活菌計數(shù)參考材料

細(xì)菌計數(shù)參考材料一、檢樣稀釋1、以無菌操作用1mL滅菌吸管吸取1∶10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi)，振搖試管混勻，做成1∶100的稀釋液。2、另取1mL滅菌吸管，按上條操作依次做10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用1支1mL滅菌吸管。3、根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況的估計，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種3管。二、基本原理平板菌落計數(shù)法是根據(jù)微\o"生物相關(guān)文章"生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個菌落是由一個單\o"細(xì)胞文章"細(xì)胞繁殖而成的現(xiàn)象進(jìn)行的，也就是說一個菌落即代表一個單\o"細(xì)胞文章"細(xì)胞。計數(shù)時，先將待測樣品作一系列稀釋，再取一定量的稀釋菌液接種到培養(yǎng)皿中，使其均勻分布于平皿中的培養(yǎng)基內(nèi)，經(jīng)培養(yǎng)后，由單個\o"細(xì)胞文章"細(xì)胞生長繁殖形成菌落，統(tǒng)計菌落數(shù)目，即可換算出樣品中的含菌數(shù)。這種計數(shù)法的優(yōu)點是能測出樣品中的活菌數(shù)。三、器材大腸桿菌懸液，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，1ml無菌吸管，無菌平皿，盛有9ml無菌水的試管，試管架和記號筆等。四、操作步驟1、編號：取無菌平皿9套，分別用記號筆標(biāo)明10-6、10-7各2套。另取7支盛有9ml無菌水的試管，排列于試管架上，依次標(biāo)明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10－7。2、稀釋用1ml無菌吸管精確地吸取1ml大腸桿菌懸液放入10-1的試管中，注意吸管尖端不要碰到液面，另取1支吸管將管內(nèi)懸液來回吸吹三次，吸時伸入管底，吹時離開水面，使其混合均勻。換一支吸管自10-1試管吸1ml放入10-2試管中，吸吹三次，……其余依次類推。整個稀釋過程如圖Ⅷ-3。3、取樣用3支1ml無菌吸管分別精確地吸取10-6、10-7的稀釋菌液0．1ml，對號放入編好號的培養(yǎng)皿中。4、計數(shù)培養(yǎng)24小時后，取出培養(yǎng)皿，算出同一稀釋度三個平皿上的菌落平均數(shù)，并按下列公式進(jìn)行計算：每毫升中總活菌數(shù)=同一稀釋度三次重復(fù)的菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)×10一般選擇每個平板上長有30—300個菌落的稀釋度計算每毫升的菌數(shù)最為合適。同一稀釋度的三個重復(fù)的菌數(shù)不能相差很懸殊。由10-6、10-7兩個稀釋度計算出的每毫升菌液中總活菌數(shù)也不能相差懸殊，如相差較大，表示試驗不精確。平板菌落計數(shù)法，所選擇倒平板的稀釋度是很重要的，一般以三個稀釋度中的第二稀釋度倒平板所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個左右為最好。平板菌落計數(shù)法的操作是先將牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基溶化后倒平板，待凝固后編號，并于37℃溫室中烘烤30分鐘左右，使其干燥，然后用無菌吸管吸取0.1ml菌液對號接種于不同稀釋度編號的培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基上，再用無菌玻璃刮棒將菌液在平板上涂布均勻，平放于\o"實驗文章"實驗臺上20—30分鐘，使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi)，然后再倒置于37℃的溫室中培養(yǎng)。五、無菌操作的基本要求1、試驗開始前，應(yīng)以濕式方法清潔臺面和打掃室內(nèi)地面，然后以紫外線或其他方法對實驗室內(nèi)空氣進(jìn)行消毒；2、實驗人員應(yīng)穿戴工作服、口罩、帽子；進(jìn)行無菌檢驗時，需經(jīng)風(fēng)淋后進(jìn)入實驗室，然后，正確穿戴好無菌隔離衣、帽和口罩；3、每吸取一次不同樣液應(yīng)更換無菌吸管，接種環(huán)（針）需在火焰上燒灼滅菌后，才可再次使用；4、要求無菌的試劑，如蒸餾水、生理鹽水、磷酸鹽緩沖液、培養(yǎng)基、牛血清白蛋白、標(biāo)準(zhǔn)硬水、中和劑等，均需滅菌或過濾除菌；5、無菌器材和試劑，使用前須檢查容器或包裝是否完整，有破損者不得使用；6、正在使用的無菌器材和試劑不得長時間暴露于空氣中；7、移液或接種時，應(yīng)將試管口和瓊脂平板靠近火焰，防止污染；8、所有用過的污染器材，應(yīng)立即放入盛有消毒液的容器中，以防止對周圍環(huán)境和清潔物品造成污染；9、若不慎發(fā)生微生物培養(yǎng)物摔碎或其他試驗微生物泄漏事故時，不論是否具有致病性，均應(yīng)立即對污染及可能波及的區(qū)域進(jìn)行消毒處理；菌落數(shù)計算參考1．計數(shù)時應(yīng)選取菌落數(shù)在30~300之間的平板（SN標(biāo)準(zhǔn)要求為25~250個菌落），若有二個稀釋度均在30~300之間時，按國家標(biāo)準(zhǔn)方法要求應(yīng)以二者比值決定，比值小于或等于2取平均數(shù)，比值大于2則其較小數(shù)字（有的規(guī)定不考慮其比值大小，均以平均數(shù)報告）。2．若所有稀釋度均不在計數(shù)區(qū)間。如均大于300，則取最高稀釋度的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。如均小于30，則以最低稀釋度的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)報告之。如菌落數(shù)有的大于300，有的又小于30，但均不在30~300之間，則應(yīng)以最接近300或30的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。如所有稀釋度均無菌落生長，則應(yīng)按小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報告之。有的規(guī)定對上述幾種情況計算出的菌落數(shù)按估算值報告。3．不同稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)與稀釋倍數(shù)成反比（同一稀釋度的二個平板的菌落數(shù)應(yīng)基本接近），即稀釋倍數(shù)愈高菌落數(shù)愈少，稀釋倍數(shù)愈低菌落數(shù)愈多。如出現(xiàn)逆反現(xiàn)象，則應(yīng)視為檢驗中的差錯（有的食品有時可能出現(xiàn)逆反現(xiàn)象，如酸性飲料等），不應(yīng)作為檢樣計數(shù)報告的依據(jù)。4．當(dāng)平板上有鏈狀菌落生長時，如呈鏈狀生長的菌落之間無任何明顯界限，則應(yīng)作為一個菌落計，如存在有幾條不同來源的鏈，則每條鏈均應(yīng)按一個菌落計算，不要把鏈上生長的每一個菌落分開計數(shù)。如有片狀菌落生長，該平板一般不宜采用，如片狀菌落不到平板一半，而另一半又分布均勻，則可以半個平板的菌落數(shù)乘2代表全平板的菌落數(shù)。5．當(dāng)計數(shù)平板內(nèi)的菌落數(shù)過多（即所有稀釋度均大于300時），但分布很均勻，可取平板的一半或1/4計數(shù)。再乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)作為該平板的菌落數(shù)。

6．菌落數(shù)的報告，按國家標(biāo)準(zhǔn)方法規(guī)定菌落數(shù)在1~100時，按實有數(shù)字報告，如大于100時，則報告前面兩位有效數(shù)字，第三位數(shù)按四舍五入計算。固體檢樣以克（g）為單位報告，液體檢樣以毫升（ml）為單位報告，表面涂擦則以平方厘米（cm2）報告。獸藥典的活菌計數(shù)法取菌液或疫苗（如果為凍干苗，則先加原裝量5～10倍量稀釋液作放大稀釋）進(jìn)行稀釋，在一定條件下培養(yǎng)，所得細(xì)菌菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，即為其活菌數(shù)。按下列方法測定。1、表面培養(yǎng)測定法每個樣品取1.0ml，用各制品適宜的稀釋液做10倍系列稀釋，每個稀釋度換1支吸管。具體方法是：準(zhǔn)確吸取菌液1.0ml，放入盛有稀釋液9.0ml的第1支試管中（不接觸液面），另取1支吸管將第1管液體混合均勻后，吸取1.0ml放入第2管中，依次稀釋至最后一管，根據(jù)對樣品含菌數(shù)的估計，選擇適宜稀釋度，吸取最終稀釋度的菌液接種適宜的培養(yǎng)基平板3個，每個平板0.1ml，使菌液散開，置37℃晾干后，翻轉(zhuǎn)平板，培養(yǎng)24～48小時（亦可適當(dāng)延長）。2、混合培養(yǎng)測定法稀釋法同上，取最終稀釋度的菌液接種平板3個，每個1.0ml，然后將溶化并冷至45℃的普通瓊脂傾注入平板中，輕輕搖動平板，使稀釋的菌液與培養(yǎng)基混合均勻，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置37℃培