紅外分光光度法鑒別維生素C片

近紅外分光光度法測定果蔬中維生素C的含量摘要目的要建立維生素c片快速、專屬的鑒別方法。方法以無水乙醇為溶劑進行提取,采用紅外分光光度法(漠化鉀壓片)進行定性鑒別。結(jié)果維生素c片與維生素C對照品的紅外吸收光譜完全一致,并與國家藥典委員會頒布的《藥品紅外光譜集》中的維生素c光譜一致。該方法專屬性強、快速、簡便，測定條件允許范圍較寬，抗干擾能力強，無需對樣品進行特別處理，可用于測定微量維生素C。AbstractThepurposeofthearticleistoestablisharapidandspecificmethodofidentifyingVitaminCtablet.Themethodusesethanolassolventextraction,andinfraredspectrophotometry(KBrtablet)forqualitativeidentification.TheresultsisthattheinfraredabsorptionspectrumofvitaminCtabletsisinaccordancewithvitaminCreferencesubstanceand"Druginfraredspectracollection"ofvitaminCpromulgatedbytheNationalPharmacopoeiaCommission.Themethodisspecific,rapid,simpleandallowsawiderangeofanti-interferenceability,doingwithoutspecialhandlingofsamples,whichcanbeusedfordeterminingtheminimamoutofvitaminC.關(guān)鍵詞水果維生素C紅外分光光度法KeywordsfruitVitaminCNearinfraredspectrophotometry前曰VC具有抗壞血病的效應，所以又稱抗壞血酸(Ascorbieaeid).它是人體不可缺少的一種重要營養(yǎng)物常存在于新鮮的蔬菜和水果中.由于抗壞血酸參與體內(nèi)一系列代謝和反應，能促進膠原蛋白和粘多糖成，增加微血管的致密性，降低其通透性及脆性，增加機體抵抗力.缺乏時，引起造血機能障礙、貧血、管壁通透性增加，脆性增強和血管容易破裂出血，嚴重時肌肉、內(nèi)臟出血死亡，這些癥狀在I臨床上通常壞血病.因此抗壞血酸不僅是人體所必須的由外界提供的營養(yǎng)物質(zhì)，同時也是維持正常生命過程所必的一類有機物.人正常每天最低需要量為75mg，長期缺乏抗壞血酸會導致某種營養(yǎng)不良癥狀及相應的疾病，所以，VC對維持人體健康十分重要.對部分食人們合理膳食，正確補充營養(yǎng)素有一定意義。一材料與方法1實驗原理FolinB試劑有很強的氧化活性，能將還原型L一抗壞血酸氧化成L一脫氫抗壞血酸，L一脫氫抗壞血酸的最大吸收波長位于920nm，在較大的濃度范圍內(nèi)，遵循朗伯一比耳定律?？梢詼y定水果中還原型抗壞血酸的含量。2儀器與試劑UV一3150型紫外可見近紅外分光光度計：日本島津公司：Plus420A型酸度計：美國ORION公司；FSH—II型高速勻漿機：江蘇金壇；恒溫培養(yǎng)箱：上海躍進：pH3的三氯乙酸溶液：準確稱取5mg三氯乙酸（分析純），加入適量蒸餾水溶解，定量轉(zhuǎn)移到100mL的容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度；Vc標準溶液（100tzg/mL）：準確稱取60oC真空干燥2h的10mgVc（:［北京鼎國，Sigma分裝），加入適量pH3.三氯乙酸溶液溶解，定量轉(zhuǎn)移到lOOmL的棕色容量瓶中，用pH3三氯乙酸溶液稀釋全刻度，暗處保存；FolinB試劑：以上試劑均為分析純：水為二次離子交換水。3實驗方法取兩支10mL具塞比色管，其中一支加入適量的Vc，另一支不加；然后分別依次jJHJk2mL的FolinB試劑，用pH3三氯乙酸溶液稀釋至刻度，搖勻，反應5min后，以試劑空白為參比，使用lcm玻璃吸收池在920nm波長處測定吸光度A值。平行3次，取平均值。二結(jié)果與討論1測量波長的選擇0.5按試驗方法以試劑為空白，將顯色后的溶液在400—600nm區(qū)0.間內(nèi)繪制吸收曲線，如圖I所示.結(jié)果表明最大吸收波長為「52.0■■nin，實驗選用520nin為測定波長.圖1吸收曲線

FlgJAbsorptionspectra2顯色劑加入量試驗結(jié)果表明，0.004mol/L2,2’一聯(lián)毗啶用量在8.0—10.0mL范圍內(nèi)。吸光度達到最大且穩(wěn)定.本法用量為9mL.3反應時間與溫度的影響分別考察了反應時間與反應溫度對體系吸光度的影響，結(jié)果表明，室溫度時定容5一10rain之內(nèi)即可顯色完全，且顯色在100rain內(nèi)相當穩(wěn)定.本文選擇在室溫下反應10min.4離于對試劑的選擇當CTMAB加入5mL時對2，2’一bipy—Fe2+—VC形成絡合物的吸光度和吸收波長無顯著影響，而加入三乙醇胺則可使顯色體系的吸光度增大.5掩蔽劑及用量選擇在試驗中發(fā)現(xiàn)，被抗壞血酸還原后剩余的Fe3+也可以與2,2’一聯(lián)毗啶生成有色配合物，并在光還原作用下還原為Fe2+與2,2’一聯(lián)毗啶的配合物，因此需要用掩蔽劑來掩蔽剩余的Fe3+，本實驗選用1mol/LNaF溶液作為掩蔽劑，進一步研究表明，0.25mL以上的lmol/LNaF溶液即能達到掩蔽作用.故本文選用lmL的lmol/LNaF溶液作為掩蔽劑.6標準曲線制備按試驗方法對標準系列進行顯色測定，結(jié)果表明：VC質(zhì)量濃度在0.088—7.0mr,/L范圍內(nèi)符合比爾定律；回歸方程為：A=0.00325+23149.45503c（mol/L），相關(guān)系數(shù)為0.99991；表觀摩爾吸光系數(shù)占=2.40X104L.mol?.cm?.7干擾離子的影響當相對誤差控制在±5%以內(nèi)，對1.0mg/L的抗壞血酸進行測定時，下列倍數(shù)的物質(zhì)不干擾：Na+，Cl一，K+，N03一，Zn2+（1000倍），M92。，S04“，A13+（500倍），I’（100倍），VitaminBI，VitaminE（100倍），常見離子中Ca2+（1000倍），Ba2+對抗壞血酸的測定產(chǎn)生干擾，但在樣品中Ba2+與Ca2+的含量一般比較低.通常不需要分離處理，可以直接測定.1mL的lmol/LNaF可掩蔽Fe“，體系選擇性較好.8樣品分析樣品制備和測定分析（1） VC藥片.分別將市售VC白片和VC黃片各一瓶倒人玻璃研缽中研細，充分混勻后，準確稱取VC白片0.019841g和黃片0.01386g置于2個100mL的容量瓶中，用pH3三氯乙酸溶液浸取并定容.充分搖動使其粉末分散約l-2min后，立即用干燥濾紙過濾，棄去初濾液，精密移取過濾液1.50mL于50mL比色管中定容，按試驗方法進行測定。結(jié)果如表1.表1藥片中維生素C含量測定結(jié)果Tab.1ThedeterminationresultsofcontentofvitaminCinmedicaltablet（n=6）樣品本法測定值g/100g加入量/ug回收率/%RSD/%VC白片68.0290102.80.701VC黃片57.8989103.70.325食物樣品.稱取去皮獼猴桃30.8539g和黃瓜25.4258g浸在一定量的pH3三氯乙酸溶液中，用搗碎機搗碎混勻并過濾.取過濾后的獼猴桃果汁置于500mL的容量瓶中、黃瓜過濾液置于100mL的容量瓶中，并用pH3三氯乙酸溶液稀釋至刻度.充分搖動1—2min,立即用干燥濾紙濾去初濾液，精密分別移取獼猴桃過濾液1.00mL和黃瓜過濾液5.00mL于50mL比色管中定容，按試驗方法進行測定，結(jié)果如表2.表2食物中維生素C含量測定結(jié)果Tab.2ThedeterminationresultsofcontentofvitaminCinfoods(n--6)樣品本法測定值加入量/ug回收率/%RSD/%獼猴桃0.238g/100g0.20098.20.541黃瓜10.03mg/100g0.200104.91.41鮮橙多58.50mg/100ml0.20096.31.08(3)飲料.移取鮮橙多10.00mL在一定量的pH3三氯乙酸溶液中，置于100mL的容量瓶中，并用pH3三氯乙酸溶液稀釋至刻度.充分搖動1—2min，精密移取過濾液2.50mL于50mL比色管中定容，按試驗方法進行測定，結(jié)果如表2.三結(jié)語從表2中看出，水果中獼猴桃的維生素C含量較為豐富，在日常生活中應多食用這類水果，補充身體所需營養(yǎng)素.從表l和表2中方法的精密度、回收率以及標準曲線的線性關(guān)系來看，用分光光度法測定抗壞血酸是可行的.但是由于抗壞血酸本身性質(zhì)不穩(wěn)定，容易降解，因此在進行樣品處理時應注意盡快將樣品搗碎浸取在緩沖溶液中.水果中含有的鐵都是以有機物形式存在的，不與2,2’一聯(lián)毗啶直接絡合，則不影響測定結(jié)果.水果中的VC在空氣中極易被氧化，樣品處理時必須用保護劑防止VC被氧化.保護劑不能用草酸，因草酸具有還原性，本法用三氯乙酸緩沖溶液作保護劑.參考文獻：ManishH.RantachandranKN&GuptaVK.Talunta.1994.(41):1623TunmalapalliC虬WilliemsJC&StemTN[J],anallem,1994.(27):209L許卉，賀萍.催化褐色光度法測定海洋生物中痕量硒[J].分分析化學，2003,331(10)；1244趙麗杰，趙麗萍.催化動力學光度法測定痕量釩(V)[J],沈陽工業(yè)大學學報，2006,28(14);478［5］ 劉長增，高靈敏.催化光度法測定痕量錳［J］.進化檢驗，化學分冊.2001,37(8);3691［6］ 丁良，單金緩，王秀梅，催化動力學光度法測定抗癌中草藥仲痕量硒，漠酸鉀、羅丹名，B體系［J］.光譜學與光譜分析.2004(24);1419［7］