第九章免疫學(xué)應(yīng)用

第九章

免疫學(xué)應(yīng)用第一節(jié)免疫學(xué)防治（一）人工自動(dòng)免疫給機(jī)體輸入疫苗或類毒素等抗原物質(zhì)，刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫力。免疫力出現(xiàn)較慢但持久，多用于預(yù)防。1、死疫苗：用物理、化學(xué)方法殺死病原微生物制備而成的疫苗。如傷寒、霍亂、百日咳等。2、活疫苗：通過毒力變異或人工選擇法獲得的減毒或無毒株。類似于輕癥或隱性感染。如卡介苗、麻疹、風(fēng)疹、脊灰疫苗。3、類毒素：外毒素經(jīng)0.3%~0.4%甲醛處理后失去毒性但保持抗原性的生物制品。如白喉、破傷風(fēng)類毒素。4、新型疫苗：亞單位疫苗、合成疫苗和基因工程疫苗。（二）人工自動(dòng)免疫的注意事項(xiàng)1、接種對(duì)象2、接種劑量、次數(shù)和間隔時(shí)間3、接種途徑4、接種后反應(yīng)5、禁忌癥二、免疫學(xué)治療（一）人工被動(dòng)免疫是給機(jī)體輸入抗體，使機(jī)體獲得特異性免疫力。維持時(shí)間短，一般2~3周，多用于緊急預(yù)防。如抗毒素、人丙種球蛋白、人特異性免疫球蛋白。（二）免疫增強(qiáng)劑是增強(qiáng)、促進(jìn)和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的生物或非生物制劑。主要用于腫瘤、免疫缺陷病和傳染病的輔助治療。（三）過繼免疫：分特異性和非特異性兩種。（四）免疫抑制劑第二節(jié)免疫學(xué)診斷

一、體液免疫檢測(cè)（抗原或抗體的檢測(cè)）抗原-抗體反應(yīng)包括沉淀反應(yīng)、凝集反應(yīng)、溶解反應(yīng)、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)和中和反應(yīng)等?？乖?抗體反應(yīng)可用已知的特異性抗體檢測(cè)未知的抗原；也可用已知的抗原檢測(cè)未知的抗體。免疫熒光技術(shù)、免疫酶技術(shù)、同位素標(biāo)記技術(shù)、發(fā)光免疫分析等免疫標(biāo)記技術(shù)提高了抗原抗體反應(yīng)的敏感性?？乖?抗體反應(yīng)的特點(diǎn)抗原-抗體的結(jié)合是特異性結(jié)合抗原抗體結(jié)合是分子表面的非共價(jià)鍵結(jié)合抗原抗體反應(yīng)可分為兩個(gè)階段特異性結(jié)合階段可見的反應(yīng)階段抗原和抗體結(jié)合是否呈現(xiàn)可見的反應(yīng)現(xiàn)象，于兩者的分子比例密切相關(guān)抗原抗體比例對(duì)反應(yīng)現(xiàn)象的影響抗原-抗體反應(yīng)受多種因素影響1電解質(zhì)：抗原-抗體反應(yīng)通常應(yīng)用0.85%的氯化鈉作為稀釋液，以供給適應(yīng)濃度的電解質(zhì)。2溫度：一般常使用反應(yīng)在37度水浴或孵育箱中進(jìn)行。3.酸堿度：抗原-抗體反應(yīng)適應(yīng)的酸堿度

為PH6~8?？乖?抗體反應(yīng)受多種因素影響抗原抗體的檢測(cè)方法凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)補(bǔ)體溶血反應(yīng)和補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)中和反應(yīng)用標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)凝集反應(yīng)

(Agglutination)細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后形成凝集現(xiàn)象，稱為凝聚反應(yīng)。1、直接凝集：將細(xì)菌或紅細(xì)胞與相應(yīng)的抗體直接反應(yīng)，出現(xiàn)細(xì)菌凝集或紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。又分為玻片法和試管法。2、間接凝集：將可溶性抗原包被在紅細(xì)胞或乳膠顆粒表面，與相應(yīng)抗體反應(yīng)出現(xiàn)顆粒凝集現(xiàn)象。血球凝集

沉淀反應(yīng)

（Precipitation)血清蛋白質(zhì)、細(xì)胞裂解液或組織浸液等可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后出現(xiàn)沉淀物，這一類反應(yīng)稱為沉淀反應(yīng)。沉淀反應(yīng)可在液體中進(jìn)行，如絮狀沉淀。大多沉淀反應(yīng)是用半固體瓊脂凝膠為介質(zhì)，進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散故也稱免疫擴(kuò)散。單向免疫擴(kuò)散

(SingleImmunodiffusion)是將一定量已知抗體混于瓊脂凝膠中制瓊脂板，在適當(dāng)位置打孔后將抗原加入孔中擴(kuò)散?？乖跀U(kuò)散過程中與凝膠中的抗體相遇，形成以抗原孔為中心的沉淀環(huán)，環(huán)的直徑與抗原含量成正比相關(guān)。本法常用于測(cè)定血清IgG、IgM、IgA和C3等的含量。含抗體的凝膠沉淀環(huán)雙向免疫擴(kuò)散

（DoubleImmunodiffusion)是將抗原與抗體分別加入瓊脂凝膠的小孔中，二者自由向周圍擴(kuò)散并相遇，在比例合適處形成沉淀線。如果反應(yīng)體系中含兩種以上的抗原抗體系統(tǒng)，則小孔間可出現(xiàn)兩條以上的沉淀線。本法常用于抗原或抗體的定性、組成和兩種抗原相關(guān)性分析的檢測(cè)。免疫電泳

（Immunoelectrophoresis)是先將待側(cè)血清標(biāo)本作瓊脂凝膠電泳，血清中各蛋白組分被分成不同的區(qū)帶，然后與電泳方向平行挖一小槽，加入相應(yīng)的抗血清，把分成區(qū)帶的蛋白抗原成分作雙向免疫擴(kuò)散，在各區(qū)帶相應(yīng)的位置形成沉淀弧。該法常用于血清蛋白種類分析，以觀察Ig的異常增多或缺失?；鸺娪荆≧o轉(zhuǎn)ck肥et析E蜘le配ct脈ro申ph千or污es武is誰(shuí))火箭腳電泳蓄也稱默免疫愿擴(kuò)散翅，是欣把單宣向免家疫擴(kuò)紐奉散同輝電泳蘭結(jié)合妻在一袍起的違方法牲?？咕驹诙羞叾吭贵w癢的瓊茄脂中鉆泳動(dòng)盛，兩廚者比粱例適粉宜時(shí)定，在含較短靠時(shí)間群內(nèi)生將成錐剪形的塔沉淀袖峰。壇在一冰定濃今度范減圍內(nèi)甚，沉盤淀峰鑼的高味度與背抗原富含量貝成正臥比。異此法棟的特聽點(diǎn)是胡需時(shí)島較短仁，故騎可用息于快贊速沉寺淀標(biāo)傷本中興抗原女的含譜量。火箭吳電泳垃示意且圖補(bǔ)體出結(jié)合犁反應(yīng)（Co忍mp剃le娛me溪nt小F昌ix浙at麗io信n,合C宗FT之)敏感扶性和略特異甘性均造較高葬，但作該試宅驗(yàn)影從響因飯素較示多，助現(xiàn)在低已有役被其慣它新烏方法宜取代款的趨世勢(shì)。免疫折標(biāo)記禮技術(shù)用熒型光素摔、同崖位素?；蛎竿说仁酒折櫸锖鹳|(zhì)壇標(biāo)記氣抗體窄（或向抗原壯）進(jìn)片行抗醉原-盛抗體備反應(yīng)播。標(biāo)蹦記物慮質(zhì)與才抗體瓦（或踩抗原敢）的非化學(xué)攏連接翻未改疼變抗鐮體（猛或抗不原）凈的免適疫學(xué)疲特性罪，同貨時(shí)標(biāo)故記物債的性卻質(zhì)依腸然存掀在，投因而蘋極大劉的提指高了貝反應(yīng)卻的靈厚敏度編，可刑以對(duì)纏微量員物質(zhì)扯進(jìn)行俗定量楊、定厚性或螞定位伍檢測(cè)帖。免偉疫標(biāo)怒記技農(nóng)術(shù)主何要有思三種么基本徹類型弱：免洲疫熒件光技耽術(shù)、困免疫揉酶技盤術(shù)和假同位截素標(biāo)椅記技輛術(shù)。免疫咳熒光舟顯微拿技術(shù)(Im兄mu罰no俘fl玩uo烤re拔sc范en呀ceTe淘ch加ni著qu奴e)是用塊熒光全素（濕常用斧的有私異硫炕氰酸球熒光臘素，F(xiàn)I張TC承)與抗池體連街接成請(qǐng)熒光煮抗體延，再今與待淺測(cè)標(biāo)撞本的怎抗原蛇反應(yīng)允，，沈置熒澆光顯頸微鏡堅(jiān)下觀溜察，若抗原虎抗體突復(fù)合委物散宮發(fā)出師熒光減，借寬此對(duì)主標(biāo)本需中的剪抗原睜作鑒杯定和饞定位展。包括弄直接璃熒光怪法、望間接粉熒光補(bǔ)法和節(jié)補(bǔ)體靠法。直接棄熒光米法：航將熒土光素橋直接原標(biāo)記隙抗體暫作標(biāo)盟本染解色。臨該法呢的優(yōu)謎點(diǎn)是條特異懼性強(qiáng)習(xí)，但爪其缺峽點(diǎn)是四每檢把測(cè)一愁種抗陜?cè)乩表氈苹靷湎嗄釕?yīng)的槐熒光剪抗體摔。間接頸熒光揪法：播用一嫌抗與唐標(biāo)本撿中的另抗原錯(cuò)結(jié)合前，再翻用熒獻(xiàn)光素出標(biāo)記閃的二裳抗染錦色。偉該法莫的優(yōu)琴點(diǎn)是凡敏感引性比惠直接破法高穗，制繩備一脈種熒獻(xiàn)光素絞標(biāo)記扒的二錦抗可累用于詞多種畝抗原電的檢械測(cè)，刊但非枯特異頸性熒亂光亦勉會(huì)增要加。補(bǔ)體解結(jié)合劇免疫撿熒光攜法：貓此法揮是在咽間接丘法的煮第一撇步抗慮原—笨抗體蓋反應(yīng)鳥時(shí)加惡入補(bǔ)創(chuàng)體，凳使之境與抗汗原—倚—抗消體復(fù)殺合物炎結(jié)合圓；再高用熒末光素沿標(biāo)記箱的抗C3抗體礎(chǔ)進(jìn)行娛示蹤百。間接溜免疫鐘熒光濁法示錦意圖免疫耳熒光參顯微相技術(shù)流式狼細(xì)胞恥術(shù)（Fl半owCy癢to楚me炸tr性y,若FC垃M)FC皇M是將故免疫朗熒光振技術(shù)趙應(yīng)用池于流耀式細(xì)鉗胞儀別，對(duì)仙單個(gè)胡細(xì)胞劍的表葛面標(biāo)陵志（貍抗原艱或受惑體）氏進(jìn)行逆快速珍、精甘確的更分析偉和自拉動(dòng)檢慕測(cè)，琴并將脂不同虎類型幼的細(xì)怎胞分拍選收茅集。FC耀M還可嗓對(duì)同許一細(xì)蹈胞的廣多種鐵參數(shù)搞（如DN葡A、幟RN頑A、蛋白魔質(zhì)和理細(xì)胞兼體積屋等）身進(jìn)行捏多信盛息分岡析，紙為當(dāng)擇代生今命科儲(chǔ)學(xué)研葬究領(lǐng)策域中挑廣泛刪使用乞的一南項(xiàng)新渣技術(shù)巾。流式勺細(xì)胞忽術(shù)流式滾細(xì)胞妹儀工甩作原疫理酶免機(jī)疫測(cè)壇定勢(shì)(En咸zy針me透I客mm徑un趁oa納ss籃ay傲,暗EI宏A)是用芳酶（送常用弦的有遵辣根將過氧來化物垮酶，HR斯P和堿貫性磷牽酸酶笨，AP杰)標(biāo)記秩的抗權(quán)體進(jìn)草行的奔抗原粉抗體紀(jì)反應(yīng)梯。EI樸A將抗習(xí)原抗陰體反丙應(yīng)的衫特異國(guó)性與迎酶催沾化作倆用的棒高效處性相筍結(jié)合儀，通焦過酶獄作用愧于底化物后枝顯色陷來判挺定結(jié)乓果。若常用怕的方頓法有短酶聯(lián)腰免疫挖吸附重試驗(yàn)惠和酶臣免疫畢組化金法，嚼前者載測(cè)定殃可溶江性抗儉原或盲抗體粥，取后者盞測(cè)定信組織姑中或呀細(xì)胞畜表面港的抗梨原。酶聯(lián)喝免疫吊吸附播試驗(yàn)(En振zy商me漸L挑in劍ke舟dIm塑mu妻no挨so緣瑞rb糠en被tAs艦sa未y,卷E很LI確SA鑰)是將恭已知可的抗蚊原或奸抗體消吸附迅在固擴(kuò)相載孔體（己聚苯蹤蝶乙烯鉆微量脈反應(yīng)交板）固表面降，使星抗原分抗體記反應(yīng)勤在固攪相表賠面進(jìn)帽行。絞用洗狂滌法倒將液苦相中罷游離娛成分吸洗除安。主鐵要有寬雙抗排體夾幅心法今、間警接法BA宜S-山EL泉IS擦A等。EL攏IS究A檢測(cè)趴抗體放射傷免疫蒙測(cè)定楚法(Ra冤di朽oi京mm團(tuán)un料oa冒ss唯ay謎,殿RI污A)是用自放射況性核諸素標(biāo)金記抗室原進(jìn)路行的慕免疫險(xiǎn)學(xué)檢允測(cè)技稈術(shù)。培它將剛放射禮性核尊素顯立示的毫高靈市敏性寺和抗逐原抗員體反爬應(yīng)的罵特異圣性結(jié)技合，莖使檢繞測(cè)的聽敏感免性達(dá)pg水平灑。常地用于付標(biāo)記尋的放狠射性腰核素起有I12混5和I13排1。常用珠于胰矛島素謀、生濟(jì)長(zhǎng)激犬素、挪藥物淋等微猜量物寸質(zhì)的在測(cè)定詳。

Ag*AbAg

標(biāo)記抗原特異性抗體待測(cè)抗原(Ag*-Ab)+(Ag-Ab)抗原抗體復(fù)合物分離Ag*-Ab和游離Ag*從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀知含量測(cè)定Ag*-Ab和/或游離Ag*放射性放射僵免疫菊測(cè)定虎法(RI恢A)示意嚴(yán)圖RI棟A法原控理及慨標(biāo)準(zhǔn)顯曲線75503010011010侄010詞00未標(biāo)沒記抗箱原濃落度（ng/m業(yè)l)結(jié)合字/未掙結(jié)合華的放蜂射活還性（傭%）免疫金印跡逢法(Im雷mu甩no今bl辟ot辛ti改ng)是將稅凝膠演電泳朝與固垂相免侍疫測(cè)娘定結(jié)堂合，蹄先把慶電泳吵分區(qū)價(jià)的蛋同白質(zhì)晃轉(zhuǎn)移磨到固乳相載然體，仰再用命酶免間疫、燭放射晨免疫咳等技鋼術(shù)測(cè)御定。意該法拋能分米離分些子大背小不去同的蠅蛋白稿質(zhì)并朱確定眨其分卸子量解。常雙用于真檢測(cè)尖多種戲病毒調(diào)如HI倉(cāng)V的抗唱體或攏抗原盡。免閃疫集印茫跡亂法炎示丈意歐圖第二滋節(jié)廚淋村巴細(xì)巡壽胞眠的測(cè)愁定檢測(cè)壩各群撓體淋悟巴細(xì)破胞的局?jǐn)?shù)量軟與功咸能是證觀察朵機(jī)體透免疫鴉狀態(tài)旬的重景要手混段。乎外周功血是武病人喚主要曬的檢專測(cè)標(biāo)重本，覆但僅隊(duì)代表筋再循頸環(huán)的近淋巴巾細(xì)胞坡。實(shí)著驗(yàn)動(dòng)輕物還蒸可取靜胸腺礦、脾扎、淋肺巴結(jié)擠等作卷為標(biāo)斯本進(jìn)灶行檢他查。(1伙)未抗凝靜脈伸血(2賊)墨加等霉量NS(4敵)疫密讀度梯機(jī)度離哪心血漿分離液RBCPBMCPMN(3咐)忠混煌勻后虜，緩蹄慢加勸于分之離液材上一、含淋巴奏細(xì)胞折類型櫻和數(shù)亂目的椒測(cè)定1、寧花結(jié)銜試驗(yàn)麻：E花結(jié)冷試驗(yàn)響可用導(dǎo)于檢烏測(cè)T細(xì)胞自數(shù)目嶄。EA花結(jié)政試驗(yàn)展可用愈于檢鳳測(cè)B細(xì)胞笑數(shù)目目。2、級(jí)免疫歌熒光候法：抽常采始用間具接免帳疫熒閃光法屆。3、捏流式墓細(xì)胞率術(shù)：主借助龜流式扛細(xì)胞分儀（FC座M)委?；ńY(jié)厲試驗(yàn)回示意堵圖T細(xì)胞效功能償測(cè)定體外外法記：T細(xì)胞葬增殖塵試驗(yàn)形態(tài)回學(xué)檢攀查3H-Td歉R摻入蛙法MT拜T法體內(nèi)準(zhǔn)法談：位用生弄物抗瀉原或棵化學(xué)鳳抗原菜作皮峽內(nèi)試竹驗(yàn)。OT傭-P芬PD皮試SD勉-S扣K皮試培養(yǎng)液3H-TdRPHA淋巴細(xì)胞全血分層液離心過濾測(cè)量放射性淋巴悼細(xì)胞濁增殖哨試驗(yàn)隸（3H-Td服R摻入泡法）義示意暈圖靶細(xì)胞51Cr洗滌去除游離的51Cr效應(yīng)細(xì)胞測(cè)量上清液中釋放的51Cr混合培養(yǎng)4-6小時(shí)細(xì)胞葉毒試墾驗(yàn)（51Cr釋放作法）縣示意穿圖酶聯(lián)管免疫免斑點(diǎn)念法在（En嶼zy牧me舒-L底in例ke丟dIm盟mu跟no罵sp冬ot,辨EL判IS基A)是在EL怨IS悅A的基拍礎(chǔ)上吵建立授的檢碗測(cè)抗撓體生憶成細(xì)鐘胞及態(tài)細(xì)胞摔因子瘡產(chǎn)生云細(xì)胞聚的方記法。CK抗體包被的反應(yīng)板

CK抗原包被的反應(yīng)板加入淋巴細(xì)胞加入酶標(biāo)記二抗加入底物檢測(cè)慰抗原啄特異搶性B細(xì)胞加入底物T細(xì)胞罰產(chǎn)生CK的檢娛測(cè)加入淋巴細(xì)胞加入酶標(biāo)的CK抗體淋巴塔細(xì)胞悄轉(zhuǎn)化宿試驗(yàn)初（形態(tài)杯學(xué)示憤意