第十四章維生素類藥物的分析

維生素：是維持人體正常代謝機(jī)能所必需的微量營養(yǎng)物質(zhì)。人體不能合成維生素。如果人體缺少某種維生素，就會(huì)引起維生素缺乏癥，而影響人體的正常生理機(jī)能。例如:VA缺乏—夜盲癥VB1缺乏—腳氣病當(dāng)前第1頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)VitA、D2、D3、E、K1等脂溶性水溶性VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、葉酸、煙酸、泛酸VitM分類：當(dāng)前第2頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)第一節(jié)維生素A的分析-H維生素A醇-COCH3

維生素A醋酸酯-COC15H31

維生素A棕櫚酸酯R:當(dāng)前第3頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)（1）環(huán)己烯+共軛多烯側(cè)鏈；（2）天然VA側(cè)鏈為全反式；（3）天然來源主要是魚肝油，含量高者可達(dá)600000國際單位/克，為醋酸酯，棕櫚酸酯等,目前多由人工合成。當(dāng)前第4頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)（一）為一個(gè)具有共軛多烯側(cè)鏈的環(huán)己烯1.具有UV吸收具有共軛多烯側(cè)鏈—紫外吸收。最大吸收波長在325~328nm，隨VA存在狀態(tài)以及所用的溶劑，最大吸收波長的位置有所不同。一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)當(dāng)前第5頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)維生素A325.5100%全反式新維生素Aa32875%2－順新維生素Ab320.524%4－順新維生素Ac310.515%2，4－順異維生素Aa32321%6－順異維生素Ab32424%2，6－順相對生物效價(jià)順反異構(gòu)2.存在多種立體異構(gòu)化合物當(dāng)前第6頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)VitA2VitA33.易發(fā)生脫氫、脫水、聚合反應(yīng)鯨醇當(dāng)前第7頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)△或有金屬離子存在時(shí)氧化↑（二）共軛多烯側(cè)鏈易被氧化當(dāng)前第8頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)環(huán)氧化物VitA醛VitA酸當(dāng)前第9頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)（三）與三氯化銻發(fā)生呈色反應(yīng)CHCl3（四）溶解性不溶于水易溶于乙醚，氯仿，異丙醇，環(huán)己烷等有機(jī)溶劑以及脂肪和植物油等。用于鑒別和含量測定！當(dāng)前第10頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)（一）三氯化銻反應(yīng)條件：無水無醇CHCl3二、鑒別試驗(yàn)SbCl3水SbOCl乙醇可使碳正離子的正電荷消失當(dāng)前第11頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)藍(lán)色紫紅當(dāng)前第12頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)BP（2000）λmax為326nm一個(gè)吸收峰（二）UV法λmax為350～390nm三個(gè)吸收峰當(dāng)前第13頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)去水VitA（VitA3）↓VitA維生素A有五個(gè)共扼雙鍵，無水乙醇溶液在326nm處有最大吸收，鹽酸催化加熱脫水成6個(gè)雙鍵，故波長紅移，同時(shí)在350-390nm出現(xiàn)3個(gè)吸收峰。討論當(dāng)前第14頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)300400nmA(1%,1cm)10002000400080000維生素A去水維生素A當(dāng)前第15頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)USP顯色劑磷鉬酸規(guī)定斑點(diǎn)顏色和Rf值BP對照品法（三）TLC法確認(rèn)醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯?！篤A和其標(biāo)準(zhǔn)品用環(huán)己烷溶解展開劑：環(huán)己烷-乙醚（80：20）薄層板：硅膠G

顯色劑：SbCl3T.S.Rf值：VA醇0.08；VA醋酸酯0.41；VA棕櫚酸酯0.75當(dāng)前第16頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)（一）UV法（三點(diǎn)校正法）三、含量測定1.概述共軛多烯的結(jié)構(gòu)—具有特征的紫外吸收。相關(guān)物質(zhì)—結(jié)構(gòu)相似,維生素A最大吸收波長附近也有吸收，對測定有影響。Morton和Stubbs等人提出了三點(diǎn)校正法。當(dāng)前第17頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)2.

原理（根據(jù)、假定）?。镔|(zhì)對光的吸收具有加和性，即：ⅱ．維生素A中的不相關(guān)吸收在310~340nm范圍內(nèi)近似一條直線。當(dāng)前第18頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)效價(jià)為維生素A1的40%，max345~350nm3.

相關(guān)物質(zhì)的吸收a.

維生素A的衍生物?。S生素A2去氫維生素A當(dāng)前第19頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)效價(jià)低于維生素A1，max385~390nmb.

維生素A的氧化產(chǎn)物已介紹ⅱ．維生素A3去水維生素A當(dāng)前第20頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)c.

合成時(shí)的中間體側(cè)連有4個(gè)雙鍵—應(yīng)有種異構(gòu)體。目前包括維生素A在內(nèi)，共發(fā)現(xiàn)有6種異構(gòu)體。它們是：e.

維生素A異構(gòu)體d.

鯨醇維生素A醇的二聚體，沒有生物活性當(dāng)前第21頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)名稱順反異構(gòu)max(nm)相對效價(jià)?。戮S生素Aa2-順式32875%ⅱ．新維生素Ab4-順31924%ⅲ．新維生素Ac2,4-二順31115%ⅳ．異維生素Aa6-順32321%ⅴ．異維生素Ab2,6-二順32424%ⅵ．維生素A全反式325~328100%當(dāng)前第22頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)新維生素Aa新維生素Ab當(dāng)前第23頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)新維生素Ac異維生素Aa當(dāng)前第24頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)異維生素Ab維生素A當(dāng)前第25頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)4.波長選擇：（1）1：VitA的max（如VitA酯328nm）（2）2、3：分別在1的兩側(cè)各選一點(diǎn)測定對象VitA醋酸酯第一法等波長差法第二法等吸收比法(皂化法)測定對象:VitA醇當(dāng)前第26頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)5.測定方法（1）基本步驟:第一步A選擇A328測定或A328校正第二步：求標(biāo)示量％當(dāng)前第27頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)當(dāng)前第28頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)當(dāng)前第29頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)換算因子當(dāng)前第30頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)方法：（2）第一法維生素A醋酸酯S環(huán)己烷9～15IU/ml溶液分別于300、316、328、340、360nm處測Ai判斷是否在326～329nm之間改用第二法是否求算并與規(guī)定值比較當(dāng)前第31頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)規(guī)定值差值當(dāng)前第32頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)判斷差值是否超過有超過無超過計(jì)算A328（校正）用A328計(jì)算當(dāng)前第33頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)03%－15%－3%第二法第二法當(dāng)前第34頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)VitAD膠丸中VitA的含量測定精密稱取本品(規(guī)格10000VitAIU/丸)裝量差異項(xiàng)下（平均裝量0.08262g/丸）的內(nèi)容物0.2399g至250ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻；精密量取2.0ml，置另一20ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻。以環(huán)己烷為空白，測定最大吸收波長為328nm，并在下列波長處測得吸收度為:當(dāng)前第35頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)A300：0.354A316：0.561A328：0.628A340：0.523A360：0.216A300/A328：0.555A316/A328：0.907A328/A328：1.000A340/A328：0.811A360/A328：0.299求本品中維生素A的含量？當(dāng)前第36頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.833A360/A328：0.3440.5550.9071.0000.8110.299+0.01－0.010+0.02+0.04－－－－－=====當(dāng)前第37頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)當(dāng)前第38頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)適用于維生素A醇（等吸收比法）第一法無法消除雜質(zhì)干擾時(shí)用此法[皂化法、6/7A法]（3）第二法SKOH/乙醇皂化液VitA醋酸酯→VitA醇脂溶性植物油→甘油和脂肪酸鹽水溶性乙醚提取除去植物油干擾揮干乙醚異丙醇溶解→稀釋至9～15IU/ml→于300、310、325、334nm處測Ai當(dāng)前第39頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)判斷max是否在323～327nm之間取未皂化樣品采用色譜法純化后再測定計(jì)算是否當(dāng)前第40頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)判斷A300/A325是否大于0.73A300/A325小于0.73，取未皂化樣品采用色譜法純化后再測定。A300/A325大于0.73,計(jì)算A325(校正)03%－3%當(dāng)前第41頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)（二）三氯化銻比色法優(yōu)點(diǎn)：簡便快速λmax618nm～620nm標(biāo)準(zhǔn)曲線法缺點(diǎn)呈色不穩(wěn)定（5~10s內(nèi)）水分干擾與標(biāo)準(zhǔn)曲線溫差≤1℃專屬性差三氯化銻有腐蝕性當(dāng)前第42頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)（三）高效液相色譜法色譜柱：C18柱流動(dòng)相：甲醇－水（96：4）流速:1.2ml/min檢測波長與AUFS:0min-8min(330nm,0.25AUFS)用于測定VA;8min后（292nm,0.05AUFS）用于測定VE內(nèi)標(biāo)：VA醋酸酯當(dāng)前第43頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)掌握：維生素B1的結(jié)構(gòu)特征硫色素反應(yīng)含量測定方法第二節(jié)維生素B1的分析當(dāng)前第44頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)維生素B1是維生素B群中首先被發(fā)現(xiàn)的維生素，其最著名的缺乏癥狀即是腳氣病。1880年日本人Takaki最早發(fā)現(xiàn)腳氣病與食物有關(guān)，當(dāng)時(shí)的日本海軍以吃精制的白米為主，罹患腳氣病的比例很高，當(dāng)他在菜單中多增加魚、肉、大麥、蔬菜的量時(shí)，日本海軍罹患腳氣病的比例便顯著下降。19世紀(jì)末亞洲由於引進(jìn)蒸氣碾谷機(jī)，制造去外殼的白米，使得腳氣病的罹患率大為增加。1911年Funk自谷殼中分離出高濃度的活性物質(zhì)，并把它命名為Vitamins，以後又命名VitaminB1。1926年由Jansen及Donath分離出B1的結(jié)晶體，1936年Donath提出B1的結(jié)構(gòu)式。當(dāng)前第45頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)維生素B1的分布很廣泛，一般動(dòng)植物及菌類皆含有維生素B1，植物中以綠色葉子、種子、全谷類、玉米等含量較豐富。白米及白面包都是經(jīng)加工過程將谷類外殼去除，以增加產(chǎn)品外觀及食品的嗜口性，但谷類之外表殼是貯存維生素B1的主要地方，以去殼之白米或白面包為主食即容易引發(fā)B1缺乏癥。目前提倡的自然健康食品，風(fēng)行食用不去皮的糙米及全麥面包，道理即在此。本藥物主要治療腳氣病、多發(fā)性神經(jīng)炎等。中國藥典收載原料及其片劑和注射液。當(dāng)前第46頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)氨基嘧啶環(huán)－CH2－噻唑環(huán)(季銨鹽)HClCl-一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)當(dāng)前第47頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)1.溶解性(1)易溶于水(2)水溶液呈酸性3.UV共軛雙鍵λmax=246nm二、性質(zhì)2.硫色素反應(yīng)OH-[O]硫色素正丁醇藍(lán)色熒光4.與生物堿沉淀試劑反應(yīng)雜原子的反應(yīng)，能與某些生物堿沉淀試劑反應(yīng)，生成組成恒定的沉淀，可用于鑒別和含量測定。5.氯化物的特性當(dāng)前第48頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)專屬性反應(yīng)二、鑒別試驗(yàn)（一）硫色素反應(yīng)VitB1NaOH-H2O環(huán)合K3Fe(CN)6[O]硫色素正丁醇藍(lán)色熒光H+OH-熒光消失當(dāng)前第49頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)3NaOH-H2O當(dāng)前第50頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)硫色素＋2H環(huán)合-2H二氫硫色素由于形成雜環(huán)的積聚，閉合共軛體系延長，其最大吸收向長波方向轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生熒光。當(dāng)前第51頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)VitB1H+H+H+H+（二）沉淀反應(yīng)K2HgI4淡黃([B]·H2HgI4)I2-KI紅色([B]·HI·I2)硅鎢酸白色苦酮酸白色扇形當(dāng)前第52頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)S元素反應(yīng)Cl-反應(yīng)（三）其他反應(yīng)VitB1NaOHΔNaSPb(Ac)2PbS↓AgNO3HNO3AgCl↓HNO3NH3·H2O溶解MnO2H+Cl2↑KI-淀粉試紙藍(lán)色當(dāng)前第53頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)三、含量測定（一）非水溶液滴定法（原料藥，ChP）[B]·Cl-·HCl+2HClO4Hg(Ac)2[B]·ClO4-·HClO4標(biāo)準(zhǔn)溶液：0.1mol/LHClO4-HAc滴定反應(yīng)：指示劑：電位法消除氫鹵酸鹽對滴定的干擾當(dāng)前第54頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)當(dāng)前第55頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)（二）UV法200250300nmA12341－0.1mol?L-1HCl；2－水；3－緩沖液（pH=7）4－乙醇維生素B1的紫外吸收圖譜λ當(dāng)前第56頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)片劑、注射劑A=ECLChPHCl溶液中W：g；標(biāo)示量：規(guī)格g/片V：ml；標(biāo)示量：規(guī)格g/ml當(dāng)前第57頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)差示分光光度法：pH7：λmax＝266nm，E％1cm為255232nm，E％1cm為345pH2：λmax＝246nm，E％1cm＝421λ200250300nmA120當(dāng)前第58頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)1鹽酸液(pH=2.0)2緩沖液(pH=7.0)3差示光譜λ200250300nmA1230-0.2以pH2溶液為樣品液，相同濃度的pH7溶液為參比液得到的差示光譜圖中，λmax為247nm.故測定波長選擇247nm,通過測定△A(pH2-pH7),計(jì)算含量。當(dāng)前第59頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)（三）硫色素?zé)晒夥?、原理VitB1鐵氰化鉀NaOH硫色素異丙醇熒光激發(fā)波長365nm發(fā)射波長435nm2、方法與計(jì)算當(dāng)前第60頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)+NaOH+鐵氰化鉀+異丁醇+NaOH+異丁醇+NaOH+鐵氰化鉀+異丁醇+NaOH+異丁醇SdAb對照液供試液當(dāng)前第61頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)討論非定量完成，但一定條件下，生成硫色素與維B1濃度成正比，因此可用于含量測定。專屬性強(qiáng)，不受氧化產(chǎn)物影響。氧化劑除鐵氰化鉀外，可使用氯化汞，溴化氰。當(dāng)前第62頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)掌握：維生素C的結(jié)構(gòu)特征鑒別檢查碘量法測定含量的方法第三節(jié)維生素C的分析當(dāng)前第63頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)L－抗壞血酸一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)二烯醇：強(qiáng)還原性內(nèi)酯：堿性下水解兩個(gè)手性碳(C4,C5)當(dāng)前第64頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)1.溶解性易溶于水（二）性質(zhì)2.酸性C3上的羥基受共軛效應(yīng)的影響，酸性較強(qiáng)，pKa=4.17C2上的羥基因鄰位羰基的影響，酸性較弱，pKa=11.57所以抗壞血酸一般表現(xiàn)為一元酸，能與NaHCO3作用生成鈉鹽。當(dāng)前第65頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)二烯醇結(jié)構(gòu)二酮基結(jié)構(gòu)二烯醇結(jié)構(gòu)3.還原性從VitC結(jié)構(gòu)看，與糖類化合物十分相似。其結(jié)構(gòu)中的二烯醇結(jié)構(gòu)使其化學(xué)性質(zhì)非?；顫?，可以反復(fù)接受和釋放質(zhì)子，具有既易氧化有能還原的可逆性質(zhì)。氧化為去氫抗壞血酸，加氫又復(fù)變?yōu)榭箟难?。在pH7以上，受堿的催化作用，很快繼續(xù)水解為二酮古洛糖酸鹽，在強(qiáng)酸性溶液中也能進(jìn)行此反應(yīng)。當(dāng)前第66頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)有活性有活性無活性L－抗壞血酸L－去氫抗壞血酸L－二酮古洛糖酸H+OH-當(dāng)前第67頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)D-抗壞血酸與L-抗壞血酸理化性質(zhì)相似，常作為食品中的抗氧化劑，但其生物活性只有L-抗壞血酸的5％。手性C（C4、C5）4.旋光性**維生素C（L-抗壞血酸）D-抗壞血酸當(dāng)前第68頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)與堿反應(yīng)5.水解反應(yīng)當(dāng)前第69頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)糖類的顯色反應(yīng)結(jié)構(gòu)與糖類相似6.具糖的性質(zhì)H+Δ脫水糠醛糠醛衍生物酚類顯色VitCH+脫水糠醛吡咯藍(lán)色50℃7.UV特征OH-H+λmax265nmλmax243nm當(dāng)前第70頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)利用還原性：與氧化劑的反應(yīng)二、鑒別試驗(yàn)當(dāng)前第71頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)（一）與AgNO3反應(yīng)（二）與2，6-二氯靛酚反應(yīng)(ChP2010)氧化型玫瑰紅色還原型藍(lán)色(ChP2010)AgNO3VitC銀鏡2，6-二氯靛酚VitC無色當(dāng)前第72頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)（玫瑰色）（無色）當(dāng)前第73頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)與堿性酒石酸銅反應(yīng)USP與KMnO4反應(yīng)（三）與其他氧化劑反應(yīng)酸性酒石酸銅VitCCu2O↓紅KMnO4VitCMn2+（四）糖類的反應(yīng)50℃吡咯VitC三氯醋酸或鹽戊糖脫水糠醛藍(lán)色當(dāng)前第74頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)（藍(lán)色）(糠醛)（戊糖）50℃(吡咯)-H2O當(dāng)前第75頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)BP0.01mol/LHCl（五）UV當(dāng)前第76頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)三、雜質(zhì)檢查（一）溶液的澄清度與顏色檢查（二）鐵、銅離子的檢查維生素C原料藥片劑注射劑維生素C原料藥原子吸收法糠醛縮合呈色催化Vc氧化分解當(dāng)前第77頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)指示劑淀粉指示液1、原理（一）碘量法四、含量測定利用Vc強(qiáng)的還原性H+當(dāng)前第78頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液顯藍(lán)色，在30秒內(nèi)不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于8.806mg的C6H8O6。2、方法原料藥當(dāng)前第79頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)（2）酸性環(huán)境稀醋酸

（1）新沸冷H2O減慢VitC被O2氧化速度3、討論（3）立即滴定趕走水中O2減少O2的干擾當(dāng)前第80頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)4.滴定度計(jì)算5.附加劑干擾的排除片劑——過濾注射劑——抗氧劑——丙酮NaHSO3

當(dāng)前第81頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)(二)2，6-二氯靛酚滴定法USPJP1、原理自身指示終點(diǎn)法2、方法當(dāng)前第82頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)（2）快速滴定2min內(nèi)

（1）酸性環(huán)境HPO3-HAc

穩(wěn)定VitC防止其他還原性物質(zhì)干擾（3）剩余比色測定

（定量過量）（測剩余染料）3、討論當(dāng)前第83頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)（4）缺點(diǎn)

需經(jīng)常標(biāo)定貯存≤一周不穩(wěn)定（5）專屬性不強(qiáng)，多用于含Vc的制劑和食品的分析當(dāng)前第84頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)第四節(jié)維生素D的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)維生素D2(麥角骨化醇)當(dāng)前第85頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)維生素D3(膽骨化醇)當(dāng)前第86頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)1.性狀無色針狀結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉末；無臭，無味。2.溶解性溶于有機(jī)溶劑，在植物油中略溶，水中不溶。3.不穩(wěn)定性含有多個(gè)烯鍵，易氧化變質(zhì)，效價(jià)降低，毒性增強(qiáng)。（二）性質(zhì)當(dāng)前第87頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)4．旋光性維生素D26個(gè)手性碳原子維生素D35個(gè)手性碳原子5．顯色反應(yīng)甾類化合物氯仿溶液黃色紅色紫色綠色6．紫外吸收特性

無水乙醇265nm維生素D2E1%1cm為460－490維生素D3E1%1cm為465－495醋酐硫酸當(dāng)前第88頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)二、鑒別試驗(yàn)（一）顯色反應(yīng)1．與醋酐-濃硫酸反應(yīng)氯仿溶液黃色紅色紫色綠色醋酐硫酸2．與三氯化銻反應(yīng)本品1,2-二氯乙烷三氯化銻試液橙紅色粉紅色當(dāng)前第89頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)3．其它顯色反應(yīng)維生素D三氯化鐵橙黃色二氯丙醇乙酰氯綠色（二）比旋度鑒別無水乙醇溶液維生素D2

比旋度為＋102.5°至＋107.5°維生素D3

比旋度為＋105°至＋112°當(dāng)前第90頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)（三）其它鑒別方法薄層色譜法HPLC法制備衍生物測熔點(diǎn)紫外、紅外吸收光譜（四）維生素D2、D3的區(qū)別反應(yīng)維生素D2

維生素D3

96%乙醇10ml取0.1ml乙醇1ml和85%硫酸5ml紅色λmax570nm黃色λmax495nm當(dāng)前第91頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)三、雜質(zhì)檢查（一）麥角甾醇的檢查維生素D290%乙醇溶液洋地黃皂苷溶液不得發(fā)生渾濁或沉淀原理麥角甾醇洋地黃皂苷沉淀當(dāng)前第92頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)（二）前維生素D的光照產(chǎn)物280～320nm吸收當(dāng)前第93頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)四、含量測定正相高效液相色譜法ChP含量以單位表示每單位相當(dāng)于維生素D0.025μg注意：計(jì)算的是維生素D及前維生素D經(jīng)折算成維生素D的總量當(dāng)前第94頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)測定在半暗室及避免氧化的情況下進(jìn)行第一法：無干擾雜質(zhì)第二法：有VA及其他雜質(zhì)干擾第三法：用第二法時(shí)，前VD峰受雜質(zhì)干擾僅VD峰可分離當(dāng)前第95頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)第一法內(nèi)標(biāo)物：鄰苯二甲酸二甲酯色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：填充劑：硅膠流動(dòng)相：正己烷-正戊醇（997：3）檢測波長：254nm無干擾雜質(zhì)當(dāng)前第96頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)維生素D3△光照前維生素D3反式維生素D3維生素D3速甾醇D3與維生素D3的比保留時(shí)間分離度＞1.0＞1.0溶液組成先后進(jìn)樣5次，維生素D3峰面積的RSD≤2.0%0.50.61.01.1當(dāng)前第97頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)校正因子測定：維生素D的校正因子:f1=Asmi/Aims前維生素D折算成維生素D的校正因子:f2=（Asmr-f1msAr1）/（Ar2ms）含量測定：計(jì)算VD及前VD折算成維生素D的總量mi=（f1Ai1+f2Ai2）ms/As當(dāng)前第98頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)第二法第一步：皂化提取供試品OH-加熱回流冷卻乙醚提取乙醚提取液揮干乙醚殘?jiān)状既芙夤┰嚾芤篈有VA及其他雜質(zhì)干擾當(dāng)前第99頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)第二步：分離收集供試品溶液ARP-HPLC維生素D前維生素D維生素A及其他雜質(zhì)疊峰分離收集供試品溶液B維生素D及前維生素D第三步：按第一法進(jìn)行含量測定（內(nèi)標(biāo)法）揮干內(nèi)標(biāo)的正己烷溶液溶解當(dāng)前第100頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)前維生素D變?yōu)榫S生素D第三法第一步：皂化提取同第二法得供試品溶液A第二步：供試品溶液ARP-HPLC維生素D前維生素D維生素A及其他雜質(zhì)疊峰分離供試品溶液C收集揮干異辛烷溶解90℃、1.5h揮干正己烷溶解第三步：用第一法色譜條件按外標(biāo)法計(jì)算含量用第二法時(shí)，前VD峰受雜質(zhì)干擾僅VD峰可分離當(dāng)前第101頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)苯并－二氫吡喃醇第五節(jié)維生素E的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)掌握維生素E的結(jié)構(gòu)特征，鑒別、檢查和GC法測定含量的方法。當(dāng)前第102頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)名稱R1R2相對活性α-生育酚β-生育酚γ-生育酚δ-生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1***當(dāng)前第103頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)生物效價(jià)右旋體：消旋體=1.4：10（天然品）（合成品）dl－α－生育酚醋酸酯當(dāng)前第104頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)（二）性質(zhì)1、易溶于有機(jī)溶劑，不溶于水2、UV3、酯鍵易水解△VitEH+orOH-生育酚[O]醌型化合物當(dāng)前第105頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)（一）硝酸反應(yīng)二、鑒別試驗(yàn)75℃15′VitEHNO3生育酚[O]生育紅（橙紅）生育紅（橙紅色）生育酚HNO3強(qiáng)氧化劑當(dāng)前第106頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)（二）三氯化鐵－聯(lián)吡啶反應(yīng)VitEKOHΔ生育酚Fe3+[O]對-生育醌Fe2+聯(lián)吡啶紅色生育酚對-生育醌[O]弱氧化劑當(dāng)前第107頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)紅色當(dāng)前第108頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)λmax=284nmλmin=254nm0.01%無水乙醇中（三）UV法維生素EUV圖200300nm01.0A當(dāng)前第109頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)薄層板硅膠G展開劑環(huán)己烷-乙醚（4：1）顯色劑硫酸（105℃5′）VitERf

=0.7（四）TLC法當(dāng)前第110頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)（二）生育酚硫酸鈰滴定液（0.01mol/L）二苯胺（亮黃→灰紫）1.原理利用游離生育酚的還原性，將硫酸鈰還原成硫酸亞鈰.三、雜質(zhì)檢查2.試劑（一）酸度游離醋酸，酸堿滴定檢查當(dāng)前第111頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)（B生育酚=430.8）例取本品0.10g，加無水乙醇5ml溶解后，加二苯胺試液1滴，用硫酸鈰液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸鈰液（0.01mol/L）不得過1.0ml。當(dāng)前第112頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)3.限量當(dāng)前第113頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)（三）有關(guān)物質(zhì)

維生素E（合成型）GC（與含量測定中色譜條件相同）（四）殘留溶劑

維生素E（天然型）GC正己烷當(dāng)前第114頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)四、含量測定（一）GC法1、GC特點(diǎn)選擇性好靈敏度高速度快分離效能好揮發(fā)性低、不穩(wěn)定、極性強(qiáng)→衍生化。當(dāng)前第115頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)載氣：N2固定液：硅酮（OV-17）擔(dān)體：硅藻土或高分子多孔小球柱溫：265℃檢測器：氫火焰離子化檢測器(FID)內(nèi)標(biāo)：正三十二烷n≥500R≥2內(nèi)標(biāo)法加校正因子2.VitE測定的色譜條件1溶劑正己烷；2內(nèi)標(biāo)正三十二烷；3維生素E123當(dāng)前第116頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)內(nèi)標(biāo)法供試液（樣品+內(nèi)標(biāo)）內(nèi)標(biāo)物對照液（對照+內(nèi)標(biāo)）是樣品中不存在的物質(zhì)與被測組分峰靠近能與各組分完全分離與被測組分的量接近當(dāng)前第117頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)BPGC內(nèi)標(biāo)正三十二烷R≥1.4USPGC內(nèi)標(biāo)十六酸十六醇酯R≥1.0JPHPLC外標(biāo)dl－α－生育酚醋酸酯R≥1.4當(dāng)前第118頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)樣品→dl－α－生育酚固定相→十八烷基硅烷鍵合硅膠流動(dòng)相→甲醇-水（49：1）檢測波長→292nmR＞2.6RSD≤0.8%（二）RP-HPLC法（外標(biāo)法）JP當(dāng)前第119頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)總結(jié)（重點(diǎn)）VA：鑒別---三氯化銻反應(yīng)含量測定---三點(diǎn)校正法（第一法）原理前提條件波長的選擇測定結(jié)果的判斷計(jì)算當(dāng)前第120頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)VB2：鑒別---硫色素反應(yīng)含量測定---非水滴定法（原料）紫外分光光度法（制劑）硫色素?zé)晒夥ǎ║SP）當(dāng)前第121頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)VC：鑒別---1.利用還原性硝酸銀2、6-二氯靛酚高錳酸鉀堿性酒石酸銅2.糖類反應(yīng)含量測定---碘量法原理?xiàng)l件干擾消除當(dāng)前第122頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)VE：鑒別---1、硝酸反應(yīng)：條件、現(xiàn)象2、三氯化鐵-聯(lián)吡啶反應(yīng)雜質(zhì)檢查---生育酚（鈰量法）原理計(jì)算含量測定---氣相色譜法（中國藥典方法）當(dāng)前第123頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)1．在三氯醋酸或鹽酸存在下，經(jīng)水解、脫羧、失水后，加入吡咯即產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物的藥物應(yīng)是A.氯氮卓B.維生素AC.普魯卡因D.鹽酸嗎啡E.維生素C當(dāng)前第124頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)2．中國藥典（2010年版）采用以下何法測定維生素E含量A.酸堿滴定法B.氧化還原法C.紫外分光光度法D.氣相色譜法E.非水滴定法當(dāng)前第125頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)3．中國藥典（2010年版）采用氣相色譜法測定維生素E含量，內(nèi)標(biāo)物質(zhì)為A.正二十二烷B.正二十六烷C.正三十烷D.正三十二烷E.正三十六烷當(dāng)前第126頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)4.下列藥物的堿性溶液，加入鐵氰化鉀后，再加正丁醇，顯藍(lán)色熒光的是A.維生素AB.維生素B1

C.維生素CD.維生素DE.維生素E當(dāng)前第127頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)5．既具有酸性又具有還原性的藥物是A.維生素AB.咖啡因C.苯巴比妥D.氯丙嗪E.維生素C當(dāng)前第128頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)6.維生素C的鑒別反應(yīng)，常采用的試劑有A.堿性酒石酸銅B.硝酸銀C.碘化鉍鉀D.乙酰丙酮E.三氯醋酸和吡咯當(dāng)前第129頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)7.測定維生素C注射液的含量時(shí)，在操作過程中要加入丙酮，這是為了A.保持維生素C的穩(wěn)定B.增加維生素C的溶解度C.使反應(yīng)完全D.加快反應(yīng)速度E.消除注射液中抗氧劑的干擾當(dāng)前第130頁\共有139頁\編于星期六\8點(diǎn)8.能發(fā)生硫色素特征反應(yīng)的藥物是A.維生素AB.維生素B1

C.維生素C