組培基本操作技術(shù)-培養(yǎng)基制備（園藝植物組織培養(yǎng)）

項(xiàng)目一培養(yǎng)基制備模塊三

組培基本操作技術(shù)12CONTENTS母液配制培養(yǎng)基種類、成分項(xiàng)目一培養(yǎng)基制備3培養(yǎng)基配制及滅菌

母液一般分為五種：大量元素母液、微量元素母液、鐵鹽母液、有機(jī)物質(zhì)母液、激素母液。一、母液配制一、母液配制園藝植物組織培養(yǎng)

1.保證培養(yǎng)基成分的稱量準(zhǔn)確性及配制時(shí)的快速移??；2.便于培養(yǎng)基低溫保藏；3.提高工作效率。一、母液配制（一）培養(yǎng)基母液配制的目的園藝植物組織培養(yǎng)一、母液配制（二）母液配制流程圖園藝植物組織培養(yǎng)

稱量確定培養(yǎng)基

溶解

定容貼標(biāo)簽保存于冰箱一、母液配制稱量藥品園藝植物組織培養(yǎng)天平預(yù)置全顯示清零稱藥一、母液配制園藝植物組織培養(yǎng)在冰箱內(nèi)

低溫保存

1.母液濃縮倍數(shù)：10-100；2.選用蒸餾水、重蒸餾水、分析純或化學(xué)純?cè)噭?.選用化學(xué)純或分析純?cè)噭?.稱量、定容要準(zhǔn)確，標(biāo)識(shí)清晰，記錄填寫(xiě)規(guī)范、全面；5.注意混合順序，防止產(chǎn)生沉淀；

6.激素母液濃度不可過(guò)高：1mg/ml,1次配成50或100ml。一、母液配制（三）母液配制要求園藝植物組織培養(yǎng)7.激素溶解：IAA、IBA、GA、先溶95%酒精再定容；NAA先溶于熱水或95%酒精再加水；2，4-D先溶于1mol/LNaOH再加水；

KT、ZT、BA先溶于1mol/LHCl再加水。一、母液配制（三）母液配制要求園藝植物組織培養(yǎng)一、母液配制MS培養(yǎng)基母液的配制園藝植物組織培養(yǎng)一、母液配制任務(wù)1：母液配制園藝植物組織培養(yǎng)1.學(xué)生分組提交母液配制方案，并準(zhǔn)備所需設(shè)備和物品；2.各小組分別配制MS培養(yǎng)基大量元素母液；3.母液標(biāo)識(shí)與保存：將配制好的母液分別倒入棕色瓶中，貼上標(biāo)簽，注明1.MS培養(yǎng)基母液名稱、濃縮倍數(shù)、配制日期等。放入冰箱中保存。4.填記錄：配制完后，填寫(xiě)母液配制登記表。項(xiàng)目一培養(yǎng)基制備模塊三組培基本操作技術(shù)123CONTENTS母液配制培養(yǎng)基種類、成分培養(yǎng)基配制及滅菌項(xiàng)目一培養(yǎng)基制備

人為提供離體培養(yǎng)材料的營(yíng)養(yǎng)源。配制的不同培養(yǎng)基，是為滿足不同類型離體材料的營(yíng)養(yǎng)需要。（一）配制培養(yǎng)基的目的二、培養(yǎng)基種類、成分園藝植物組織培養(yǎng)

完全培養(yǎng)基

固體培養(yǎng)基

液體培養(yǎng)基

基本培養(yǎng)基（二）培養(yǎng)基種類二、培養(yǎng)基種類、成分園藝植物組織培養(yǎng)◆無(wú)機(jī)鹽、離子濃度高，含高K、N，硝酸鹽含量較高，含銨鹽?！魻I(yíng)養(yǎng)豐富?！艏铀傩纬捎鷤M織，促進(jìn)培養(yǎng)物生長(zhǎng)。MS培養(yǎng)基B5培養(yǎng)基SH培養(yǎng)基N6培養(yǎng)基KM-8P培養(yǎng)基White培養(yǎng)基（二）培養(yǎng)基種類二、培養(yǎng)基種類、成分園藝植物組織培養(yǎng)◆無(wú)機(jī)鹽量較低?！羰褂脧V泛?！暨m合生根培養(yǎng)、胚培養(yǎng)◆胎培養(yǎng)等。MS培養(yǎng)基White培養(yǎng)基SH培養(yǎng)基B5培養(yǎng)基N6培養(yǎng)基KM-8P培養(yǎng)基二、培養(yǎng)基種類、成分園藝植物組織培養(yǎng)（二）培養(yǎng)基種類◆含較低的銨，硝酸鹽和鹽酸硫胺素用量較高。◆適合雙子葉植物，尤其木本植物組培。MS培養(yǎng)基SH培養(yǎng)基B5培養(yǎng)基N6培養(yǎng)基KM-8P培養(yǎng)基White培養(yǎng)基二、培養(yǎng)基種類、成分園藝植物組織培養(yǎng)（二）培養(yǎng)基種類◆特點(diǎn)與B5相似，硫酸銨改用磷酸二氫銨?！魺o(wú)機(jī)鹽濃度較高。MS培養(yǎng)基SH培養(yǎng)基B5培養(yǎng)基N6培養(yǎng)基KM-8P培養(yǎng)基White培養(yǎng)基二、培養(yǎng)基種類、成分園藝植物組織培養(yǎng)（二）培養(yǎng)基種類◆成分簡(jiǎn)單?！粝跛徕浐土蛩徜@含量高?！暨m合花粉、花藥培養(yǎng)。MS培養(yǎng)基SH培養(yǎng)基B5培養(yǎng)基N6培養(yǎng)基KM-8P培養(yǎng)基White培養(yǎng)基二、培養(yǎng)基種類、成分園藝植物組織培養(yǎng)（二）培養(yǎng)基種類◆有機(jī)成分復(fù)雜?！粲糜谠|(zhì)體培養(yǎng)(包括原生質(zhì)融合的培養(yǎng))。MS培養(yǎng)基SH培養(yǎng)基B5培養(yǎng)基N6培養(yǎng)基KM-8P培養(yǎng)基White培養(yǎng)基二、培養(yǎng)基種類、成分園藝植物組織培養(yǎng)（二）培養(yǎng)基種類營(yíng)養(yǎng)分布均勻，生長(zhǎng)發(fā)育整齊一致，但通氣性差。通氣性較好，便于操作，但營(yíng)養(yǎng)分布不均，生長(zhǎng)發(fā)育不一致。固體培養(yǎng)液體培養(yǎng)固液培養(yǎng)基二、培養(yǎng)基種類、成分園藝植物組織培養(yǎng)1.比較固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基的優(yōu)缺點(diǎn)。2.配制MS培養(yǎng)基時(shí)，瓊脂和蔗糖的加入量一般為多少？3.培養(yǎng)基的成分包括哪幾類？各有何作用？4.在培養(yǎng)基成分中什么決定著外植體發(fā)育方向？5.抗生素的作用是什么？復(fù)習(xí)思考題二、培養(yǎng)基種類、成分園藝植物組織培養(yǎng)項(xiàng)目一培養(yǎng)基制備模塊三組培基本操作技術(shù)123CONTENTS母液配制培養(yǎng)基種類、成分培養(yǎng)基配制及滅菌項(xiàng)目一培養(yǎng)基制備二、培養(yǎng)基種類、成分（三）培養(yǎng)基成分水分有機(jī)物天然物質(zhì)

培養(yǎng)基支持物質(zhì)輔助物質(zhì)無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基成分園藝植物組織培養(yǎng)要求：蒸餾水或重蒸餾水（即蒸餾水再蒸餾一次）

配制母液和研究時(shí)以保證各種成分的精確性和完全人為控制；大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)可用自來(lái)水。二、培養(yǎng)基種類、成分培養(yǎng)基成分--水分園藝植物組織培養(yǎng)二、培養(yǎng)基種類、成分培養(yǎng)基成分--無(wú)機(jī)鹽

元素名稱添加形式大量

元素

(≥0.5mmol/L)微量元素(≤0.5mmol/L)NPKCaMgSFeBMnCuMoClKNO3,NH4NO3KH2PO4NaH2PO4KClKNO3CaCl2·2H2OMg2SO4·7H2OMg2SO4·

7H2OFeNa2-EDTAH3BO3MnSO4CuSO4Na2MoO4·2H2OCaCl2·2H2O園藝植物組織培養(yǎng)二、培養(yǎng)基種類、成分有機(jī)物維生素氨基酸植物激素碳水化合物培養(yǎng)基成分--有機(jī)物園藝植物組織培養(yǎng)二、培養(yǎng)基種類、成分培養(yǎng)基中有機(jī)物--碳水化合物種類：蔗糖或葡萄糖、果糖等。蔗糖濃度：2-3%，胚培養(yǎng)為4-15%注意：高壓滅菌部分糖會(huì)分解。大生產(chǎn)時(shí)可用白砂糖。園藝植物組織培養(yǎng)二、培養(yǎng)基種類、成分培養(yǎng)基中有機(jī)物--維生素種類：VB1、VB6、Vpp、Vc及生物素、葉酸。濃度：0.1－1.0mg/L

VB1

促愈傷組織產(chǎn)生，提高活力

VB6

促根生長(zhǎng)

Vpp

與代謝和胚發(fā)育有關(guān)

Vc

防組織褐變作用園藝植物組織培養(yǎng)二、培養(yǎng)基種類、成分培養(yǎng)基中有機(jī)物--植物激素1.生長(zhǎng)素類（1）種類：IAANAAIBA2,4－D（2）作用：誘導(dǎo)愈傷組織和根分化，促進(jìn)細(xì)胞分裂和伸長(zhǎng)。（3）穩(wěn)定性與溶解性：除IAA外，對(duì)熱和光均穩(wěn)定。多用95%酒精或稀NaOH溶液助溶。一般配成0.1-0.5mg/ml的母液。（4）濃度：0.05－5mg/L園藝植物組織培養(yǎng)二、培養(yǎng)基種類、成分培養(yǎng)基中有機(jī)物--植物激素

2.赤霉素（GAs）（1）種類：GA3（2）作用：促莖伸長(zhǎng)，促胚發(fā)育成植株；打破休眠；一般在器官形成后加入。（3）穩(wěn)定性和溶解性：不耐熱，在低溫條件下保存；溶于酒精，配制時(shí)可用少量95%酒精助溶。園藝植物組織培養(yǎng)二、培養(yǎng)基種類、成分培養(yǎng)基中有機(jī)物--植物激素

3.細(xì)胞分裂素（CTK）（1）種類：6－BAKTZT（2）作用：誘導(dǎo)不定芽分化和莖、苗增殖。（3）穩(wěn)定性與溶解性：CTK對(duì)光、稀酸和熱均穩(wěn)定；溶解于稀酸和稀堿中，配制時(shí)常用稀HCl助溶。通常配制成1mg/ml的母液。（4）濃度：0.05－10.0mg/L園藝植物組織培養(yǎng)二、培養(yǎng)基種類、成分培養(yǎng)基中有機(jī)物--氨基酸培養(yǎng)基中最常用的氨基酸是甘氨酸，丙氨酸等。有時(shí)采用水解乳蛋白或水解酪蛋白，用量在10-1000mg/L之間。缺點(diǎn)：營(yíng)養(yǎng)豐富，極易引起污染。如無(wú)特別需要，以不用為宜。園藝植物組織培養(yǎng)二、培養(yǎng)基種類、成分天然復(fù)合物香蕉泥馬鈴薯椰乳培養(yǎng)基成分--天然復(fù)合物園藝植物組織培養(yǎng)椰乳促愈傷組織和細(xì)胞培養(yǎng)，用量10～20%，使用注意莖尖大小。

香蕉泥對(duì)PH值緩沖大，用量150～200ml/L，應(yīng)用在蘭花組培。培養(yǎng)基成分--天然復(fù)合物園藝植物組織培養(yǎng)二、培養(yǎng)基種類、成分二、培養(yǎng)基種類、成分培養(yǎng)基成分--支持物質(zhì)1.瓊脂(1)用量：6－10g/L(2)種類：瓊脂粉瓊脂條(3)作用：固化作用注意：新買(mǎi)應(yīng)試凝固力。2.其它

玻璃纖維、濾紙橋、海綿等園藝植物組織培養(yǎng)二、培養(yǎng)基種類、成分輔助性物質(zhì)抗氧化物活性炭抗生素培養(yǎng)基成分--輔助性物質(zhì)園藝植物組織培養(yǎng)種類

抗生素作用：防污染，減少材料損失。注意：抗生素對(duì)組織生長(zhǎng)有抑制作用，使用要慎重用量：5－20%二、培養(yǎng)基種類、成分園藝植物組織培養(yǎng)二、培養(yǎng)基種類、成分抗氧化物1.常用抗氧化劑：半胱氨酸、VC、PVP2.用量：50－200mg/L，3.作用：防止氧化注意：可用抗氧化劑洗滌外植體傷口表面。園藝植物組織培養(yǎng)二、培養(yǎng)基種類、成分活性炭1.作用：具吸附作用；莖尖初代培養(yǎng)可防褐化；促進(jìn)新梢增殖（濃度0.1—0.2%）；促進(jìn)生根；防止組培苗玻璃化（濃度0.3%）；有利于胚胎培養(yǎng)。2.常用濃度：0.5－10g/L園藝植物組織培養(yǎng)二、培養(yǎng)基種類、成分組培所需藥品價(jià)錢(qián)一覽表藥品名稱規(guī)格包裝價(jià)格（元）瓊脂粉強(qiáng)度900g/cm2

1kg180瓊脂條強(qiáng)度500g/cm21kg140MS干粉培養(yǎng)基（41.5克配成一升培養(yǎng)基）含蔗糖和瓊脂粉500g90園藝植物組織培養(yǎng)二、培養(yǎng)基種類、成分組培所需藥品價(jià)錢(qián)一覽表藥品名稱包裝價(jià)格（元）IBA10g100NAA50g30KT10g2502,4-D100g50TDZ塞苯隆100mg350反玉米素50mg2806-BA10g150園藝植物組織培養(yǎng)二、培養(yǎng)基種類、成分組培所需藥品價(jià)錢(qián)一覽表藥品名稱包裝價(jià)格（元）煙酸100g60肌醇100g35VB1100g55甘氨酸100g10VB650g50園藝植物組織培養(yǎng)二、培養(yǎng)基種類、成分組培所需藥品價(jià)錢(qián)一覽表藥品名稱包裝價(jià)格（元）硫酸亞鐵500g30乙二胺四乙酸二鈉鹽500g50KI500g174鉬酸鈉500g340吐溫-80500ml23