白細胞計數(shù)和分類課件

實驗一、白細胞計數(shù)

1.原理：血液經(jīng)稀乙酸定量稀釋并破壞成熟紅細胞，在血細胞計數(shù)池內計數(shù)規(guī)定區(qū)域內的白細胞總數(shù)，換算成每升血液中白細胞數(shù)。2.試劑器材白細胞稀釋液：冰乙酸2.0ml

10g/L亞甲藍3滴加蒸餾水至100ml器材

改良牛鮑血細胞計數(shù)板及專用蓋片、微量吸管、帶孔吸頭、1ML刻度移液管、小試管、潔凈軟紗布、干棉球、光學顯微鏡。毛細血管采血標準操作程序

操作步驟：1采血部位成人以左手無名指內側為宜，半歲以下嬰幼兒通常自拇指內側或足跟兩側采血。2輕輕按摩采血部位。 3用棉簽蘸消毒液消毒局部皮膚、待干。4緊捏刺血部位，使其自然充血。5用無菌刺針穿刺取血，動作應迅速，深度2～3mm，稍加擠壓以血液流出為宜。6用干棉球擦去第一滴血。7按需要依次采血。8采血完畢，用干棉球壓住傷口，止血片刻。

微量吸管的使用1將帶孔乳膠吸頭輕輕套在微量吸管上，連接緊密不漏氣；2拇指和中指夾住吸頭中下端，示指蓋住吸頭小孔，拇、中指輕微擠壓排出適量空氣；3將微量吸管插入抗凝血，拇、中指緩慢松勁（松動快血液會吸入吸頭），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有氣泡），吸管呈水平略下垂，松開示指；4用干棉球順吸管向下拭盡管外余血（保證血量準確），輕觸吸管下口吸去多余血量，使管內抗凝血正處所需刻度；5將微量吸管插入小試管底部，三指輕微用力慢慢排出血液，用上清液沖洗管內余血2-3次，輕搖試管混勻；6拔出微量吸管棄入污物桶。實驗一、白細胞計數(shù)38ml白細胞稀釋液。2輕輕按摩采血部位。2輕輕按摩采血部位。原理：血液經(jīng)稀乙酸定量稀釋并破壞成熟紅細胞，在血細胞計數(shù)池內計數(shù)規(guī)定區(qū)域內的白細胞總數(shù)，換算成每升血液中白細胞數(shù)。改良牛鮑血細胞計數(shù)板及專用蓋片、微量吸管、帶孔吸頭、1ML刻度移液管、小試管、潔凈軟紗布、干棉球、光學顯微鏡。大淋巴細胞胞漿量較多，呈清澈的淡藍色，可見少量嗜苯胺藍顆粒，胞核圓或橢圓，常偏向細胞一側，染色較深。白細胞分類瑞氏染色原理：瑞氏染料溶于甲醇，離解為帶正電的堿性美蘭（M+）和帶負電的酸性伊紅（E-）離子。白細胞稀釋液：冰乙酸2.微量吸管的使用細胞分布均勻的體尾交界處，滴加香柏油一滴，油鏡下分類計數(shù)。8采血完畢，用干棉球壓住傷口，止血片刻。2輕輕按摩采血部位。白細胞總數(shù)=4大格白細胞數(shù)（N）/4×10×20×1063將微量吸管插入抗凝血，拇、中指緩慢松勁（松動快血液會吸入吸頭），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有氣泡），吸管呈水平略下垂，松開示指；白細胞總數(shù)=4大格白細胞數(shù)（N）/4×10×20×1063將微量吸管插入抗凝血，拇、中指緩慢松勁（松動快血液會吸入吸頭），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有氣泡），吸管呈水平略下垂，松開示指；6拔出微量吸管棄入污物桶。=N÷20×109/L3.操作步驟（1）加稀釋液用移液管向小試管內加入0.38ml白細胞稀釋液。（2）采血、稀釋用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，釋放于小試管底部，用上部稀釋液洗凈吸管內余血，輕搖試管混勻，靜置等其溶血。（3）清潔計數(shù)板及蓋片（動作輕柔），夾持蓋片緣縱向前推輕放于兩側支持堤上。（4）充計數(shù)池將小試管輕微振蕩2min，立即以一次性微量吸管吸取混勻后的白細胞懸液，充入計數(shù)池內。靜置2-3min，使細胞沉于計數(shù)池底面。（5）調試顯微鏡將計數(shù)板放置載物臺上，選擇（4×

）低倍鏡，調節(jié)聚光器使光線較暗，調節(jié)旋鈕找到方格線，轉至低倍鏡（10×），調節(jié)光亮

。（6）計數(shù)低倍鏡下計數(shù)四角4個大方格內白細胞總數(shù)，壓線細胞數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。結果計算白細胞總數(shù)=4大格白細胞數(shù)（N）

/4×10×20×106

=N÷20×109/L用△.△×109/L（小數(shù)點后一位）表示5細胞計數(shù)原則大方格四邊壓線細胞數(shù)左不數(shù)右，數(shù)上不數(shù)下，弓形移動實驗報告內容原理試劑器材操作步驟實驗結果討論診斷學實驗二

白細胞分類1.分類原理：白細胞分類計數(shù)是將血液制備成涂片，瑞氏染色后顯微鏡下根據(jù)白細胞的形態(tài)特征進行分類計數(shù)。通常分類100個白細胞，計算得出各種白細胞所占百分比2.瑞氏染色原理：瑞氏染料溶于甲醇，離解為帶正電的堿性美蘭（M+）和帶負電的酸性伊紅（E-）離子。細胞的染色既有物理的吸附作用，又有化學的親和作用。各種細胞成分的化學性質不同，對染料的親和力也不一樣，故可呈不同的著色特點。3.器材光學顯微鏡推片，載玻片[試劑]Wright染液

Wright1.0g

甲醇600ml磷酸鹽緩沖液（PH6.4～6.8）香柏油[標本來源]EDTA-K2抗凝全血3．白細胞分類：細胞分布均勻的體尾交界處，滴加香柏油一滴，油鏡下分類計數(shù)。分類時要有秩序的連續(xù)進行，避免主觀選擇視野。通常分類計數(shù)100個白細胞，計算并報告各種白細胞所占比例。

結果記錄方式：Ne正一Ly正Mo正Eo正Ba正中性粒細胞（Ne）：在瑞氏染色血涂片上呈圓形，胞漿染粉紅色，核形一葉（桿狀核）至五葉不等，以三葉者多見，染成深紫紅色，胞漿中有許多細小均勻紫紅色顆粒。各類成熟白細胞的形態(tài)學：

嗜酸性粒細胞（Eo）：較中性粒細胞稍大，胞核多為兩葉，呈眼鏡、八字形，核染色質粗糙染深紫紅色，胞漿內充滿粗大均勻的嗜酸性顆粒，瑞氏染色時呈桔紅色，有折光性。

嗜堿性粒細胞（Ba）：胞漿中含有大小不等的嗜堿性顆粒，瑞氏染色時呈蘭黑色。于光學顯微鏡下常見胞漿中有小空泡，乃因嗜堿性顆粒易溶于水或因功能活動而脫顆粒所致；核呈淡紫紅色常看不清，呈桿狀或分葉狀。淋巴細胞（Ly）：胞體呈圓形，在成人血涂片中以小淋巴細胞為多見，核大呈深紫色致密而濃染，胞漿量極少；大淋巴細胞胞漿量較多，呈清澈的淡藍色，可見少量嗜苯胺藍顆粒，胞核圓或橢圓，常偏向細胞一側，染色較深。

3將微量吸管插入抗凝血，拇、中指緩慢松勁（松動快血液會吸入吸頭），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有氣泡），吸管呈水平略下垂，松開示指；（2）采血、稀釋用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，釋放于小試管底部，用上部稀釋液洗凈吸管內余血，輕搖試管混勻，靜置等其溶血。8采血完畢，用干棉球壓住傷口，止血片刻。（1）加稀釋液用移液管向小試管內加入0.于光學顯微鏡下常見胞漿中有小空泡，乃因嗜堿性顆粒易溶于水或因功能活動而脫顆粒所致；（6）計數(shù)低倍鏡下計數(shù)四角4個大方格內白細胞總數(shù)，壓線細胞數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。細胞的染色既有物理的吸附作用，又有化學的親和作用。瑞氏染色原理：瑞氏染料溶于甲醇，離解為帶正電的堿性美蘭（M+）和帶負電的酸性伊紅（E-）離子。原理：血液經(jīng)稀乙酸定量稀釋并破壞成熟紅細胞，在血細胞計數(shù)池內計數(shù)規(guī)定區(qū)域內的白細胞總數(shù)，換算成每升血液中白細胞數(shù)。毛細血管采血標準操作程序8采血完畢，用干棉球壓住傷口，止血片刻。6用干棉球擦去第一滴血。白細胞稀釋液：冰乙酸2.38ml白細胞稀釋液。1將帶孔乳膠吸頭輕輕套在微量吸管上，連接緊密不漏氣；嗜酸性粒細胞（Eo）：較中性粒細胞稍大，胞核多為兩葉，呈眼鏡、八字形，核染色質粗糙染深紫紅色，胞漿內充滿粗大均勻的嗜酸性顆粒，瑞氏染色時呈桔紅色，有折光性。5將微量吸管插入小試管底部，三指輕微用力慢慢排出血液，用上清液沖洗管內余血2-3次，輕搖試管混勻；3將微量吸管插入抗凝血，拇、中指緩慢松勁（松動快血液會吸入吸頭），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有氣泡），吸管呈水平略下垂，松開示指；3將微量吸管插入抗凝血，拇、中指緩慢松勁（松動快血液會吸入吸頭），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有氣泡），吸管呈水平略下垂，松開示指；白細胞稀釋液：冰乙酸2.原理：血液經(jīng)稀乙酸定量稀釋并破壞成熟紅細胞，在血細胞計數(shù)池內計數(shù)規(guī)定區(qū)域內的白細胞總數(shù)，換算成每升血液中白細胞數(shù)。

單核細胞（Mo）：在瑞氏染色涂片上為12～20μm，胞體圓形、橢圓形或不規(guī)則形；核形多種多樣，最重要的特點是染色質較細致疏松，呈絲網(wǎng)狀或條縷狀，著色較淡胞漿較多，淡蘭色，含大量細小塵土樣顆粒。正常成人外周血白細胞分類參考值：Ne50%～70%Ly20%～40%Mo3%～8%Eo0.5%～5%Ba0%～1%實驗報告原理方法各類細胞百分比報告討論3.操作步驟（1）加稀釋液用移液管向小試管內加入0.38ml白細胞稀釋液。（2）采血、稀釋用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，釋放于小試管底部，用上部稀釋液洗凈吸管內余血，輕搖試管混勻，靜置等其溶血。（3）清潔計數(shù)板及蓋片（動作輕柔），夾持蓋片緣縱向前推輕放于兩側支持堤上。（4）充計數(shù)池將小試管輕微振蕩2min，立即以一次性微量吸管吸取混勻后的白細胞懸液，充入計數(shù)池內。靜置2-3min，使細胞沉于計數(shù)池底面。（5）調試顯微鏡將計數(shù)板放置載物臺上，選擇（4×

）低倍鏡，調節(jié)聚光器使光線較暗，調節(jié)旋鈕找到方格線，轉至低倍鏡（10×），調節(jié)光亮

。（6）計數(shù)低倍鏡下計數(shù)四角4個大方格內白細胞總數(shù)，壓線細胞數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。結果計算白細胞總數(shù)=4大格白細胞數(shù)（N）

/4×10×20×106

=N÷20×109/L用△.△×109/L（小數(shù)點后一位）表示實驗報告內容原理試劑器材操作步驟實驗結果討論改良牛鮑血細胞計數(shù)板及專用蓋片、微量吸管、帶孔吸頭、1ML刻度移液管、小試管、潔凈軟紗布、干棉球、光學顯微鏡。分類原理：白細胞分類計數(shù)是將血液制備成涂片，瑞氏染色后顯微鏡下根據(jù)白細胞的形態(tài)特征進行分類計數(shù)。38ml白細胞稀釋液。白細胞總數(shù)=4大格白細胞數(shù)（N）/4×10×20×1062拇指和中指夾住吸頭中下端，示指蓋住吸頭小孔，拇、中指輕微擠壓排出適量空氣；（2）采血、稀釋用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，釋放于小試管底部，用上部稀釋液洗凈吸管內余血，輕搖試管混勻，靜置等其溶血。（3）清潔計數(shù)板及蓋片（動作輕柔），夾持蓋片緣縱向前推輕放于兩側支持堤上。細胞的染色既有物理的吸附作用，又有化學的親和作用?！鳌?09/L（小數(shù)點后一位）表示Eo0.10g/L亞甲藍3滴分類時要有秩序的連續(xù)進行，避免主觀選擇視野。嗜堿性粒細胞（Ba）：胞漿中含有大小不等的嗜堿性顆粒，瑞氏染色時呈蘭黑色。核形多種多樣，最重要的特點是染色質較細致疏松，呈絲網(wǎng)狀或條縷狀，著色較淡胞漿較多，淡蘭色，含大量細小塵土樣顆粒。瑞氏染色原理：瑞氏染料溶于甲醇，離解為帶正電的堿性美蘭（M+）和帶負電的酸性伊紅（E-）離子。EDTA-K2抗凝全血原理：血液經(jīng)稀乙酸定量稀釋并破壞成熟紅細胞，在血細胞計數(shù)池內計數(shù)規(guī)定區(qū)域內的白細胞總數(shù)，換算成每升血液中白細胞數(shù)。原理：血液經(jīng)稀乙酸定量稀釋并破壞成熟紅細胞，在血細胞計數(shù)池內計數(shù)規(guī)定區(qū)域內的白細胞總數(shù)，換算成每升血液中白細胞數(shù)。=N÷20×109/L于光學顯微鏡下常見胞漿中有小空泡，乃因嗜堿性顆粒易溶于水或因功能活動而脫顆粒所致；3．白細胞分類：細胞分布均勻的體尾交界處，滴加香柏油一滴，油鏡下分類計數(shù)。分類時要有秩序的連續(xù)進行，避免主觀選擇視野。通常分類計數(shù)100個白細胞，計算并報告各種白細胞所占比例。

結果記錄方式：Ne正一Ly正Mo正Eo正Ba正嗜堿性粒細胞（Ba）：胞漿中含有大小不等的嗜堿性顆粒，瑞氏染色時呈蘭黑色。于光學顯微鏡下常見胞漿中有小空泡，乃因嗜堿性顆粒易溶于水或因功能活動而脫顆粒所致；核呈淡紫紅色?？床磺澹蕳U狀或分葉狀。EDTA-K2抗凝全血瑞氏染色原理：瑞氏染料溶于甲醇，離解為帶正電的堿性美蘭（M+）和帶負電的酸性伊紅（E-）離子。38ml白細胞稀釋液。白細胞稀釋液：冰乙酸2.6拔出微量吸管棄入污物桶。（5）調試顯微鏡將計數(shù)板放置載物臺上，選擇（4×）低倍鏡，調節(jié)聚光器使光線較暗，調節(jié)旋鈕找到方格線，轉至低倍鏡（10×），調節(jié)光亮。原理：血液經(jīng)稀乙酸定量稀釋并破壞成熟紅細胞，在血細胞計數(shù)池內計數(shù)規(guī)定區(qū)域內的白細胞總數(shù)，換算成每升血液中白細胞數(shù)。EDTA-K2抗凝全血（4）充計數(shù)池將小試管輕微振蕩2min，立即以一次性微量吸管吸取混勻后的白細胞懸液，充入計數(shù)池內。38ml白細胞稀釋液。白細胞稀釋液：冰乙酸2.嗜酸性粒細胞（Eo）：較中性粒細胞稍大，胞核多為兩葉，呈眼鏡、八字形，核染色質粗糙染深紫紅色，胞漿內充滿粗大均勻的嗜酸性顆粒，瑞氏染色時呈桔紅色，有折光性。核呈淡紫紅色?？床磺澹蕳U狀或分葉狀。2輕輕按摩采血部位。2輕輕按摩采血部位。靜置2-3min，使細胞沉于計數(shù)池底面。細胞的染色既有物理的吸附作用，又有化學的親和作用。5將微量吸管插入小試管底部，三指輕微用力慢慢排出血液，用上清液沖洗管內余血2-3次，輕搖試管混勻；加蒸餾水至100ml（5）調試顯微鏡將計數(shù)板放置載物臺上，選擇（4×）低倍鏡，調節(jié)聚光器使光線較暗，調節(jié)旋鈕找到方格線，轉至低倍鏡（10×），調節(jié)光亮。大方格四邊壓線細胞數(shù)左不數(shù)右，數(shù)上不數(shù)下，=N÷20×109/L（5）調試顯微鏡將計數(shù)板放置載物臺上，選擇（4×）低倍鏡，調節(jié)聚光器使光線較暗，調節(jié)旋鈕找到方格線，轉至低倍鏡（10×），調節(jié)光亮。大淋巴細胞胞漿量較多，呈清澈的淡藍色，可見少量嗜苯胺藍顆粒，胞核圓或橢圓，常偏向細胞一側，染色較深。6用干棉球擦去第一滴血。白細胞總數(shù)=4大格白細胞數(shù)（N）/4×10×20×10638ml白細胞稀釋液。1將帶孔乳膠吸頭輕輕套在微量吸管上，連接緊密不漏氣；=N÷20×109/LLy20%～40%38ml白細胞稀釋液。5用無菌刺針穿刺取血，動作應迅速，深度2～3mm，稍加擠壓以血液流出為宜。5將微量吸管插入小試管底部，三指輕微用力慢慢排出血液，用上清液沖洗管內余血2-3次，輕搖試管混勻；EDTA-K2抗凝全血1采血部位成人以左手無名指內側為宜，半歲以下嬰幼兒通常自拇指內側或足跟兩側采血。3將微量吸管插入抗凝血，拇、中指緩慢松勁（松動快血液會吸入吸頭），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有氣泡），吸管呈水平略下垂，松開示指；分類時要有秩序的連續(xù)進行，避免主觀選擇視野。5將微量吸管插入小試管底部，三指輕微用力慢慢排出血液，用上清液沖洗管內余血2-3次，輕搖試管混勻；白細胞總數(shù)=4大格白細胞數(shù)（N）/4×10×20×106白細胞總數(shù)=4大格白細胞數(shù)（N）/4