高純度質(zhì)粒小提中量試劑盒說(shuō)明方案-天根

1.柱平衡步驟：向吸附柱CP4中（吸附柱放入收集管中）加入500吐的平衡液BL,12000rpm（?13400g）離心 1min,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。（請(qǐng)使用當(dāng)天處理過(guò)的柱子）.取5-15ml過(guò)夜培養(yǎng)的菌液加入離心管中， 12000rpm（~13400g）離心1min，盡量吸除上清。.注意：菌液較多時(shí)可以通過(guò)幾次離心將菌體沉淀收集到一個(gè)離心管中，菌體量以能夠充分裂解為佳，過(guò)多的菌體裂解不充分會(huì)降低質(zhì)粒的提取效率。.向留有菌體沉淀的離心管中加入 500DL溶液Pl（□先檢查是否已加入RNaseA），使用移液器或渦旋振蕩器徹底懸浮細(xì)菌細(xì)胞沉淀。.注意：請(qǐng)務(wù)必徹底懸浮細(xì)菌沉淀，如果有未徹底混勻的菌塊會(huì)影響裂解，導(dǎo)致提取量和純度偏低。質(zhì)粒.向離心管中加入 500吐溶液P2，溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8次使菌體充分裂解?？谝猓簻睾偷鼗旌喜灰?jiǎng)×艺鹗帲?以免污染基因組 DNA口此時(shí)菌液應(yīng)變得清亮粘稠，所用時(shí)間不應(yīng)超過(guò) 5min,以免質(zhì)粒受到破壞。如果未變得清亮，可能由于菌體過(guò)多，裂解不徹底，應(yīng)減少菌體量。.向離心管中加入 700DL溶液P3，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6—8次，充分混口，口時(shí)會(huì)出現(xiàn)白色絮狀沉淀。 12000rpm（?13400g）離心10min,此時(shí)在離心管底部形成沉淀。.注意：P3加入后應(yīng)立即混合,避免產(chǎn)生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀,可再次離心后取上清。.將上一步收集的上清液分次加入過(guò)濾柱 Cs（過(guò)濾柱放入收集管中） ,12000rpm（?13400g）離心2min,小心地將離心后收集管中得到的溶液分次加入吸附柱CP4中（吸附柱放入收集管中）,（如果過(guò)濾柱中有殘余的液體說(shuō)明步驟5CP4中（吸附柱放入收集管中）,（如果過(guò)濾柱中有殘余的液體說(shuō)明步驟5吸取的上清中雜質(zhì)過(guò)多，可以延長(zhǎng)離心的時(shí)間；如果離心后收集管底部有少量的沉淀．盡量地吸取上清)CP4放入收10.12000rpm(?13400g)離心 lmin,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP4放入收集管中。11.0000CP4中加入 500吐去蛋白液PD,12000rpm(?13400g)離心 lmin,倒口收集管中的廢液，將吸附柱 CP4放入收集管中。12.0000CP4中加入 600吐漂洗液 PWl請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇) ,12000rpm(?13400g)離心 1min,倒掉收集管中的廢液，將000 CP4放入收集管中。注意：加入漂洗液 PW后，如果室溫靜置 2-5min,有助于更好地去除口質(zhì)。13.0000CP4質(zhì)。13.0000CP4中加入 600口L漂洗液收集管中的廢液。14.0000CP4重新放回收集管中置于將000中殘余的漂洗液去除。15.注意：漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)(酶切、下游實(shí)驗(yàn)不受殘留乙醇的影響，建議0000以徹底晾干00材料中殘余的漂洗液。16.0000自科置于一個(gè)干凈的離100-300吐洗脫緩沖液TB,00000質(zhì)粒溶液收集到離心管中。PW,12000rpm113400g）離心 lmin,倒掉12000rpm1~13400g）離心 2min,目的是PCR等）實(shí)驗(yàn)。為確保CP400,0000000 min,心管中,000口的中間部位懸空滴加2min,12000rpm（~13400g）離心lmin17.注意：為了增加質(zhì)粒的回收效率,可0得到的溶液重新加入離心000中．重復(fù)步驟12。洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液,應(yīng)保證其pH值在其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)(可以用NaOH0水的pH值調(diào)到此范圍)pH值低1001L,體積過(guò)小影響回收于7.01001L,體積過(guò)小影響回收效率。且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。質(zhì)粒DNA濃度及純度檢測(cè):得到的質(zhì)粒DNA可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。電泳可能為單一條帶，也可能為 2到3條DNA條帶，這主要與提取物培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)短、提取時(shí)操作劇烈程度等有關(guān)。 OD260值為l相當(dāng)于大約50Dg/m