藥物分析課件第四章藥物的鑒別試驗

藥物分析課件第四章藥物的鑒別試驗第一頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一第一節(jié)概述藥品檢驗工作的基本內(nèi)容1.取樣2.鑒別3.檢查4.含量測定5.檢驗報告檢驗第二頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一一、藥物鑒別試驗的意義與目的藥物的鑒別試驗（identificationtest)是根據(jù)藥物的組成、分子結構、理化性質(zhì),采用化學、物理化學或生物學方法來證明已知藥物的真?zhèn)?。而不是對未知物進行定性分析。是藥檢工作的首要任務，雜質(zhì)檢查、含量測定的前提。第三頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一二、藥物鑒別試驗的特點1.為已知藥物的確證試驗，不是鑒定未知物的組成和結構，僅用于證實貯藏在有標簽容器中的藥物是否為其所標示的藥物，而非對未知物的鑒別。2.鑒別試驗是個別分析，而不是系統(tǒng)分析。(采用靈敏度高專屬性強的方法,試驗項目少，一般只作一、二或三、四項試驗。原料藥鑒別項下試驗項目為3～4有的僅1～2個，制劑鑒別項目一般比原料藥少)。第四頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一3.通常采用不同方法鑒別，綜合分析。（藥物鑒別不只由一項試驗就能完成，而是采用一組試驗項目（2個或2個以上）全面評價一個藥物，如選用藥物的化學鑒別反應,光譜特征,色譜行為,物理常數(shù)等不同方法鑒別同一個供試品，力求使結論正確無誤。）4、對藥物制劑進行鑒別時，要注意消除制劑中輔料的干擾，對復方制劑尤其要注意消除各主要成分的干擾。第五頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一《中國藥典》

鑒別項下規(guī)定的試驗方法,僅反應藥品某些物理、化學或生物學等性質(zhì)的特征，不完全代表對該藥品化學結構的確認。第六頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一第二節(jié)鑒別試驗項目藥物的鑒別試驗包括：性狀和鑒別（一般鑒別試驗和專屬鑒別試驗）。一、性狀

包括顏色、臭味等應有的外觀以及溶解度和物理常數(shù)。

是質(zhì)量重要表征之一,在一定程度上反映藥品的純度及療效。第七頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一1、外觀

指藥物外表感觀和色澤，包括聚集狀態(tài)、晶型、色澤以及臭、味等性質(zhì)。

如：維生素B1“本品為白色結晶或結晶粉末；

有微弱的特臭，味苦；

干燥品在空氣中迅即吸收約4%的水分”

如：《中國藥典》對二巰基丁二鈉的描述為“本品為白色至微黃色的粉末；有類似蒜的特臭”。（色澤）（聚集狀態(tài)）（臭）（味）第八頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一2、溶解度溶解度是藥物的一種物理性質(zhì)，在一定程度上反映了藥品的純度。

如磺胺嘧啶“在乙醇或丙酮中微溶，在水中幾乎不溶；在氫氧化鈉試液中易溶，在稀鹽酸中溶解”。尼莫地平

在丙酮、三氯甲烷或乙酸乙酯中易溶，在乙醇中溶解，在乙醚中微溶，在水中幾乎不溶。第九頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一

3．物理常數(shù)：評價藥品質(zhì)量的重要指標，具有鑒別意義，也反映該藥品的純雜程度。

《中國藥典》收載的物理常數(shù)包括：

相對密度、餾程、熔點、凝點、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羥值、碘值、吸收系數(shù)。

第十頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一二、一般鑒別試驗依據(jù)某一類藥物的化學結構或理化性質(zhì)的特征，通過化學反應來鑒別藥物的真?zhèn)巍?/p>

特點為：

是證實藥品是某一類藥物的依據(jù)，要進一步證實是哪一種藥物，還需要結合專屬鑒別試驗。是根據(jù)藥物所具有的性質(zhì)或結構進行藥物的真?zhèn)舞b別。

例：無機藥物——根據(jù)其組成的陰、陽離子的特殊反應，并以藥典附錄項下的一般鑒別試驗為依據(jù)。有機藥物――采用典型官能團反應。只能確定供試品為某一類藥物，而不能證實它是哪一種藥物

第十一頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一一般鑒別試驗：

只能證實是某一類藥物，而不能證實是哪一種藥物。

例如:鈉鹽的焰色試驗,不能辨認是氯化鈉、苯鉀酸鈉或者是其它某一種鈉鹽藥物。

只適用于確認單一的化學藥物，對多種藥物的混合物或有干擾物存在時，不適用。

第十二頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一第十三頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一一般鑒別試驗的項目---《中國藥典》

丙二酰脲類、

托烷生物堿類、

芳香第一胺類、

有機氟化物類、

無機金屬鹽類（鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、鈣鹽、鋇鹽、銨鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋁鹽、鋅鹽、銅鹽、銀鹽、汞鹽、鉍鹽、銻鹽、亞錫鹽）、

有機酸鹽（水楊酸鹽、枸櫞酸鹽、乳酸鹽、苯甲酸鹽、酒石酸鹽）、

無機酸鹽（亞硫酸鹽或亞硫酸氫鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、硼酸鹽、碳酸鹽與碳酸氫鹽、醋酸鹽、磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物）第十四頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一1.有機氟化物(1)原理

有機氟化物經(jīng)氧瓶燃燒法破壞，為堿性溶液吸收成為無機氟化物，在pH4.3溶液中無機氟化物與與茜素氟藍、硝酸亞鈰結合成藍紫色的螯合物。

為了消除試劑和器皿可能帶來的影響，應同時進行空白試驗（blanktest）以供對照。

空白試驗：在與供試品鑒別試驗完全相同的條件下，除不加供試品外，其它試劑均同樣加入而進行的試驗。

第十五頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一反應式為：第十六頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一(2)鑒別方法

取供試品約7mg，照氧瓶燃燒法進行有機破壞，用水20ml與氫氧化鈉（0.01mol/L）6.5ml為吸收液，待燃燒完畢后，充分振搖；取吸收液2ml，加茜素氟藍試液0.5ml，再加含有12%乙酸鈉的稀乙酸溶液0.2ml，用水稀釋至4ml，加硝酸亞鈰試液0.5ml，即顯藍紫色；同時做空白對照試驗。第十七頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一2.芳香第一胺類(1)原理芳香族第一胺遇亞硝酸鈉發(fā)生重氮化反應，生成重氮鹽，再與堿性β-萘酚偶合形成有色偶氮染料。反應式為：β-奈酚試液要現(xiàn)用現(xiàn)配

不同的供試品，會生成橙黃色到猩紅色沉淀。

第十八頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一(2)鑒別方法

取供試品約50mg，加稀鹽酸1ml，必要時緩緩煮沸使溶解，放冷，加亞硝酸鈉溶液（0.1mol/L）數(shù)滴，滴加堿性β-萘酚試液數(shù)滴，視供試品不同，生成橙黃到猩紅色沉淀。如供試品為酰化芳香第一胺類，取供試品約0.1g，加稀鹽酸2ml，煮沸水解，放冷，再照上法試驗。第十九頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一3.丙二酰脲類(P141)（1）與銀鹽的反應

1)原理

丙二酰脲類在碳酸鈉試液中形成鈉鹽而溶解，再與硝酸銀試液起作用，先生成可溶性的一銀鹽，繼而產(chǎn)生不溶性的二銀鹽沉淀。2）鑒別方法取供試品約0.1g，加碳酸鈉試液1ml與水10ml，振搖2min，濾過，濾液中逐滴加入硝酸銀試液即發(fā)生白色沉淀，振搖沉淀溶解；繼續(xù)滴加過量的硝酸銀試液，沉淀不再溶解。第二十頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一與銀鹽反應一銀鹽一銀鹽二銀鹽白色沉淀第二十一頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一（2）與銅鹽的反應

1）原理

丙二酰脲分子中具有－CONHCONHCO－的結構，與銅鹽作用，能產(chǎn)生類似雙縮脲的顯色反應，與吡啶和硫酸銅作用，顯紫色。2）鑒別方法

取供試品約50mg，加吡啶溶液（1→10）5ml，溶解后，加銅吡啶試液1ml，生成有特征顏色的配合物，即顯紫色或生成紫色沉淀。第二十二頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一與銅鹽反應第二十三頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一4、托烷生物堿類（1）原理

托烷生物堿類藥物均顯莨菪酸結構的反應，有Vitali（維他立）反應，供試品與發(fā)煙硝酸共熱，生成黃色的三硝基（或二硝基）衍生物，冷后，加醇制氫氧化鉀少許，生成醌型化合物，顯深紫色。（2）鑒別方法

取供試品約10mg，加發(fā)煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，即得黃色的殘渣，放冷，加乙醇2～3滴濕潤，再加固體氫氧化鉀一小粒，即顯深紫色。第二十四頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一反應式為：水解3HNO3三硝基衍生物KOH(C2H5OH)KOH深紫色莨菪酸第二十五頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一5.無機金屬鹽（鈉鹽、鉀鹽、銨鹽）鈉鹽、鉀鹽（1）測定原理

鈉的火焰光譜的主要譜線有589.0nm、589.6nm，故顯黃色。鉀鹽的火焰光譜的主要譜線有766.49nm、769.90nm等，由于人眼在此波長附近敏感度較差，故顯紫色。如有鈉鹽混存，因鈉鹽靈敏度很高，遮蓋了鉀鹽的紫色，需透過藍色鈷玻璃將鈉焰的黃色濾去，此時火焰顯粉紅色。第二十六頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一（2）鑒別方法鈉鹽：1）取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，火焰即顯鮮黃色。2）取供試品約100mg，置10ml試管中，加水2ml溶解，加15%碳酸鉀溶液2ml，加熱至沸，應不得有沉淀生成；加焦銻酸鉀試液4ml，加熱至沸；置冰水中冷卻，必要時，用玻璃棒摩擦試管內(nèi)壁，應有致密的沉淀生成。

第二十七頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一鉀鹽：1）取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，火焰即顯紫色；但有少量的鈉鹽混存時，須隔藍色玻璃透視，方能辨認。2）取供試品，加熱熾灼除去可能雜有的銨鹽，放冷后，加水溶解，再加0.1％四苯硼鈉溶液與醋酸，即生成白色沉淀。若有NH4+離子存在，顯相同反應，故必須預先加熱熾灼除去，以免干擾。第二十八頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一銨鹽（1）取供試品，加過量的氫氧化鈉試液后，加熱，即分解，發(fā)生氨臭；遇用水濕潤的紅色石蕊試紙，能使之變藍色，并能使硝酸亞汞試液濕潤的濾紙顯黑色。第二十九頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一（2）取供試品溶液，加堿性碘化汞鉀試液1滴，即生成紅棕色沉淀。

銨鹽與堿性碘化汞鉀作用生成紅棕色沉淀若僅有痕量NH4+離子存在，則得黃色溶液。第三十頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一6、無機酸根（SO42-、Cl-或NO3-）

（1）硫酸鹽

1）取供試品溶液，加氯化鋇試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在鹽酸或硝酸中均不溶解。（硫酸鹽與氯化鋇反應生成硫酸鋇白色沉淀。硫酸鋇在稀鹽酸或稀硝酸中不溶）SO42-+Ba2+BaSO4

白色第三十一頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一2）取供試品溶液，加醋酸鉛試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在醋酸銨試液或氫氧化鈉試液中溶解。（硫酸鹽與醋酸鉛反應生成硫酸鉛白色沉淀。沉淀遇醋酸銨即生成電離度極小的醋酸鉛而溶解。由于鉛具兩性，故該沉淀遇氫氧化鈉溶解，再加稀硫酸酸化，沉淀復現(xiàn)。）第三十二頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一3）取供試品溶液，加鹽酸，不生成白色沉淀(與硫代硫酸鹽區(qū)別)。第三十三頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一

（2）氯化物

1）：取供試品溶液，加硝酸使成酸性后，加硝酸銀試液，即生成白色凝乳狀沉淀；分離，沉淀加氨試液即溶解，再加硝酸，沉淀復生成。

Cl-+AgNO3AgCl

NH3H2O沉淀溶解

+HNO3

沉淀生成

如供試品為生物堿或其他有機堿的鹽酸鹽，須先加氨試液使成堿性，將析出的沉淀濾過除去，取濾液進行試驗。一般鑒別實驗第三十四頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一2)取供試品少量，置試管中，加等量的二氧化錳,混勻,加硫酸濕潤,緩緩加熱，即發(fā)生氯氣，能使?jié)駶櫟牡饣浀矸墼嚰堬@藍色。

Cl-+MnO2Mn2++Cl2H2SO4使?jié)駶櫟腒I_淀粉試紙變藍第三十五頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一（3）硝酸鹽：

1）取供試品溶液，置試管中，加等量的硫酸，小心混合，冷后，沿管壁加硫酸亞鐵試液，使成兩液層，接界面顯棕色。

NO3-離子被FeSO4還原產(chǎn)生NO，NO與FeSO4作用形成棕色。第三十六頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一

2）取供試品溶液，加硫酸與銅絲（或銅屑），加熱，即發(fā)生紅棕色的蒸氣。

硝酸被金屬銅還原放出NO，NO在空氣中被氧化為NO2而顯棕色。第三十七頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一3）取供試品溶液，滴加高錳酸鉀試液，紫色不應褪去（與亞硝酸鹽區(qū)別）。第三十八頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一7、有機酸鹽(水楊酸鹽)方法一、與三氯化鐵的反應（1）原理

水楊酸鹽在中性或弱酸性條件下，和三氯化鐵試液生成配位化合物，在中性時呈紅色，弱酸性時呈紫色；若在強酸性中，配位化合物分解生成游離水楊酸。（2）鑒別方法：取供試品的稀溶液，加三氯化鐵試液1滴，即顯紫色。第三十九頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一目前反應機制尚未確定，一般多以下式表示：本反應極為靈敏，只需取稀溶液進行試驗，如取用量大，顏色很深時，可加水稀釋后觀察。第四十頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一方法二、其他鑒別反應

（1）原理水楊酸不溶于水（0℃時溶解度為1g/1500L），故供試液加酸即析出游離水楊酸。由于水楊酸的酸性大于醋酸，故能與醋酸銨作用釋出醋酸，而本身形成銨鹽溶解。

（2）鑒別方法：取供試品溶液，加稀鹽酸，即析出白色水楊酸沉淀；分離，沉淀在醋酸銨試液中溶解。第四十一頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一三、專屬鑒別試驗

證實某一種藥物的依據(jù)它根據(jù)每一種藥物化學結構的差異及其引起的物理化學性質(zhì)不同,選用某些靈敏的定性反應,來鑒別藥物真?zhèn)?。區(qū)別各個藥物單體，達到最終確證藥物真?zhèn)蔚哪康摹Ｒ话汨b別試驗依據(jù)某類藥物共同的特點，區(qū)別不同類藥物。專屬鑒別試驗在一般鑒別試驗的基礎上，利用各種藥物的化學結構差異，鑒別各個藥物單體。第四十二頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一共性丙二酰脲-CONHCONHCO-

可與某些金屬離子（Ag+、Cu2+、Hg2+等）反應呈色或產(chǎn)生沉淀巴比妥類藥物R+2AgNO3+2HNO3一般鑒別試驗第四十三頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一與Pb2+反應生成黑色PbS甲醛硫酸反應碘取代反應專屬鑒別試驗

硫噴妥鈉司可巴比妥苯巴比妥第四十四頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一第三節(jié)鑒別方法藥物的鑒別方法要求專屬性強，重現(xiàn)性好，靈敏度高，以及操作簡便、快速等。常用鑒別方法有化學法，光譜法，色譜法和生物學法。一、化學鑒別法反應迅速、現(xiàn)象明顯。

包括測定生成物的熔點，在適當條件下產(chǎn)生顏色、熒光，發(fā)生沉淀反應或產(chǎn)生氣體。第四十五頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一

三氯化鐵呈色反應(Ar-OH,Ar-OCOCH3)

異羥戊酸鐵反應(Ar-COOH;-COOR)

1.顯色反應鑒別法茚三酮呈色反應(脂肪氨基，α－氨基酸）重氮化-偶合呈色反應(Ar-NH2;Ar-NHCOR)氧化還原顯色反應及其它顏色反應與金屬離子的沉淀反應第四十六頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一2.沉淀生成鑒別法

與硫氰化鉻銨的沉淀反應其它沉淀反應(如生物堿沉淀劑）

第四十七頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一

藥物本身在可見光下發(fā)射熒光藥物溶液加硫酸后在可見光下發(fā)射熒光3.熒光反應鑒別法

藥物與溴反應后，在可見光下發(fā)出熒光藥物與間苯二酚溴反應后，發(fā)射出熒光藥物其它反應后，發(fā)射出熒光

制備衍生物：藥物＋試劑具有熒光的衍生物第四十八頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一

胺類、酰脲類、酰胺類藥物經(jīng)強堿處理生成氨氣(NH3；NH(C2H5)2)含硫藥物經(jīng)強酸處理后，加熱，生成硫

4.氣體生成反應鑒別法

化氫氣體(H2S+Pb2+PbS+2H+)含碘有機藥物，加熱。生成紫色碘蒸汽含醋酸酯和乙酰胺類藥物酸水解后，加乙醇可產(chǎn)生乙酸乙酯第四十九頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一5.制備衍生物測定熔點法

藥物＋試劑新化合物有一定mp;藥物酸化或堿化生成游離酸或堿。操作繁瑣費時間，應用較少。第五十頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一二、光譜鑒別法

測定最大吸收波長，或同時測定最小吸收波長規(guī)定濃度的供試液在最大吸收波長測定吸收度1.紫外光譜鑒別法

規(guī)定吸收波長和吸收系數(shù)法規(guī)定吸收波長和吸收度比值法經(jīng)化學處理后,測定其反應產(chǎn)物吸收光譜特性第五十一頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一

壓片法2.紅外光譜鑒別法

糊法膜法溶液法第五十二頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一

TLC法（Rf樣＝Rf對）

三、色譜鑒別法

PC法

HPLC法（tR樣＝tR對）

GC法

四、生物學法

是利用微生物或?qū)嶒瀯游镨b別法第五十三頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一五、藥物鑒別方法新動向

（1）儀器分析應用數(shù)量增加，尤其是紅外光譜法、氣相色譜法和高效液相色譜法。

（2）制劑廣泛采用IR法鑒別。與原料藥相比，制劑需先分離再壓片繪制圖譜。第五十四頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一六、鑒別實驗條件

鑒別試驗必須在規(guī)定條件下完成，否則將會影響結果的判斷。影響鑒別反應的因素主要有被測物濃度，試劑的用量，溶液的溫度、pH，反應時間和干擾物質(zhì)的存在等。第五十五頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一（1）溶液的濃度

溶液的濃度主要指被鑒別物質(zhì)的濃度，其大小影響結果的判斷。（如化學法中要觀察沉淀、顏色；UV法中λmax,A,E1%1cm)（2）溶液的溫度

溫度過高可使產(chǎn)物分解，導致顏色變淺，沉淀溶解，甚至觀察不到結果，故試驗中應注意溫度的控制。第五十六頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一（3）溶液的酸堿度

許多鑒別反應都需要在一定酸堿度的條件下進行，溶液的酸堿度能夠使各反應物有足夠的濃度處于活化狀態(tài)、使反應產(chǎn)物處于穩(wěn)定和易于觀察狀態(tài)。（4）試驗時間

有機化合物的化學反應較慢，需要一定的反應時間和條件。（5）干擾成分的存在

藥物制劑的鑒別，其它成分則會干擾檢查結果的現(xiàn)象觀察，必須選擇專屬性更高的鑒別方法或?qū)⒏蓴_成分分離后鑒別。第五十七頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一第四節(jié)鑒別試驗的靈敏度一、反應靈敏度在一定條件下，能在盡可能稀的溶液中觀測出盡可能少量的供試品，反應對這一要求所能滿足的程度，即稱為反應的靈敏度（sensitivity）。它以兩個相互有關的量來表示：

最低檢出量（又稱檢出限量）（minimumdetectablequantity)

最低檢出濃度（又稱界限濃度）（minimumdetectableconcentration)第五十八頁，共六十七頁，編輯于2023年，星期一最低檢出量（以m表示），就是應用某一反應，在一定的條件下，能夠觀測出試驗結果的供試品的最小量，其單位通常用微克（μg）表示。

最低檢出濃度是應用某一反應，在一定條件下，能夠觀測出供試品的最低濃度，通常以1:V(或1:G）表示，其中V(或G