的步驟定方案：首先要查閱資料，了解所需菌種的生長培養(yǎng)特性。采樣：有針對性地采集樣品。增殖：人為地通過控制養(yǎng)分或培養(yǎng)條件，使所需菌種增殖培養(yǎng)后，在數(shù)量上占優(yōu)勢。分離：利用分離技術得到純種。發(fā)酵性能測定：進行生產性能測定。這些特性包括形態(tài)、培養(yǎng)特征、營養(yǎng)要求、生理生化特性、發(fā)酵周期、產品品種和產量、耐受最高溫度、生長和發(fā)酵最適溫度、最適pH值、提取工藝等。

采樣1、采樣對象以采集土壤為主。一般園田土和耕作過的沼澤土中，以細菌和放線菌為主；富含碳水化合物的土壤（如一些野果生長區(qū)和果園內）和沼澤地中，酵母和霉菌較多；采樣的對象也可以是植物或動植物殘體，腐敗物品，霉菌較多；某些水域厭氧菌含量較多。2、采樣季節(jié)：以溫度適中，雨量不多的秋初為好。3、采土方式：在選好適當?shù)攸c后，用小鏟子除去表土，取離地面5-15cm處的土約10g，盛入清潔的牛皮紙袋或塑料袋中，扎好，標記，記錄采樣時間、地點、環(huán)境條件等，以備查考。采好的樣應及時處理，暫不能處理的也應貯存于4℃下，但貯存時間不宜過長。增殖培養(yǎng)就是給混合菌群提供一些有利于所需菌株生長或不利于其他菌型生長的條件，以促使目標菌株大量繁殖，從而有利于分離它們。例如碳源利用的控制，可選定糖，淀粉、纖維素，或者石油等，以其中的一種為唯一碳源，那么只有利用這一碳源的微生物才能大量正常生長，而其它微生物就可能死亡或淘汰。這樣對下階段的純種分離就會順利得多。純種分離盡管通過增殖培養(yǎng)效果顯著，但還是處于微生物的混雜生長狀態(tài)。因此還必須分離，純化。純種分離的方法有劃線分離法、稀釋分離法。性能測定這一步是采用與生產相近的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，通過三角瓶的容量進行小型發(fā)酵試驗，以求得適合于工業(yè)生產用菌種。這種直接從自然界分離得到的菌株稱為野生型菌株，以區(qū)別于用人工育種方法得到的變異菌株。工業(yè)生產常用菌種細菌(Bacteria)放線菌(Actinomycetes)單細胞真菌----酵母(Yeast)多細胞真菌----霉菌(Molds)1細菌(Bacteria)

形狀和大小：單細胞微生物；有球型、桿型和螺旋型；典型直徑0.5～1微米，長度～10微米；繁殖方式：裂殖，倍增時間25～45分鐘。工業(yè)上重要的細菌：G+：枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌、北京棒桿菌等。G-：醋酸桿菌、大腸桿菌。產品：淀粉酶制劑，乳酸，乙酸，氨基酸等2放線菌(Actinomycetes)形狀和大?。杭毎书L絲狀，菌落呈放線狀，介于細菌和真菌之間，菌絲直徑0.2～1.2微米，與桿菌接近；生長和繁殖：低等的(如諾卡氏菌)通過菌絲斷裂繁殖；高等的(如鏈霉菌)在孢子絲成熟后分化成許多孢子，孢子在適宜的環(huán)境中吸收水分，膨脹、萌發(fā)，成為新的放線菌。2放線菌(Actinomycetes)工業(yè)上重要的放線菌龜裂鏈霉菌（土霉素）金黃色鏈霉菌（金霉素）灰色鏈霉素（鏈霉素）紅鏈霉菌（紅霉素）紅小單胞菌（慶大霉素）委內瑞拉鏈霉菌（氯霉素）卡那鏈霉菌（卡那霉素）

3單細胞真菌----酵母(Yeast)形狀和大?。簡渭毎?，卵圓形，圓形或圓柱形；比細菌大，直徑約1～5微米，長約5～30微米。生長與繁殖：酵母分有性和無性繁殖，以無性繁殖為主。無性繁殖分為芽殖和裂殖，以芽殖為主。工業(yè)上重要的酵母菌啤酒酵母(酒精、啤酒等)

假絲酵母(單細胞蛋白、檸檬酸、脂肪酸、石油脫蠟)。4多細胞真菌----霉菌(Molds)形狀和大?。悍种?，菌絲體盤結交錯，形成濃密菌落，使發(fā)酵液粘稠。比放線菌大，直徑3～10μm生長與繁殖：片段菌絲可以生長成新的菌絲體；有性和無性方式，產生孢子進行繁殖；無性繁殖是主要方式，生長中，菌絲伸長和分支，從菌絲體頂端形成新的孢子，繼而形成細胞。新細胞具有菌齡，典型的倍增時間為4～8小時；4多細衡胞真公菌--掌--霉菌(M蚊ol斑ds袋)工業(yè)區(qū)上重賣要的吼霉菌曲霉訪屬:黑曲環(huán)霉—淀粉礦酶、笨蛋白甩酶、喬檸檬敘酸和葡頑萄糖治酸米曲屢霉—醬油青霉汽屬:產黃賺青霉—青霉責素展開殺青霉—灰黃養(yǎng)霉素根霉圍屬:米根引霉—制曲觸、乳鉛酸一些碌常用爪工業(yè)佩微生窯物抗生朋素生格產有輔關的拔微生溜物放線澆菌（夠鏈霉永素四賴環(huán)素板；紅倡霉素保等）真菌作（青沖霉素麥、頭溝孢等怖）一些級產芽收孢的鞏細菌植物登或動勒物來臣源氨基返酸生涂產菌絕的要犧求：代謝擔途徑哀比較始清楚巨，代謝枕途徑勝比較招簡單谷氨犯酸發(fā)漿酵的塞菌種?。浩渌匕被鶔嵘岙a菌瓜：棒桿彈菌屬國，短懼桿菌埋屬、押節(jié)桿獄菌屬綱或小桿菌耍屬的縱棒型宰細菌常規(guī)刮菌種鏈一般誤也是盟以谷貼氨酸理生產姐菌選冰育而械成；棉工程天菌，希大腸更桿菌感，枯巾草芽藝孢桿腫菌氨基停酸生護產有株關的凈微生跌物食品必工業(yè)瓣微生倒物包括間：釀謝造業(yè)椅，酶制考劑等食品臟用的矩微生朝物需率經過牛嚴格漸的毒悅理試忌驗，止目前牽已同刮意使廳用的疫僅僅席少數(shù)盤微生燃物能補用于河生產膏食品極用酶演。α—淀粉擦酶：掃黑曲頂霉、鬼米曲返霉、玩米根畫酶、屆枯草芽孢桿薪菌和地適衣芽孢桿接菌誘變棗育種以微則生物體的自當然變漂異作宴為基轉礎的港生產掉選種忌的機屈率并咐不很視高，貓一個芳基因挪的自法然突翼變頻挖率僅10-6~1俱0-1運0左右禍。誘變踏育種閘：利用避各種物理紡因素丟和化膀學試芬劑處理蕉微生吉物細航胞，提高杜基因碌突變押頻率，再賭通過覽適當紀的篩勻選方洗法獲主得所攻需要蹲的高輔產優(yōu)凈質菌濟種的例育種咱方法想。誘發(fā)直突變蓋的育斥種，副是迄欣今為貨止國暈內外梅提高貸菌種滋產量拖、性況能的膛主要倒手段肥。誘變雪劑物理育誘變坦劑：哥射線俱如紫矮外線宅、X-射線棵、γ-射線垃，快儉中子靠；生物頂誘變寺劑：腹噬菌躁體、蚊轉座揪子化學稍誘變播劑：愛化學巡壽因子猾如堿擋基類非似物牌、5-氟尿南嘧啶習、烷殿化劑漫等。誘變賽育種旺步驟出發(fā)敘菌株照的選勿擇菌懸諸液的拿制備前培粗養(yǎng)誘變騎處理變異驕菌株島的分葬離和妨篩選紫外袖線的灰誘變燥育種紫外寒線誘德變一踩般采容用15延W紫外蝕線殺懼菌燈，波礦長為25略37顯A．燈與福處理炎物的距離健為15～30怠cm，照射滿時間咐依菌挪種而崗異，鮮一般柳為幾慌秒至沾幾十早分鐘雀。一遞般我姑們常槍以細甘胞的咽死亡脫率表疲示，票希望春照射性的劑狀量死亡如率控材制在70～80反%為宜。例被照肚射的菌懸戒液細點胞數(shù)，細紡菌為106個／ml左右戚，霉盯菌孢欣子和憐酵母嘩細胞沫為106～107個／ml。由于雪紫外禿線穿透袖力不強諸，要餓求照雜射液帶不要峽太深電，約0.歸5～1.師0c厲m厚，越同時候要用扇電磁既攪拌協(xié)器或禁手工栗進行攪拌，使扣照射便均勻既。由于唯紫外符線照累射后頌有光老復活萬效應晴，所姥以照榆射時瓦和照薦射后洽的處盯理應鞏在紅燈甲下進非行。操作郊步驟1．將細菌友培養(yǎng)隔液以30辮00粒r／mi渣n離心5m殃in，傾去廳上清踩液，修將菌蓬體打伍散加對入無匹菌生蚊理鹽矮水再丹離心詳洗滌校。2．將惠菌懸宜液放調入一配巳滅準菌的哲，裝向有玻括璃珠考的三似角瓶呀內用曲手搖樹動，激以打暖散菌儀體。碑將菌沒液倒監(jiān)入有押定性牧濾紙董的漏伙斗內撤過濾油，單取細胞帶濾液救裝入絲式試管恒內，枯一般鉛處于犁渾濁殖態(tài)的兵細胞被液含族細胞沫數(shù)可楊達107-1單08個／ml左右浮，作熔為待嬸處理菌懸訓液。3．取2～4m柿1制備鄭的菌撓液加訪到直武徑9c涉m培養(yǎng)傲皿內傷，放攻入一貢無菌傳磁力爬攪拌所子，制然后見置磁宴力攪汪拌器澤上、15撿W紫外卻線下30鄭cm處。據(jù)在正初式照戒射前騙，應透先開拋紫外鉛線10墻mi南n，讓王紫外悅燈預丑熱，燙然后飛開啟陳皿蓋舅正式耽在攪各拌下照射10～50褲s。操鈴作均這應在袍紅燈腎下進懇行，搏或用頭黑紙政包住行，避恒免白全熾光踢。4．取卷未照磁射的吼制備冶菌液即和照眨射菌定液各0.特1m此l進行券稀釋腳分離攪，計誼數(shù)活毀菌細殊胞數(shù)固。5．取兩照射診菌液2m搏l于液間體培眠養(yǎng)基燙中(3講00擁ml三角桶瓶內謊裝30撓ml培養(yǎng)晝液)，12驚0r／mi篩n振蕩捐培養(yǎng)4～6h。6．取中雙間培差養(yǎng)液冶稀釋廁分離租、培錢養(yǎng)。7．挑丟取菌紗落進圣行檢麥測?；驊{的直綢接進袖化育伐種突變基因帶突變房誠庫的魔建立篩選基因舍突變橫庫的只篩選基因帆復制銀與遺聽傳步驟研：在分捉子水輛平上盈，對濃目標怨基因芝直接部處理插，然攻后通德過高筍通量夏的篩宋選方塘法，榮提高賓目標超蛋白西的性遵能。能夠給利用泉廉價鋪的原扭料，簡辱單的擁培養(yǎng)允基，爪大量拌高效芳地合恥成產物有關合成民產物趕的途盯徑盡可營能地垃簡單兵，或務者說標菌種奇改造炕的可操政作性貸要強遺傳森性能要相狗對穩(wěn)牌定不易技感染棟它種炮微生液物或噬菌那體不是淺病原寧菌，產文生菌塵及其衰產物春的毒逝性必我須考蛇慮（什在分宋類學噸上最且好與柏致病午菌無擾關）生產剛特性徑要符糖合工宋藝要黎求，培休養(yǎng)條誦件易垃于控李制，護生長餐迅速攜、發(fā)投酵周鑄期短工業(yè)必微生鎮(zhèn)物的綠要求防止壯菌種婦衰退衰退丟的表惕現(xiàn)：所需貞產物荷的生郊產能峰力下脊降，速營養(yǎng)婦物質拉代謝鎮(zhèn)和生珠長繁關殖能訓力下就降，慮發(fā)酵淡周期象延長橫，抗著不良椒環(huán)境懲條件粱的性抬能減仇弱等衰退稅的原惱因：內因恰：基蜘因突罪變，刮變異可菌株風性狀錫分離外因背：菌漏種保船藏不絡妥；或菌種指的生北長條奸件要像求沒脾有得膠到滿筆足；追或遇燒到不騎利的妥條件摔，或勇失去喜某些吸需要雷的條遙件等崖；菌蟻種的連續(xù)鳥傳代是菌火種退餡化的叮主要濕原因防止唉衰退菜的方含法：合理蒼培養(yǎng)灣條件防，減主少傳愉代次貍數(shù)復壯衛(wèi)：分離碎單細惜胞，甚抗性吳篩選面，苛臣刻條餓件純菌嚇種自發(fā)燥突變不純脈菌種突變灶個體傳代魯增殖原始卸個體工業(yè)割微生典物菌義種保怎藏技己術(1貫)低溫請冷凍塊保藏扒；(2津)轉接怒培養(yǎng)劫或斜腸面?zhèn)髂蟠兀?3距)礦物寶油保姥藏；(4掌)土壤激或陶看瓷珠毛等載擺體干抱燥?；畈?。保藏術原則蒸：選擇耳優(yōu)良貨純種沙、創(chuàng)假造休請眠環(huán)賺境保藏嘉要求頌：保彼持菌抓種優(yōu)賴良特礙性，掏經濟盛方便保藏杯后需罷再次鑄檢測五和確扁定保新藏菌鴿種的杏形態(tài)變學和驚生化譯特征(如代瞇謝產尤物的灑產生住、酶置活力娘、遺歸傳特煎征及逮生化遺指標)。冷凍欺保藏酬：-2耗0℃以下活冷凍伯，使補微生接物代撤謝活洋動?；I止分類博：普饞通冷體凍保暮藏(-收20食℃)超低乒溫冷含凍保永藏(-吸60一-8臥0℃梯)液氮醋冷凍俯保藏(-宵15僵6℃慈)特點丸：簡拋單有輩效培養(yǎng)紋物運籍輸較痰困難在超估低溫爐冷藏幼柜中葵保藏簽菌種鈴的一基般方輕法是茫：1．離赴心收拿獲對府數(shù)生轟長中嚇期至友后期杏的微滾生物臭細胞2．用脅新鮮伏培養(yǎng)獲基重召新懸紫浮所夏收獲牢的細畜胞；3．加距入等樹體積屑的20％甘飯油或10％二橋甲亞擋砜；4．混預勻后強分裝丹入冷略凍指舊管或桂安瓿態(tài)中，謝于-7暖0℃超低供溫冰福箱中承保藏逃。超低陶溫冰喇箱的古冷凍盯速度妥一般巷控制套在1-簽2℃／mi圓n。一頭些細棟菌和尊真菌杏菌種尚可保兔藏5年而敗活力撿不受巴影響淺。凍干逐保藏：是擾通過誤在減龍壓條適件下哲使凍糖結的漿細胞士懸液疤中的鉤水分瓜升華私，使名培養(yǎng)撞物干卵燥。此法趕是微地生物驕菌種煤長期嘴保藏漸的最康為有覽效的鑼方法守之一景。特點偽：凍干賽狀態(tài)刊下一執(zhí)般可至保藏10年不直喪失矮活力凍干歌后的愈菌株墨可常落溫保隆存，薦便于嶄運輸必須華使用孕冷凍純保護鐘劑，斤常用鼻脫脂溝乳、局蔗糖周等傳代婚保藏仁：斜授面培化養(yǎng)基企，平竄行傳單代，喊普通襪冰箱繭，三箱個月調以下余保存聲，供肥試驗裹用礦物叫油保券藏：斥將瓊挨脂斜袍面或直液體黨培養(yǎng)銹物浸鏡入礦購物油陣中于培室溫脈下保矛藏，慰簡便隱有效金，可披用于訓絲狀根真菌司、酵祖母、載細菌窩和放銀線菌宴的保咬藏。檢特別亞用于蘆難以恨冷凍考干燥祝的絲店狀真凳菌和服難以宇在固彩體培公養(yǎng)基夠上形浸成孢炭子的凍擔子餡菌載體煉保藏群：麥構殼，居砂土膚滅菌便后可嘴用作膊載體幾種獸常用款菌種不保藏皺方法悲的比殲較方法名稱主要措施適宜菌種保藏期評價冰箱保藏法（斜面）冰箱保藏法（半固體）石蠟油封藏法*沙土保藏法冷凍干燥法低溫低溫低溫、缺氧干燥、無營養(yǎng)干燥、無氧、低溫、有保護劑各大類細菌、酵母菌各大類**產孢子微生物各大類3~6月6~12月1~2年1~10年5~15年以上簡便簡便簡便簡便簡便、有效種子嘴：將保燥存在渠砂土掠管、焰冷凍禮干燥泳管中站處休猜眠狀播態(tài)的詞生產照菌種肚接入鄭試管紡斜面捐活化炸后，幻玉再經領過扁繳瓶或未搖瓶鏟及種緊子罐幟逐級賊擴大闊培養(yǎng),最終牛獲得一定慚數(shù)量共和質重量的映純種過程章。這介些純乖種培專養(yǎng)物僵稱為擴種子雖。種子殿液質而量的濃優(yōu)劣濤對發(fā)信酵生戒產起凡著關丸鍵性襯的作渣用。二、叔種刑子擴加大培漏養(yǎng)種子快擴培屠的目學的接種爬量的販需要菌種彩的馴晝化縮短迫發(fā)酵劈燕時間些、保禿證生彈產水刻平種子溉的要者求：總量提及濃決度能菠滿足鮮要求生理抹狀況息穩(wěn)定劣，保嘉持穩(wěn)惱定的煙生產敢能力活力探強，勁移種堅至發(fā)守酵后牢，能廁夠迅獸速生寸長無雜綢菌污咱染二，殘種子席制備余的過舒程：實驗蒸室種紙子制斃備階帥段：不用港種子博罐，言所用幕的設悶備為趴培養(yǎng)盞箱、叢搖床叔等實葉驗室臭常見屬設備何，在黃工廠榜這些熔培養(yǎng)攪過程瞞一般蒼都在授菌種剩室完者成，掌因此甲將其圍稱為披實驗士室階呼段的造種子尤培養(yǎng)飽。生產疲車間尋種子賞制備啟階段：種子厲培養(yǎng)拳在種忌子罐基里面鋪進行武，一介般在默工廠超歸發(fā)幸酵車巾間管強理，趁因此產稱這賠些培查養(yǎng)過駐程為拖生產問車間溜階段濾。實驗蛾室種豪子的陸制備對于產孢華子能陰力強的及墊孢子躍發(fā)芽猜、生虹長繁滾殖快贊的菌總種可起以采袖用固體摔培養(yǎng)皇基培抱養(yǎng)孢子磁，孢膝子可鮮直接旋作為蝦種子斬罐的答種子門，這筋樣操亮作簡夸便，陪不易待污染撈雜菌將。對于產孢蔥子能猾力不奧強或皮孢子貞發(fā)芽吩慢的菌翠種，播可以但用液體摔培養(yǎng)目法。試闖管→猛三角筋瓶→缺搖床胃→種謝子罐生產亂車間隸種子哭制備實驗誓室制燦備的蘭孢子農斜面朱或搖使瓶種橡子移桶接到船種子鍋罐進福行擴誰大培城養(yǎng)種子局罐培朱養(yǎng)一蘇方面草使菌菌種獲貢得足夠匯的數(shù)多量，另壓一方污面種照子罐忘中的先培養(yǎng)債基更污接近朽發(fā)酵睡罐培揉養(yǎng)的申醪液維成分塌和培令養(yǎng)條牲件，翼譬如認通無偵菌空扔氣，搜攪拌餐形式鼓等等載，以凳使菌鉆體適應言發(fā)酵筍環(huán)境（1）表慨面培添養(yǎng)表面曠培養(yǎng)匯是一筍種好氧餅靜置走培養(yǎng)智方法。針綱對容塞器內戲培養(yǎng)循基物縮慧態(tài)又遠分為晨液態(tài)男表面青培養(yǎng)儉和固陜態(tài)表嫂面培跪養(yǎng)。相對崖于容霧器內蓄培養(yǎng)刑基體途積而耳言，朽表面槍積越腔大，仙越易販促進氧氣嗎由氣示液/氣固禍界面耽向培紀養(yǎng)基撞內傳策遞。這種磨培養(yǎng)島方法改菌的桿生長士速度絡與培揀養(yǎng)基助深度忠有關逝，單甲位體叢積的績表面豪積越威大，嗽生長輛速度繪也越念快。氧的尾供給糾常成沃為發(fā)低酵的暫限速洲因素，所超以發(fā)情酵周編期長埋，占捐地面雕積大瓶。優(yōu)點是不悟需要爭深層羨培養(yǎng)板時的從攪拌以和通色氣，節(jié)省機動力。如焰醋酸宿、檸瞞檬酸舉發(fā)酵欲和曲僚盤制劫曲。種子昏培養(yǎng)心的方邁法固體北培養(yǎng)遇又分截為淺盤敵固體奸培養(yǎng)和深層被固體闖培養(yǎng)，統(tǒng)衡稱曲責法培鵝養(yǎng)。生它起皺源于包我國灶釀造吐生產專特有版的傳顆統(tǒng)制灰曲技紅術。飼其最攪大特寫點是乳固體秒曲的敘酶活訴力高磨。（2）固李體培銀養(yǎng)固體之培養(yǎng)疼具有賺以下涉優(yōu)點準：①原料：以容谷物批和農昌業(yè)廢起物為毯主要拌原料衡，只耗需外掃加適蓄量水徑分、鬼無機聯(lián)鹽等研。培寬養(yǎng)基擠組成羞簡單廳。②防止銅污染：利呀用霉按菌能夜在水詠分較德低的鞋基質童表面預進行勞增殖互的特證性，賢在這焦種條攀件下直，細脊菌生技長不賊好，系因此衡不易成引起鐮細菌忠污染酷。③通氣：無削論淺逼盤或殘深層畜固體伸通風絞制曲狗，可退以在杠曲房寧周圍艙使用符循環(huán)尖的冷漠卻增路濕的她無菌潛空氣殿來控壺制溫波濕度李，并鐮且能震根據(jù)葛菌種跡在不潛同生耳理時掉期的妄需要蹈，靈檔活加顆以調拋節(jié)。珠在固預體培兄養(yǎng)中慕，氧曲氣是隨由基叮質粒膽子間源空隙耳的空嗎氣直厚接供蛋給微割生物習，比抱液體倉培養(yǎng)蕉時的刻用通求氣攪捆拌供掛給氧虹氣節(jié)港能。（3）液體佳深層碧培養(yǎng)用液沿體深筒層發(fā)援酵罐霞從罐啄底部頂通氣載，送錦入的耗空氣附由攪射拌槳粥葉分答散成碗微小即氣泡馬以促瘋進氧榆的溶訴解。炕這種書由罐歇底部降通氣終攪拌拐的培防養(yǎng)方竹法，貨相對室于由浮氣液追界面紡靠自愈然擴銳散使白氧溶勿解的恢表面裕培養(yǎng)宰法來配講，販稱為深層大培養(yǎng)揚法。特點是容可易按掉照生跨產菌船種對旺于代暑謝的猾營養(yǎng)令要求汗以及麻不同爬生理飄時期錫的通投氣、夏攪拌燦、溫侮度、倉與培燦養(yǎng)基雷中氫余離子蝴濃度雁等條鋤件，差選擇最佳奶培養(yǎng)觸條件。（4）載纏體培崖養(yǎng)法載體懇培養(yǎng)晨脫胎計于曲陡法培耕養(yǎng)，唯同時熄又吸獵收了榮液體悲培養(yǎng)眨的優(yōu)泛點，惱是近嚇年來余新發(fā)緩展的趨一種深培養(yǎng)上方法郵。特征轉是以帖天然蘆或人柴工合升成的聚多孔斗材料住代替雪麩皮飛之類魂的固模態(tài)基何質作免為微丑生物灰的載奏體，艘營養(yǎng)爺成分隆可以寸嚴格坡控制睡，發(fā)卷酵結萬束，測只需汁將菌遙體和蘆培養(yǎng)草液擠竟壓出魔來進接行抽欣提，加載體少又可艱以重赴新使悶用。載體枕的取旦材必斥須耐語蒸汽哨加熱登或藥聯(lián)物滅競菌，兆多孔毅結構埋既有桌足夠的表漏面積矮，又龜能允憑許空放氣流腹通。影響般種子視質量葵的因哲素及烏控制1，種核子質印量的涉判斷種子止質量槽的最脂終指沖標是五考察禮其在猛發(fā)酵輸罐中襯所表盆現(xiàn)出旬來的生產惕能力。在培重養(yǎng)過迅程中設定期熊取樣暈測定顧一些市參數(shù)塞以觀符察基信質的盾代謝映變化忽及菌肺絲形百態(tài)是夕否正全常。1）pH；2）培喚養(yǎng)基網(wǎng)滅菌雙后磷覆、糖嫂、氨象基氮末的含限量；3）菌捷絲形澇態(tài)、澆菌絲抓濃度夠和培崇養(yǎng)液快外觀葉（色支素、貼顆粒怕等）渣；4）其嗎他參棟數(shù)，府如接釘前抗燈生素剃含量暮、某蠻種酶蘿活力羊等5）無任易何雜墨菌污密染2，影臘響種稀子質腫量的眠主要堆因素（1）培養(yǎng)遇基主要儉是碳漆源、將氮源嫂、無雙機鹽味、生酬長素武和水蒙等。（2）培養(yǎng)店條件①溫獄度：悼溫度玩直接仆影響久生長澇和酶含的合俱成；②pH值：罵對微育生物進有明迅顯的獸影響亞。③通狡氣攪筑拌：躍（溶洽解氧竿的作椒用：至參與演菌體測呼吸游作用拜）④泡作沫(危害舉：影刑響微糊生物陰對氧喘的吸橡收；背妨礙CO2的排今除；系減少鋒設備遺利用屯率)（3）染菌的控洞制染菌豎原因姑：設做備、東管道嘗、閥禮門漏午損、頓發(fā)酵泡罐結抽構“澤死角喇”、妹滅菌籠不徹椅底、邪空氣饅凈化滿不好結、無叨菌操勺作不每嚴、夸菌種暢不純店；（4）種齡以及接籠種量種齡違：是邁指種駕子罐兔中培訴養(yǎng)的宣菌絲撿體開荷始移澡入下劃一級驕種子寶罐或鋤發(fā)酵搏罐時河的培養(yǎng)私時間。通常掀種齡案是以仍處于磨生命菜力極箱旺盛換的對數(shù)榜生長歉期，標菌體次量還走未達裹到最持大值時的皮培養(yǎng)啟時間術較為閉合適之。時間同太長，菌凱種趨差于老接化，豎生產群能力混下降扮，菌蹄體自伐溶；種齡輸太短，造壯成發(fā)侮酵前焦期生鵲長緩膊慢。接種滔齡與廈接種仗量接種卷量：抗是指冷移入業(yè)的種鍛子液局體積你和接糧種后瘋培養(yǎng)惹液體積廉的比急例。接種姓量的恢大小決定勝于生惹產菌司種在現(xiàn)發(fā)酵穩(wěn)罐中斑生長膀繁殖屯的速廚度，采殲用較亮大的概接種鏡量可丹以縮卡短發(fā)糕酵罐罵中菌撕絲繁趣殖達歸到高告峰的偶時間維，使免產物訓的形擁成提描前到攻來，壇并可丑減少努雜菌跟的生月長機測會。贈但接界種量秘過大透或者真過小拉，均城會影遺響發(fā)博酵。過大伯會引炕起溶暴氧不襪足，而影響混產物朝合成逝；而煎且會遵過多邪移入托代謝薦廢物摟，也陸不經奧濟；漂過小件會延曠長培壟養(yǎng)時銷間，典降低政發(fā)酵醫(yī)罐的狀生產圾率。通?？冉臃N場量，扶細菌1~涂5%，酵日母菌5~臟10粒%，霉次菌7~段15察%，接種業(yè)齡與茶接種牢量移種回：防止還染菌孢子調懸浮翠液種黨子、胖搖瓶腦菌絲賴體種慣子采峽用火罐癢法或壓差吸法接入近。種子癢罐之銅間或椅發(fā)酵露罐間腐的移雹種方肺式，積主要支采用虧差壓役法。技由種援子接薄種管述道進變行移裹種，患移種劉過程瞧中要防止頸接受籮罐表格壓降濫至零，否橡則會濾引起具染菌沸。從實里驗室消搖瓶蕩或孢差子懸沃浮液讓容器鮮接種從種子狠罐接終種種子構罐級旺數(shù)的誕確定孢子恩或搖糖瓶菌畜絲一級恥種子炸罐二級疑發(fā)酵發(fā)酵褲罐二級勸種子踐罐三級屢發(fā)酵發(fā)酵蝦罐四級油發(fā)酵發(fā)酵夾罐三級杜種子袍罐種子烤罐級侄數(shù)：奮是指同制備遍種子初需逐思級擴貝大培嶺養(yǎng)的對次數(shù)刻：1、接賞種量2、孢幻玉子發(fā)稍芽能浴力、掏菌體泄生長愈特性3、發(fā)有酵規(guī)防模級數(shù)粱大，釀難控熊制、火易染敬菌、最易變節(jié)異，夠難管姐理，啦一般2-劣4級種子控進入睜發(fā)酵選罐：猶能迅毫速生剛長，垮達到臥一定號的量鋤，利紛于產兔物合為成。3、種坊子異反常分纏析A、菌誘種生增長發(fā)攀育緩鑰慢或低過快他：通入門的空案氣溫張度低芹、滅尚菌質勢量差B、菌券絲結親團：接種趨量、檔攪拌抬不好廣。C、菌竟絲粘葛壁：攪拌頓不好毫、泡尿沫多璃、裝耕料少掩。種子謙制備屋過程智舉例一、單谷氨襲酸生綁產的強種子在制備制備惜過程斜面娘菌種→一級平種子膏培養(yǎng)→二調級種子潤培養(yǎng)→發(fā)酵1、斜猶面(A猜S1戶.2懶99猶)培養(yǎng)巖基：版蛋白徑胨1%，牛滴肉膏1%，氯頓化鈉0.繞